תאי רמוס – מחקר על לימפומה של תאי B: חשיבותם של תאי רמוס

תאי רמוס הם קו תאים של לימפוציטים מסוג B הנמצא בשימוש נרחב במחקר הביו-רפואי. הם משמשים בעיקר במחקר בתחום האימונולוגיה ובמחקר הסרטן. חוקרים משתמשים בתאים אלה להערכת תרופות ציטוטוקסיות ולחקר אנטיגנים על פני תאי B, מוטציות ומנגנוני אפופטוזיס.

מקור ותכונות כלליות של תאי רמוס

הבנת מקורו ותכונותיו העיקריות של קו תאים ממלאת תפקיד מכריע בקביעת התאמתו למחקר שלכם. לכן, מומלץ לבחון מידע זה ביסודיות לפני תחילת כל עבודה עמו. סעיף זה עוסק בשאלות הנפוצות הבאות: מהו קו תאי הסרטן Ramos? מהו קו התאים Ramos CD19? מהו קו התאים Ramos CD20? מהו מקורם של תאי Ramos? מה הם הסמנים בקו התאים Ramos? מהו גודל תאי Ramos? מהו המורפולוגיה של קו התאים Ramos?

• קו התאים Ramos הוקם בשנת 1972. תאים אלה הופקו מנוזל הצפק של ילד לבן בן 3 הסובל מלימפומה מסוג בורקיט אמריקאי [1].
• הם מבטאים סמנים מרכזיים של תאי B, כולל אימונוגלובולין M (IgM), CD19, CD20 ו-CD22.
• תאי רמוס הם תאים שליליים לנגיף אפשטיין-בר. עם זאת, ניתן להפוך אותם באופן קבוע לתאים חיוביים לנגיף אפשטיין-בר.
• לתאי לימפובלסט B אלה צורה עגולה.

תאי "רמוס כחולים" לעומת תאי B מסוג רמוס

תאי רמוס הכחולים ותאי רמוס מסוג B הם שניהם תאי לימפומה מסוג בורקיט אנושיים. שניהם שליליים לנגיף אפשטיין-בר. ההבדל בין תאים אלה הוא שתאי רמוס הכחולים מבטאים גן-דיווח הניתן להפעלה על ידי NF-κB/AP-1 המכונה SEAP (פוספטאז אלקלי עוברי מופרש), בעוד שתאי רמוס הלבנים אינם מבטאים אותו.

אנימציה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה הממחישה את הדינמיקה של לימפוציט B.

גידול תאי רמוס

חלק זה של המאמר נועד לסייע לכם ללמוד מידע חיוני בנושא תרבית תאי רמוס. כאן תוכלו ללמוד: מהו זמן הכפלת קווי התאים? מהו המדיום המומלץ? כיצד מגדלים תאי רמוס?

נקודות מרכזיות בגידול תאי רמוס

זמן הכפלה:

זמן הכפלה של תאי רמוס הוא כ-20.4 ± 1.5 שעות. עם זאת, הוא עשוי להשתנות בהתאם לתנאי תרבית התאים המסופקים.

תאים דבקים או בתמיסה:

תאי רמוס גדלים בתמיסה.

צפיפות תאים:

צפיפות התאים האופטימלית עבור קו התאים Ramos היא 3 x 10^⁵ תאים/מ"ל. לצורך תרבית משנה, התאים המרחפים נאספים באמצעות צנטריפוגה. מוסיפים לתאים מצע טרי ומערבבים אותם בזהירות. לאחר מכן, התאים הועברו לצלחת חדשה בצפיפות של 3 עד 9 x 10^⁵ תאים/מ"ל.

מדיום גידול:

לגידול תאי רמוס משתמשים ב-RPMI 1640 בתוספת 10% סרום עגלי, 2.1 מ"מ גלוטמין יציב ו-2.0 גרם/ליטר NaHCO3. יש להחליף את התרבית פעמיים בשבוע.

תנאי גידול:

קו התאים של לימפומה מסוג בורקיט אנושי (Ramos) נשמר באינקובטור לח עם 5% CO₂ ובטמפרטורה של 37°C.

אחסון:

תאי Ramos מוקפאים נשמרים בטמפרטורה הנמוכה מ-150 מעלות צלזיוס או בשלב האדי של חנקן נוזלי כדי לשמור על חיוניות התאים לטווח ארוך יותר.

