Клітини Рамоса — дослідження В-клітинної лімфоми: значення клітин Рамоса

Клітини Рамоса — це лінія В-лімфоцитів, яка широко використовується в біомедичних дослідженнях. Зокрема, вони знаходять основне застосування в імунології та онкології. Дослідники використовують ці клітини для оцінки цитотоксичних препаратів та вивчення поверхневих антигенів В-клітин, мутацій і механізмів апоптозу.

Походження та загальні характеристики клітин Ramos

Розуміння походження та основних характеристик клітинної лінії відіграє вирішальну роль у визначенні її придатності для ваших досліджень. Тому перед початком будь-якої роботи з нею рекомендується ретельно оцінити цю інформацію. У цьому розділі розглядаються такі поширені запитання: Що таке онкологічна клітинна лінія Ramos? Що таке клітинна лінія Ramos CD19? Що таке клітинна лінія Ramos CD20? Яке походження клітин Ramos? Які маркери має клітинна лінія Ramos? Який розмір клітин Ramos? Яка морфологія клітинної лінії Ramos?

• Клітинна лінія Ramos була створена в 1972 році. Ці клітини були виділені з асцитичної рідини 3-річного хлопчика європейської раси, хворого на лімфому Беркітта американського типу [1].
• Вони експресують ключові маркери В-клітин, зокрема імуноглобулін М (IgM), CD19, CD20 та CD22.
• Клітини Ramos є клітинами, негативними щодо вірусу Епштейна-Барра. Однак їх можна назавжди перетворити на клітини, позитивні щодо вірусу Епштейна-Барра.
• Ці В-лімфобласти мають круглу форму.

«Сині» клітини Рамоса проти В-клітин Рамоса

Сині клітини Рамоса та В-клітини Рамоса — це клітини лімфоми Беркітта людини. Обидва типи є негативними щодо вірусу Епштейна-Барра. Відмінність між цими клітинами полягає в тому, що сині клітини Рамоса експресують індукований NF-κB/AP-1 репортерний ген, який називається SEAP (секретована ембріональна лужна фосфатаза), тоді як білі клітини Рамоса цього не роблять.

3D-анімація з високою роздільною здатністю, що ілюструє динаміку руху В-лімфоцита.

Культивування клітин Ramos

Цей розділ статті присвячений наданню важливої інформації щодо культивування клітин Рамоса. З нього ви дізнаєтеся: який час подвоєння клітинної лінії? Яке середовище рекомендується використовувати? Як культивувати клітини Рамоса?

Ключові моменти культивування клітин Ramos

Час подвоєння:

Час подвоєння клітин Ramos становить приблизно 20,4 ± 1,5 години. Однак він може відрізнятися залежно від умов культивування клітин.

Адгезивні або у суспензії:

Клітини Ramos ростуть у суспензії.

Щільність клітин:

Оптимальна щільність клітин для клітинної лінії Ramos становить 3 × 10^⁵ клітин/мл. Для субкультури клітини в суспензії збирають шляхом центрифугування. До клітин додають свіже середовище та обережно ресуспендують. Після цього клітини переносять у нову колбу з щільністю від 3 до 9 × 10^⁵ клітин/мл.

Середовище для культивування:

Для культивування клітин Ramos використовують RPMI 1640, доповнене 10 % сироваткою ембріонів великої рогатої худоби, 2,1 мМ стабільним глутаміном та 2,0 г/л NaHCO₃. Середовище слід замінювати 2 рази на тиждень.

Умови культивування:

Лінію клітин лімфоми Беркітта людини (Ramos) утримують у зволоженому інкубаторі при 5 % CO₂ та температурі 37 °C.

Зберігання:

Заморожені клітини Ramos зберігають при температурі нижче -150 градусів Цельсія або у паровій фазі рідкого азоту для забезпечення життєздатності клітин протягом тривалого часу.

