- Tissue
- Pulmão
- Disease
- Carcinoma de pequenas células do pulmão
- Metastatic site
- Derrame pleural
- Synonyms
- NCI-H-82, H82, H-82, NCI H82, NCIH82, H82sclc
Documents
01General information
- Description
- A linhagem celular NCI-H82 foi isolada por A.F. Gazdar e colaboradores em 1978 a partir do líquido pleural de um paciente com câncer de pulmão de pequenas células. A morfologia do tumor original não era característica do SCLC. A linha é uma variante bioquímica e morfológica do SCLC que expressa a enolase específica de neurônios e a isoenzima cerebral da creatina quinase. Ela não apresenta níveis detectáveis de L-DOPA descarboxilase ou bombesina. As células produzem um mRNA de p53 de tamanho anormal (3,7 kb). As sequências de DNA do c-myc estão amplificadas cerca de 25 vezes, e há um aumento de 24 vezes no RNA do c-myc em relação às células normais. Relata-se que as células expressam receptores funcionais de ANP, mas o tratamento com ANP não altera seu padrão de crescimento. As células apresentam coloração positiva para neurofilamentos e vimentina. Há expressão dos mRNAs de v-fes, v-fms, Ha-ras, Ki-ras, N-ras e c-raf 1.
- Tissue
- Pulmão
- Disease
- Carcinoma de pequenas células do pulmão
- Metastatic site
- Derrame pleural
- Synonyms
- NCI-H-82
- H82
- H-82
- NCI H82
- NCIH82
- H82sclc
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Suspension
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De tipo epitelial
- Tumourigenic
- Sim, forma tumores transplantáveis com histologia atípica de SCLC em camundongos nude
- Karyotype
- Esta é uma linhagem celular humana quase triploide. O número modal de cromossomos é 58, ocorrendo em 44% dos casos, com poliploidia em 3%. Cada célula apresentava duas cópias de um cromossomo X normal. O cromossomo Y não foi detectado nas preparações com banda Q.
04Identifiers
- Citation
- NCI-H82 (número de catálogo da Cytion 300442)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1591
05Expression and susceptibility
- Receptors expressed
- Receptor do fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF II), peptídeo natriurético atrial (ANP)
- Protein expression
- P53 positivo
- Isoenzymes
- G6PD, B, PGM1, 1-2, PGM3, 1-2, ES-D, 1, Me-2, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1, Produto da frequência fenotípica = 0,0082
06Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, com 2,0 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃ (número de artigo da Cytion: 820700a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
- Supplements
- Adicione 10% de FBS ao meio
- Subculturing
- Mantenha as culturas adicionando ou substituindo periodicamente o meio. Inicie as culturas com uma densidade de 5 x 10⁵ células/ml e mantenha a concentração celular dentro do intervalo de 3 x 10⁵ a 1 x 10⁶ células/ml para um crescimento ideal.
- Fluid renewal
- 2 a 3 vezes por semana
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.
Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.
- Freeze medium
- Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% de DMSO para garantir viabilidade adequada após o descongelamento, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
- Storage conditions
Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.
- Shipping conditions
As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
08Donor
- Donor age
- 41 anos
- Ethnicity
- caucasiano
09Legal and safety
- Safety precautions
- Ao planejar o armazenamento de um criotubo em nitrogênio líquido para descongelamento futuro, é obrigatório seguir medidas de segurança rigorosas. É essencial o uso de luvas e roupas de proteção adequadas, além do uso obrigatório de máscara facial ou óculos de proteção durante a transferência de amostras congeladas para dentro ou para fora do tanque de nitrogênio líquido. Isso visa mitigar o risco de ferimentos decorrentes de possíveis explosões dos criotubos durante a remoção, o que pode resultar na projeção de fragmentos pontiagudos.
- Warranty
Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.
Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.
- Material Transfer Agreement required
- Yes
.jpg)
.jpg)
.jpg)
