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RG2
Tecido
Cérebro
Doença
Glioma maligno do rato
Sinónimos
RG-2, Rat Glioma-2, D74, D74-RG2

Documentos

RG2

Cell line · Número do produto 300649

The RG2 cell line is derived from a chemically induced glioma in Fischer 344 rats. Generated via transplacental administration of N-ethyl-N-nitrosourea (E...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular RG2 é derivada de um glioma induzido quimicamente em ratos Fischer 344. Gerados através da administração transplacentária de N-etil-N-nitrosoureia (ENU), os gliomas RG2 são classificados como gliomas anaplásicos devido ao seu padrão de crescimento invasivo, elevado índice mitótico e morfologia indiferenciada. Estes tumores são notáveis pela sua letalidade consistente in vivo e pela sua capacidade de crescer em hospedeiros singénicos sem provocar uma resposta imunitária significativa. Esta baixa imunogenicidade faz do RG2 um modelo ideal para estudar tumores semelhantes ao glioblastoma e testar terapias experimentais em ambientes imunocompetentes.

As células do glioma RG2 apresentam caraterísticas típicas dos gliomas de alto grau, incluindo uma rápida proliferação, capacidade invasiva e alterações genómicas. Os estudos efectuados destacaram a perda de genes supressores de tumores, como o CDKN2A, juntamente com vias desreguladas que envolvem a sinalização PDGF, Ras e IGF. A linha celular cresce como células fusiformes indiferenciadas in vitro, mantendo o seu potencial tumorigénico quando implantada intracranialmente, onde apresentam invasão difusa no tecido cerebral normal, imitando o comportamento do glioblastoma humano.

Esta linha celular tem sido amplamente utilizada na investigação pré-clínica para avaliar a eficácia de várias abordagens terapêuticas, incluindo quimioterapia, radioterapia, terapia genética e imunoterapia. Os gliomas RG2 são particularmente valiosos para testar novos métodos de administração de fármacos, como a administração melhorada por convecção (CED), e para investigar os mecanismos de rutura da barreira hemato-encefálica nos gliomas. A sua semelhança histopatológica e molecular com os glioblastomas humanos sublinha a sua utilidade na neuro-oncologia translacional.

Tecido
Cérebro
Doença
Glioma maligno do rato
Aplicações
cultura de células 3D, Neurociência
Sinónimos
  • RG-2
  • Rat Glioma-2
  • D74
  • D74-RG2

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Não especificado
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Glial
Tumorigénico
Sim, em ratos CD Fischer

04Identificadores

Referência
RG2 (número de catálogo Cytion 300649)
Número de identificação fiscal do NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_3581

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Raça / subespécie
Fischer 344
Idade do dador
20 dias após a gestação