Процес заморожування та середовище:

Для клітин Ramos рекомендується використовувати середовища для заморожування CM-1 або CM-ACF. Застосовується процес повільного заморожування, що забезпечує поступове зниження температури на 1 градус Цельсія за хвилину. Таке повільне заморожування захищає клітини від будь-якого шоку та підвищує їх життєздатність.

Процес розморожування:

Для розморожування заморожені клітини тримають у попередньо прогрітій водяній бані при температурі 37 °C протягом 40–60 секунд, доки не залишиться невеликий шматок льоду. Після цього додають свіже середовище, а клітини центрифугують для видалення залишків заморожувального середовища. Осад знову ресуспендують, а клітини переносять у нову колбу, що містить культуральне середовище.

Рівень біобезпеки:

Лабораторія рівня біобезпеки 1 є необхідною для утримання культур клітин Рамоса, негативних щодо вірусу Епштейна-Барра. Однак рівень біобезпеки підвищується до 2, коли клітини Рамоса остаточно стають позитивними щодо вірусу Епштейна-Барра.

Клітинна лінія проліферуючих В-лімфоцитів Рамоса в суспензії, зображена при 10-кратному та 20-кратному збільшенні.

Клітинна лінія Ramos: переваги та обмеження

Як і інші клітинні лінії, клітини Ramos також мають певні переваги та обмеження. У цьому розділі розглянуто деякі найважливіші з них, які можуть суттєво вплинути на їхнє використання в наукових дослідженнях.

Переваги

• Модель клітин лімфоми Беркітта: Клітини Ramos були отримані від пацієнта з лімфомою Беркітта, що робить їх актуальною клітинною моделлю для вивчення лімфоїдних злоякісних новоутворень.
• Простота культивування: Клітини Ramos легко культивувати та підтримувати в лабораторних умовах. Вони мають прості вимоги та умови культивування.

Обмеження

• Модель in vitro: клітини Ramos можуть не повністю відображати генетичну складність пухлин пацієнтів, що обмежує їхню застосовність. Крім того, результати експериментів із використанням клітинної лінії Ramos можуть не повністю відображати умови in vivo, що потенційно може призвести до труднощів у перенесенні результатів у клінічну практику.

 Застосування клітин Ramos у наукових дослідженнях

Клітини Ramos мають багатообіцяючі перспективи застосування в біомедичній галузі. До найважливіших напрямків досліджень із використанням клітин Ramos належать:

• Біологія лімфоми: Клітини Ramos широко використовуються для вивчення біології лімфоми. Їх застосовують для дослідження генетичних та молекулярних факторів, що лежать в основі лімфоїдних злоякісних новоутворень. Крім того, завдяки цим клітинам лімфоми Беркітта дослідники отримують уявлення про виникнення, прогресування та гетерогенність захворювання. Також досліджуються генетичні мутації та сигнальні шляхи, що потенційно може привести до розробки більш точних діагностичних та терапевтичних підходів. Дослідження, проведене у 2019 році, показало, що інгібування гістонової ацетилтрансферази GCN5 (General control non-depressible 5) знижує пухлиногенність клітин лімфоми Беркітта людини (Ramos) шляхом порушення сигнального шляху BCR. Тому GCN5 пропонується як потенційна мішень для розробки медикаментозної терапії лімфоми [2].
• Скринінг та тестування лікарських засобів: клітинна лінія Ramos широко використовується для скринінгу та тестування лікарських засобів. Дослідники оцінюють ефективність потенційних терапевтичних сполук щодо інгібування проліферації та росту клітин, а також індукування клітинної смерті в клітинах лімфоми. Це допомагає виявляти перспективні лікарські засоби, сприяючи таким чином розробці цільових методів лікування для пацієнтів із лімфомою. Наприклад, дослідження показало, що метанольний екстракт шкірки, м’якоті та насіння плодів аннони чинив помірний вплив, тоді як хлороформний екстракт виявляв сильний вплив на проліферацію клітин Ramos. Таким чином, у дослідженні було висунуто припущення, що плоди аннони можуть виявитися ефективними у профілактиці та лікуванні лімфоми [3].

