Ramosovy buňky – výzkum B-buněčného lymfomu: Význam Ramosových buněk

Ramosovy buňky jsou buněčná linie B-lymfocytů, která se hojně využívá v biomedicínském výzkumu. Najdou uplatnění zejména v imunologii a ve výzkumu rakoviny. Vědci tyto buňky využívají k hodnocení cytotoxických léčiv a ke studiu povrchových antigenů B-buněk, mutací a mechanismů apoptózy.

Původ a obecné vlastnosti buněk Ramos

Porozumění původu a základním vlastnostem buněčné linie hraje klíčovou roli při rozhodování o její vhodnosti pro váš výzkum. Proto je vhodné tyto informace důkladně posoudit před zahájením jakékoli práce s ní. Tato sekce se zabývá následujícími často kladenými otázkami: Co je to rakovinová buněčná linie Ramos? Co je buněčná linie Ramos CD19? Co je buněčná linie Ramos CD20? Jaký je původ buněk Ramos? Jaké jsou markery buněčné linie Ramos? Jaká je velikost buněk Ramos? Jaká je morfologie buněčné linie Ramos?

• Buněčná linie Ramos byla založena v roce 1972. Tyto buňky byly izolovány z ascitické tekutiny tříletého chlapce kavkazského původu s Burkittovým lymfomem amerického typu [1].
• Exprimují klíčové markery B buněk, včetně imunoglobulinu M (IgM), CD19, CD20 a CD22.
• Buňky Ramos jsou negativní na virus Epstein-Barrový. Lze je však trvale přeměnit na buňky pozitivní na virus Epstein-Barrový.
• Tyto B-lymfoblastové buňky mají kulatý tvar.

Modré Ramosovy buňky vs. Ramosovy B buňky

Modré Ramosovy buňky i Ramosovy B buňky jsou buňky lidského Burkittova lymfomu. Obě jsou negativní na virus Epstein-Barrový. Rozdíl mezi těmito buňkami spočívá v tom, že modré Ramosovy buňky exprimují reportérový gen indukovatelný NF-κB/AP-1 zvaný SEAP (sekretovaná embryonální alkalická fosfatáza), zatímco bílé Ramosovy buňky nikoli.

3D animace ve vysokém rozlišení znázorňující dynamiku B lymfocitu.

Pěstování buněk Ramos

Tato část článku je věnována tomu, aby vám pomohla seznámit se s nezbytnými informacemi o kultivaci Ramosových buněk. Dozvíte se zde: Jaká je doba zdvojnásobení buněčné linie? Jaké je doporučené kultivační médium? Jak se Ramosovy buňky kultivují?

Klíčové body pro kultivaci Ramosových buněk

Doba zdvojnásobení:

Doba zdvojnásobení buněk Ramos je přibližně 20,4 ± 1,5 hodiny. Může se však lišit v závislosti na podmínkách kultivace.

Adherentní nebo v suspenzi:

Buňky Ramos rostou v suspenzi.

Hustota buněk:

Optimální buněčná hustota pro buněčnou linii Ramos je 3 × 10^⁵ buněk/ml. Pro subkultivaci se buňky v suspenzi shromáždí odstředěním. K buňkám se přidá čerstvé médium a opatrně se resuspendují. Poté se buňky přelijí do nové baňky v hustotě 3 až 9 × 10^⁵ buněk/ml.

Růstové médium:

K kultivaci buněk Ramos se používá RPMI 1640 doplněné 10 % fetálního bovinního séra, 2,1 mM stabilního glutaminu a 2,0 g/l NaHCO3. Médium by se mělo vyměňovat dvakrát týdně.

Podmínky růstu:

Lidská buněčná linie Burkittova lymfomu (Ramos) se udržuje ve zvlhčeném inkubátoru při 5 % CO₂ a teplotě 37 °C.

Skladování:

Zmrazené buňky Ramos se uchovávají při teplotě pod -150 °C nebo v plynné fázi kapalného dusíku, aby se zajistila jejich životaschopnost po delší dobu.

Proces zmrazování a médium:

Pro buňky Ramos se doporučuje zmrazovací médium CM-1 nebo CM-ACF. Používá se proces pomalého zmrazování, který umožňuje postupný pokles teploty o 1 stupeň Celsia za minutu. Toto pomalé zmrazování chrání buňky před šokem a zvyšuje jejich životaschopnost.

Proces rozmrazování:

Pro rozmrazení se zmrazené buňky umístí do předehřáté vodní lázně o teplotě 37 °C na 40 až 60 sekund, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. Poté se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí, aby se odstranily zbytky zmrazovacího média. Peleta se znovu resuspenduje a buňky se přenesou do nové baňky obsahující kultivační médium.

Úroveň biologické bezpečnosti:

Laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1 je nezbytná pro udržování kultur Ramosových buněk negativních na virus Epstein-Barrový. Úroveň biologické bezpečnosti se však zvyšuje na 2, pokud se Ramosovy buňky trvale stanou pozitivními na virus Epstein-Barrový.

Proliferující buněčná linie B lymfocytů Ramos v suspenzi, zobrazená při 10násobném a 20násobném zvětšení.

Ramos: Výhody a omezení

Stejně jako jiné buněčné linie mají i buňky Ramos své specifické výhody a omezení. V této části se zaměříme na některé významné z nich, které mohou výrazně ovlivnit jejich využití ve výzkumu.

Výhody

• Buněčný model Burkittova lymfomu: Ramosovy buňky byly vyvinuty z vzorku pacienta s Burkittovým lymfomem, což z nich činí relevantní buněčný model pro studium lymfoidních malignit.
• Snadné kultivování: Ramosovy buňky se v laboratoři snadno kultivují a udržují. Mají jednoduché požadavky a podmínky pro buněčnou kulturu.

