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O-342
Tecido
Ovário
Doença
Adenocarcinoma

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O-342

Cell line · Número do produto 500305

The O-342 cell line is derived from a rat ovarian tumor and is widely used in cancer research, particularly in studies focusing on ovarian cancer and chem...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular O-342 é derivada de um tumor ovariano de ratos e é amplamente utilizada na investigação sobre o cancro, particularmente em estudos focados no cancro do ovário e na resistência à quimioterapia. Esta linha celular é caracterizada pela sua capacidade de crescer numa monocamada e entrar na fase logarítmica de crescimento aproximadamente 24 horas após a semeadura, com um tempo de duplicação da população celular de cerca de 24 horas. A linha celular O-342 serve como linha parental para várias sublinhas, incluindo a sublinha O-342/DDP resistente à cisplatina, que foi desenvolvida através do aumento gradual das concentrações de cisplatina in vitro.

As células O-342 exibem heteroploidia na sua estrutura cromossómica, o que contrasta com o cariótipo quase diploide observado na sublinha O-342/DDP. Esta alteração cariotípica é indicativa da pressão seletiva exercida pela exposição contínua à cisplatina, que elimina a subpopulação sensível à cisplatina, resultando na predominância de células resistentes. Análises bioquímicas mostraram que as células O-342/DDP possuem um aumento de 33 vezes na resistência à cisplatina em comparação com as células O-342 parentais. Essa resistência reflete-se nos valores de ID50, com as células O-342/DDP apresentando um ID50 de 33 μM em comparação com 1 μM nas células O-342.

Estudos adicionais revelaram que as células O-342/DDP têm níveis significativamente mais elevados de glutationa total intracelular (GSH+GSSG) a 3,04 nmol/106 células, em comparação com 1,37 nmol/106 células nas células O-342. Os níveis aumentados de glutationa estão associados a capacidades de desintoxicação melhoradas, contribuindo para a quimiorresistência observada nas células O-342/DDP. Além disso, após o tratamento com cisplatina, as ligações cruzadas entre cadeias de ADN e as quebras de cadeia simples são significativamente mais elevadas nas células O-342 parentais do que nas células O-342/DDP resistentes, indicando uma capacidade aumentada de reparação do ADN na sublinha resistente.

No geral, a linha celular O-342, juntamente com a sua sublinha resistente à cisplatina O-342/DDP, fornece um modelo robusto para investigar os mecanismos de quimiorresistência no cancro do ovário. Estas linhas celulares são inestimáveis para identificar potenciais alvos terapêuticos e desenvolver estratégias para superar a resistência à quimioterapia, melhorando assim os resultados do tratamento para pacientes com cancro do ovário.

Tecido
Ovário
Doença
Adenocarcinoma

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial

04Identificadores

Referência
O-342 (número de catálogo Cytion 500305)
Número de identificação fiscal do NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_5847

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
EMEM (MEM Eagle), com: 2 mM L-Glutamina, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS (número de artigo Cytion 820100a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS e 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Raça / subespécie
BDIx