Клітини Рамоса для ваших досліджень

Публікації, присвячені клітинній лінії Рамос

У цьому розділі статті наведено кілька цікавих наукових публікацій, присвячених клітинній лінії Рамоса:

Для життєздатності В-клітин лімфоми Беркітта необхідна безперервна сигналізація CD79b та CD19

Це дослідження було опубліковано в журналі «The EMBO journal» у 2018 році. У ході дослідження було встановлено, що В-клітини Ramos потребують експресії маркерів CD19 та CD79b (компонент сигнального шляху BCR — Igβ) для своєї життєздатності та конкурентного росту.

Міметики Smac та TRAIL спільно індукують MLKL-залежний некроптоз у клітинних лініях лімфоми Беркітта

У цьому дослідженні, опублікованому в журналі «Neoplasia» (2021), використовувалися клітини Ramos, і було висунуто гіпотезу, що домен кінази змішаного походження (MLKL) епігенетично регулюється в клітинах лімфоми Беркітта (Ramos). Таким чином, він є перспективним прогностичним маркером успіху терапії, пов’язаної з некроптозом.

Фосфорилювання PBK/TOPK Tyr74 за допомогою JAK2 сприяє росту пухлини лімфоми Беркітта

У цій науковій статті, опублікованій у журналі «Cancer Letters» (2022), висловлено припущення, що сигнальний шлях JAK2/TOPK/гістон H3 відіграє вирішальну роль у проліферації клітинних ліній В-лімфоми in vitro.

Стрес ЕР, індукований веротоксином-1, запускає апоптотичні або виживальні шляхи в клітинах лімфоми Беркітта

Ця стаття була опублікована у 2020 році в журналі «Toxins». У дослідженні висунуто гіпотезу, що лікування веротоксином-1 індукує стрес ендоплазматичного ретикулуму (ЕР) у В-клітинах Ramos. Це призводить до запуску сигнальних шляхів апоптозу або виживання в клітинних лініях лімфоми.

Силімарин пригнічує експресію гена Toll-подібного рецептора 8 та апоптоз у лінії ракових клітин Ramos

У цьому дослідженні, опублікованому в журналі «Avicenna Journal of Phytomedicine» (2020), повідомляється, що природна сполука, силімарин, пригнічує експресію TLR8 (Toll-подібного рецептора 8) та апоптоз у клітинній лінії Ramos.

Ресурси щодо клітинної лінії Ramos: протоколи, відео та інше

Нижче наведено кілька онлайн-ресурсів щодо клітин Ramos:

• Трансфекція клітин Ramos: Цей документ допоможе вам ознайомитися з протоколом трансфекції клітинної лінії Ramos.

За посиланням наведено протокол культивування клітин Ramos:

• Клітини Ramos: Цей веб-сайт містить основну інформацію про клітинну лінію Ramos. Він також містить протокол субкультивування клітин Ramos та роботи з проліферуючими та кріоконсервованими культурами. Крім того, доступна інформація щодо середовищ для клітин Ramos, часу подвоєння та щільності клітин.

Ключова інформація про клітини Рамоса: Найпоширеніші запитання

Література

1. Kerntke, C.G., Аналіз організації та сигнальних можливостей мембранного IgE під час його взаємодії з CD19 та CD23 у В-лімфоцитах. 2021, Університет Георга-Августа в Геттінгені.
2. Farria, A.T. та ін., Інгібування GCN5 HAT знижує виживаність клітин лімфоми Беркітта людини шляхом зменшення експресії генів-мішеней MYC та блокування сигнальних шляхів BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): с. 5847.
3. Аль-Шая, Х.М. та ін., Фітохімічний профіль та антиоксидантна активність плодів аннони та їхній вплив на проліферацію клітин лімфоми. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): с. 58–68.