Omezení

• In vitro model: Ramosovy buňky nemusí zcela odrážet genetickou komplexitu nádorů pacientů, což omezuje jejich použitelnost. Navíc výsledky experimentů s použitím buněčné linie Ramos nemusí zcela odrážet podmínky in vivo, což může vést k problémům při přenosu výsledků do klinické praxe.

 Využití Ramosových buněk ve výzkumu

Ramos nabízí slibné možnosti využití v biomedicínské oblasti. Mezi nejdůležitější výzkumné využití buněk Ramos patří:

• Biologie lymfomů: Ramosovy buňky se široce používají ke studiu biologie lymfomů. Slouží k výzkumu genetických a molekulárních faktorů, které jsou základem lymfoidních malignit. Kromě toho získávají výzkumníci pomocí těchto buněk Burkittova lymfomu poznatky o vzniku, progresi a heterogenitě onemocnění. Zkoumají se také genetické mutace a signální dráhy, což může vést k vývoji přesnějších diagnostických a terapeutických přístupů. Studie provedená v roce 2019 zjistila, že inhibice histonové acetyltransferázy GCN5 (General control non-depressible 5) snižuje tumorigenitu lidských buněk Burkittova lymfomu (Ramos) prostřednictvím narušení BCR signální dráhy. Proto je GCN5 navrhován jako vhodný cíl pro vývoj farmakoterapie lymfomů [2].
• Screening a testování léčiv: Buněčná linie Ramos je široce využívána pro účely screeningu a testování léčiv. Vědci hodnotí účinnost potenciálních terapeutických sloučenin při inhibici buněčné proliferace a růstu a při indukci buněčné smrti v lymfomových buňkách. To pomáhá identifikovat slibné kandidáty na léčiva, čímž se usnadňuje vývoj cílených léčebných postupů pro pacienty s lymfomem. Například výzkum ukázal, že metanolový extrakt ze slupky, dužiny a semen plodů Annona vykazoval mírné účinky, zatímco chloroformový extrakt vykazoval silné účinky na proliferaci buněk Ramos. Studie proto navrhla, že plody Annona by se mohly ukázat jako účinné při prevenci a léčbě lymfomu [3].

Ramosovy buňky pro váš výzkum

Publikace zabývající se Ramosovými buňkami

Tato část článku uvádí několik zajímavých výzkumných publikací zabývajících se buněčnou linií Ramos:

Pro životaschopnost B buněk Burkittova lymfomu je nezbytná nepřetržitá signalizace CD79b a CD19

Tento výzkum byl publikován v časopise The EMBO Journal v roce 2018. Studie zjistila, že B-buňky Ramos vyžadují expresi markerů CD19 a CD79b (signální složka BCR Igβ) pro svou životaschopnost a konkurenceschopný růst.

Smac-mimetika a TRAIL spolupracují při indukci MLKL-dependentní nekroptózy v buněčných liniích Burkittova lymfomu

Tato studie, publikovaná v časopise Neoplasia (2021), využila Ramosovy buňky a navrhla, že doména kinázy smíšené linie (MLKL) je v buňkách Burkittova lymfomu (Ramos) epigeneticky regulována. Jedná se tedy o slibný prognostický marker pro úspěch léčby založené na nekroptóze.

Fosforylace PBK/TOPK Tyr74 prostřednictvím JAK2 podporuje růst nádoru u Burkittova lymfomu

Tento výzkumný článek v časopise Cancer Letters (2022) naznačil, že signální osa JAK2/TOPK/histon H3 hraje klíčovou roli v proliferaci buněčných linií B-lymfomu in vitro.

Stres endoplazmatického retikula (ER) vyvolaný verotoxinem-1 spouští apoptotické nebo přežívací signální dráhy v buňkách Burkittova lymfomu

Tento článek byl publikován v roce 2020 v časopise Toxins. Studie navrhla, že léčba verotoxinem-1 indukuje stres endoplazmatického retikula (ER) v B buňkách Ramos. To vede k zahájení apoptotické nebo přežívací signalizace v buněčných liniích lymfomu.

Silymarin inhibuje expresi genu Toll-like receptoru 8 a apoptózu v rakovinné buněčné linii Ramos

Tato studie publikovaná v časopise *Avicenna Journal of Phytomedicine* (2020) uvádí, že přírodní sloučenina silymarin potlačuje expresi TLR8 (Toll-like receptor 8) a apoptózu v buněčné linii Ramos.

Zdroje informací o buněčné linii Ramos: protokoly, videa a další

Níže uvádíme několik online zdrojů týkajících se buněk Ramos:

• Transfekce buněk Ramos: Tento dokument vám pomůže seznámit se s protokolem pro transfekci buněčné linie Ramos.

Následující odkaz obsahuje protokol pro kultivaci buněk Ramos:

• Buňky Ramos: Tato webová stránka obsahuje základní informace o buněčné linii Ramos. Obsahuje také protokol pro subkultivaci buněk Ramos a zacházení s proliferujícími a kryokonzervovanými kulturami. Dále jsou k dispozici informace týkající se médií pro buňky Ramos, doby zdvojnásobení a buněčné hustoty.

Klíčové poznatky o Ramosových buňkách: Často kladené otázky

Literatura

1. Kerntke, C.G., Analýza organizace a signální kapacity membránového IgE během jeho interakce s CD19 a CD23 v B lymfocytech. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., Inhibice GCN5 HAT snižuje přežití buněk lidského Burkittova lymfomu prostřednictvím snížení exprese cílových genů MYC a blokování signálních drah BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fytochemický profil a antioxidační aktivita plodů annony a jejich vliv na proliferaci lymfomových buněk. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58–68.