MCA-3D

A linha celular MCA-3D é derivada de culturas epidérmicas primárias de ratinho que apresentam resistência à diferenciação terminal induzida pelo cálcio. Estas células foram inicialmente tratadas com os carcinogéneos N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) ou 7,12-dimetilbenz[a]antraceno (DMBA) e subsequentemente expostas a 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA). A resistência à diferenciação terminal foi avaliada através da elevação dos níveis de cálcio no meio de cultura para 1,2 mM, o que permite seletivamente o crescimento de células transformadas, enquanto as células normais sofrem tipicamente diferenciação terminal e morte.

A linha celular MCA-3D apresenta uma morfologia epitelial e forma colónias bem definidas em cultura. A análise ultra-estrutural revela que as células MCA-3D contêm filamentos de queratina e desmossomas, que são indicativos da sua origem epitelial e sugerem a manutenção de algum grau de diferenciação normal dos queratinócitos. No entanto, a abundância exacta destas estruturas pode variar entre subpopulações dentro da linha.

As células MCA-3D foram testadas quanto à sua tumorigenicidade por injeção subcutânea em recém-nascidos Balb/c singénicos, com resultados que indicam que esta linha não é tumorigénica, mesmo após cultura prolongada em condições de elevado teor de cálcio. Para além disso, as células MCA-3D não crescem em ágar macio, o que apoia ainda mais o seu fenótipo não maligno. Os ensaios bioquímicos da atividade da gama glutamil transpeptidase (GGT) e da atividade da transglutaminase demonstraram que as células MCA-3D são negativas para a GGT e que a sua atividade da transglutaminase não está correlacionada com o potencial tumorigénico, o que está de acordo com a sua classificação não tumorigénica.

Globalmente, a linha celular MCA-3D serve de modelo para o estudo das fases iniciais da carcinogénese e dos factores que influenciam a progressão de lesões pré-neoplásicas para tumores totalmente malignos.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia