MCA-3D

A linhagem celular MCA-3D é derivada de culturas epidérmicas primárias de camundongo que apresentam resistência à diferenciação terminal induzida pelo cálcio. Essas células foram inicialmente tratadas com os carcinógenos N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) ou 7,12-dimetilbenz[a]antraceno (DMBA), e, posteriormente, expostas ao 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA). A resistência à diferenciação terminal foi avaliada por meio do aumento dos níveis de cálcio no meio de cultura para 1,2 mM, o que permite seletivamente o crescimento de células transformadas, enquanto as células normais, tipicamente, sofrem diferenciação terminal e morte.

A linhagem celular MCA-3D apresenta morfologia epitelial e forma colônias bem definidas em cultura. A análise ultraestrutural revela que as células MCA-3D contêm filamentos de queratina e desmossomos, o que é indicativo de sua origem epitelial e sugere a manutenção de algum grau de diferenciação normal dos queratinócitos. No entanto, a abundância exata dessas estruturas pode variar entre as subpopulações da linha.

As células MCA-3D foram testadas quanto à tumorigênese por meio de injeção subcutânea em recém-nascidos Balb/c singênicos, com resultados indicando que essa linhagem não é tumorigênica, mesmo após cultura prolongada em condições de alto teor de cálcio. Além disso, as células MCA-3D não crescem em ágar mole, o que reforça ainda mais seu fenótipo não maligno. Ensaios bioquímicos para a atividade da gama-glutamiltranspeptidase (GGT) e da transglutaminase demonstraram que as células MCA-3D são negativas para GGT, e sua atividade transglutaminase não se correlaciona com o potencial tumorigênico, o que está em consonância com sua classificação como não tumorigênicas.

De modo geral, a linhagem celular MCA-3D serve como modelo para o estudo dos estágios iniciais da carcinogênese e dos fatores que influenciam a progressão de lesões pré-neoplásicas para tumores totalmente malignos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.