תהליך ההקפאה והמדיום:

מומלץ להשתמש במדיום ההקפאה CM-1 או CM-ACF עבור תאי Ramos. נעשה שימוש בתהליך הקפאה איטי המאפשר ירידה הדרגתית של 1 מעלת צלזיוס בדקה. הקפאה איטית זו מגנה על התאים מפני זעזועים ומשפרת את חיוניותם.

תהליך ההפשרה:

לצורך ההפשרה, התאים הקפואים מוחזקים באמבט מים שחומם מראש לטמפרטורה של 37°C למשך 40 עד 60 שניות, עד שנותר גוש קרח קטן. לאחר מכן, מוסיפים מדיום טרי ומרכזים את התאים כדי להסיר את מרכיבי מדיום ההקפאה. את המשקע מערבבים שוב והתאים מועברים לצלחת חדשה המכילה מדיום תרבית.

רמת בטיחות ביולוגית:

מעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 1 חיונית לשמירה על תרבויות תאי רמוס שליליות לנגיף אפשטיין-בר. עם זאת, רמת הבטיחות הביולוגית עולה לרמה 2 כאשר תאי רמוס הופכים באופן קבוע לחיוביים לנגיף אפשטיין-בר.

קו תאים של לימפוציטים מסוג B מתרבים מסוג רמוס בתמיסה, המוצג בהגדלה של 10x ו-20x.

תאי רמוס: יתרונות ומגבלות

כמו קווי תאים אחרים, גם לתאי רמוס יש יתרונות ומגבלות מובהקים. בסעיף זה נבחן כמה מהם הבולטים, העשויים להשפיע באופן משמעותי על השימוש בהם במחקר.

יתרונות

• מודל תאי לימפומה מסוג בורקיט: תאי רמוס פותחו מחולה בלימפומה מסוג בורקיט, מה שהופך אותם למודל תאי רלוונטי לחקר ממאירויות לימפואידיות.
• גידול קל: תאי רמוס קלים לגידול ולתחזוקה במעבדה. דרישות ותנאי הגידול שלהם פשוטים.

מגבלות

• מודל במבחנה: ייתכן שתאי Ramos אינם מייצגים באופן מלא את המורכבות הגנטית של הגידולים אצל החולים, דבר המגביל את ישימותם. יתר על כן, תוצאות הניסויים המשתמשים בקו התאים Ramos עשויות שלא לשקף במלואן את התנאים in vivo, מה שעלול להוביל לאתגרים בתרגום המחקר לקליניקה.

 יישומים של תאי Ramos במחקר

תאי Ramos מציעים יישומים מבטיחים בתחום הביו-רפואה. בין השימושים המחקריים החיוניים בתאי Ramos נכללים:

• ביולוגיה של לימפומה: תאי Ramos נמצאים בשימוש נרחב לחקר הביולוגיה של לימפומה. הם משמשים לחקר הגורמים הגנטיים והמולקולריים העומדים בבסיס ממאירויות לימפואידיות. בנוסף, חוקרים מפיקים תובנות לגבי התפתחות המחלה, התקדמותה והטרוגניותה באמצעות תאי לימפומה מסוג בורקיט אלה. כמו כן, נחקרות מוטציות גנטיות ומסלולי איתות, דבר שעשוי להוביל לפיתוח גישות אבחון וטיפול מדויקות יותר. מחקר שנערך בשנת 2019 מצא כי עיכוב האצטילטרנספראז של ההיסטון GCN5 (General control non-depressible 5) מפחית את היכולת הגידולית של תאי לימפומה מסוג בורקיט אנושיים (רמוס) באמצעות שיבוש מסלול האיתות של BCR. לפיכך, הוצע כי GCN5 מהווה יעד אפשרי לפיתוח טיפול תרופתי בלימפומה [2].
• סינון ובדיקת תרופות: קו התאים Ramos נמצא בשימוש נרחב למטרות סינון ובדיקת תרופות. חוקרים מעריכים את היעילות של תרכובות טיפוליות פוטנציאליות בעיכוב התרבות וצמיחת התאים ובגרימת מוות תאי בתאי לימפומה. הדבר מסייע בזיהוי מועמדים מבטיחים לתרופות, ובכך מקל על פיתוח טיפולים ממוקדים לחולי לימפומה. למשל, מחקר הראה שתמצית מתנולית מקליפת פרי האנונה, מבשרו ומזרעיו הפגינה השפעה מתונה, בעוד שתמצית כלורופורם הפגינה השפעה חזקה על התרבות תאי Ramos. לפיכך, המחקר הציע כי פירות האנונה עשויים להתגלות כיעילים במניעה ובטיפול בלימפומה [3].

