- Tissue
- Poumon
- Disease
- Carcinome pulmonaire à petites cellules
- Metastatic site
- Épanchement pleural
- Synonyms
- NCI-H-82, H82, H-82, NCI H82, NCIH82, H82sclc
Documents
01General information
- Description
- La lignée cellulaire NCI-H82 a été isolée par A.F. Gazdar et ses collaborateurs en 1978 à partir du liquide pleural d’un patient atteint d’un cancer du poumon à petites cellules. La morphologie de la tumeur d’origine n’était pas caractéristique du CPPC. Cette lignée est une variante biochimique et morphologique du SCLC qui exprime l’énolase spécifique aux neurones et l’isoenzyme cérébrale de la créatine kinase. Elle ne présente pas de concentrations détectables de L-DOPA décarboxylase ni de bombésine. Les cellules produisent un ARNm de p53 de taille anormale (3,7 kb). Les séquences d’ADN de c-myc sont amplifiées d’environ 25 fois, et on observe une augmentation de 24 fois de l’ARN de c-myc par rapport aux cellules normales. Les cellules exprimeraient des récepteurs ANP fonctionnels, mais le traitement par l’ANP ne modifie pas leur profil de croissance. Les cellules présentent une coloration positive pour les neurofilaments et la vimentine. On observe une expression des ARNm de v-fes, v-fms, Ha-ras, Ki-ras, N-ras et c-raf 1.
- Tissue
- Poumon
- Disease
- Carcinome pulmonaire à petites cellules
- Metastatic site
- Épanchement pleural
- Synonyms
- NCI-H-82
- H82
- H-82
- NCI H82
- NCIH82
- H82sclc
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Suspension
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De type épithélial
- Tumourigenic
- Oui, il forme des tumeurs transplantables présentant une histologie atypique de la tumeur pulmonaire à petites cellules (SCLC) chez la souris nue.
- Karyotype
- Il s'agit d'une lignée cellulaire humaine quasi-triploïde. Le nombre modal de chromosomes est de 58, observé dans 44 % des cas, avec une polyploïdie de 3 %. Chaque cellule possédait deux copies d'un chromosome X normal. Le chromosome Y n'a pas été détecté dans les préparations en bandes Q.
04Identifiers
- Citation
- NCI-H82 (numéro de catalogue Cytion 300442)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1591
05Expression and susceptibility
- Receptors expressed
- Récepteur du facteur de croissance analogue à l'insuline II (IGF II), peptide natriurétique auriculaire (ANP)
- Protein expression
- P53 positif
- Isoenzymes
- G6PD, B, PGM1, 1-2, PGM3, 1-2, ES-D, 1, Me-2, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1, produit de la fréquence des phénotypes = 0,0082
06Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, contenant 2,0 mM de glutamine stable et 2,0 g/L de NaHCO₃ (numéro d'article Cytion 820700a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmosphère humidifiée.
- Supplements
- Ajouter 10 % de FBS au milieu de culture
- Subculturing
- Entretenir les cultures en ajoutant ou en remplaçant périodiquement le milieu de culture. Démarrer les cultures à une densité de 5 × 10⁵ cellules/ml et maintenir la concentration cellulaire dans une fourchette comprise entre 3 × 10⁵ et 1 × 10⁶ cellules/ml pour une croissance optimale.
- Fluid renewal
- 2 à 3 fois par semaine
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.
Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.
- Freeze medium
- Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (contenant du sérum fœtal bovin) + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation, ou du CM-1 (référence Cytion 800100), qui contient des osmoprotecteurs et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
- Storage conditions
Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.
- Shipping conditions
Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.
08Donor
- Donor age
- 41 ans
- Ethnicity
- caucasien
09Legal and safety
- Safety precautions
- Lorsqu’on prévoit entreposer un cryotube dans de l’azote liquide en vue d’une décongélation ultérieure, il est impératif de respecter des mesures de sécurité rigoureuses. Le port de gants et de vêtements de protection appropriés est essentiel, et l’utilisation d’un masque facial ou de lunettes de protection est obligatoire lors du transfert d’échantillons congelés vers ou depuis le réservoir d’azote liquide. Cette précaution vise à réduire le risque de blessure causé par d’éventuelles explosions de cryotubes lors de leur retrait, pouvant entraîner la projection de fragments coupants.
- Warranty
Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.
Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.
- Material Transfer Agreement required
- Yes
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