תאי רמוס למחקר שלכם

פרסומים העוסקים בתאי רמוס

חלק זה של המאמר מפרט מספר פרסומים מחקריים מעניינים העוסקים בקו התאים Ramos:

איתות רציף של CD 79b ו-CD 19 נדרש לכשירותם של תאי B בלימפומה מסוג בורקיט

מחקר זה פורסם בכתב העת The EMBO journal בשנת 2018. המחקר מצא שתאי B מסוג Ramos זקוקים לביטוי הסמנים CD19 ו-CD79b (רכיב האיתות BCR Igβ) של תאי Ramos לצורך תפקודם התקין וצמיחתם התחרותית.

חומרים המדמים את Smac ו-TRAIL פועלים יחד כדי לגרום לנקרפטוזיס תלוי-MLKL בקווי תאים של לימפומה מסוג בורקיט

מחקר זה, שפורסם בכתב העת Neoplasia (2021), השתמש בתאי Ramos והציע כי תחום הקינאז של השושלת המעורבת (MLKL) מוסדר באופן אפיגנטי בתאי לימפומה מסוג בורקיט (Ramos). לפיכך, זהו סמן פרוגנוסטי מבטיח להצלחת הטיפול בטיפולים הקשורים לנקרפטוזיס.

זרחון של PBK/TOPK Tyr74 על ידי JAK2 מקדם את צמיחת הגידול בלימפומה מסוג בורקיט

מאמר מחקר זה, שפורסם ב-Cancer Letters (2022), הציע כי ציר האיתות JAK2/TOPK/היסטון H3 ממלא תפקיד מכריע בשגשוג קווי תאי לימפומה מסוג B במבחנה.

מתח ברשתית האנדופלזמית (ER) המושרה על ידי ורוטוקסין-1 מפעיל מסלולי אפופטוזיס או הישרדות בתאי לימפומה מסוג בורקיט

מאמר זה פורסם בשנת 2020 בכתב העת Toxins. המחקר הציע כי טיפול ב-verotoxin-1 גורם למתח ברשתית האנדופלזמית (ER) בתאי B מסוג Ramos. דבר זה מוביל להפעלת מסלולי איתות אפופטוטיים או של הישרדות בקווי תאי לימפומה.

סילימרין מעכב את ביטוי הגן של קולטן Toll-like 8 ואת האפופטוזיס בקו תאי הסרטן Ramos

מחקר זה, שפורסם בכתב העת Avicenna Journal of Phytomedicine (2020), דיווח כי תרכובת טבעית, סילימרין, מדכאת את הביטוי של TLR8 (קולטן דמוי טול 8) ואת האפופטוזיס בקו התאים Ramos.

משאבים בנושא קו התאים Ramos: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

להלן מספר משאבים מקוונים בנושא תאי Ramos:

• טרנספקציה של תאי Ramos: מסמך זה יסייע לכם ללמוד את הפרוטוקול לטרנספקציה של קו התאים Ramos.

הקישור הבא מכיל את הפרוטוקול לגידול תרבית תאי Ramos:

• תאי Ramos: אתר זה מכיל מידע בסיסי על קו התאים Ramos. הוא מכיל גם פרוטוקול לריבוי תאי Ramos ולטיפול בתרבויות מתרבות ובתרבויות שהוקפאו. בנוסף, ניתן למצוא בו מידע בנוגע למדיום לתאי Ramos, זמן הכפלה וצפיפות תאים.

תובנות מרכזיות על תאי רמוס: שאלות נפוצות

ביבליוגרפיה

1. Kerntke, C.G., ניתוח הארגון ויכולת האיתות של ה-IgE הממברנלי במהלך האינטראקציה שלו עם CD19 ו-CD23 בלימפוציטים מסוג B. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., עיכוב GCN5 HAT מפחית את הישרדות תאי לימפומה מסוג Burkitt בבני אדם באמצעות הפחתת ביטוי גנים המהווים יעד ל-MYC ושיבוש מסלולי איתות BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): עמ' 5847.
3. אל-שאיה, H.M., ואח', הפרופיל הפיטוכימי והפעילות האנטי-חמצונית של פרי האנונה והשפעתו על התרבות תאי הלימפומה. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): עמ' 58-68.