Ramosove bunky – výskum B-bunkového lymfómu: Význam Ramosových buniek

Ramosove bunky sú bunková línia B-lymfocytov, ktorá sa vo veľkej miere využíva v biomedicínskom výskume. Nachádzajú uplatnenie najmä v imunológii a vo výskume rakoviny. Výskumníci využívajú tieto bunky na hodnotenie cytotoxických liekov a na štúdium povrchových antigénov B-buniek, mutácií a apoptotických mechanizmov.

Pôvod a všeobecné vlastnosti buniek Ramos

Pochopenie pôvodu a základných vlastností buneckej línie zohráva kľúčovú úlohu pri rozhodovaní o jej vhodnosti pre váš výskum. Preto je vhodné tieto informácie dôkladne posúdiť pred začatím akejkoľvek práce s ňou. Táto časť sa venuje nasledujúcim často kladeným otázkam: Čo je rakovinová bunecka línia Ramos? Čo je bunková línia Ramos CD19? Čo je bunková línia Ramos CD20? Aký je pôvod buniek Ramos? Aké sú markery na bunkovej línii Ramos? Aká je veľkosť buniek Ramos? Aká je morfológia bunkovej línie Ramos?

• Bunka Ramos bola založená v roku 1972. Tieto bunky boli získané z ascitickej tekutiny 3-ročného chlapca kaukazského pôvodu s Burkittovým lymfómom amerického typu [1].
• Exprimujú kľúčové markery B-buniek, vrátane imunoglobulínu M (IgM), CD19, CD20 a CD22.
• Bunky Ramos sú negatívne na vírus Epstein-Barrov. Môžu sa však trvalo premeniť na bunky pozitívne na vírus Epstein-Barrov.
• Tieto B-lymfoblastové bunky majú guľatý tvar.

Modré Ramosove bunky vs. Ramosove B-bunky

Modré Ramosove bunky aj Ramosove B-bunky sú ľudské bunky Burkittovho lymfómu. Obe sú negatívne na vírus Epstein-Barrov. Rozdiel medzi týmito bunkami spočíva v tom, že modré Ramosove bunky exprimujú NF-κB/AP-1-indukovateľný reportérový gén nazývaný SEAP (sekreovaná embryonálna alkalická fosfatáza), zatiaľ čo biele Ramosove bunky ho neexprimujú.

3D animácia s vysokým rozlíšením znázorňujúca dynamiku B-lymfocytu.

Kultivácia buniek Ramos

Táto časť článku je venovaná tomu, aby vám pomohla získať dôležité informácie o kultivácii Ramosových buniek. Dozviete sa tu: Aký je čas zdvojnásobenia buniek v tejto buneckej línii? Aké je odporúčané kultivačné médium? Ako sa kultivujú Ramosové bunky?

Kľúčové body kultivácie buniek Ramos

Doba zdvojnásobenia:

Doba zdvojnásobenia buniek Ramos je približne 20,4 ± 1,5 hodiny. Môže sa však líšiť v závislosti od podmienok kultivácie buniek.

Adherentné alebo v suspenzii:

Bunky Ramos rastú v suspenzii.

Hustota buniek:

Optimálna hustota buniek pre bunkovú líniu Ramos je 3 x 10⁵ buniek/ml. Na účely subkultivácie sa bunky v suspenzii zozbierajú centrifugáciou. K bunkám sa pridá čerstvé médium a opatrne sa resuspendujú. Následne sa bunky nalia do novej fľaše v hustote 3 až 9 × 10^⁵ buniek/ml.

Rastové médium:

Na kultiváciu buniek Ramos sa používa RPMI 1640 doplnené o 10 % fetálneho bovinného séra, 2,1 mM stabilného glutamínu a 2,0 g/l NaHCO3. Rôstové médium by sa malo vymieňať dvakrát týždenne.

Podmienky rastu:

Ľudská bunková línia Burkittovho lymfómu (Ramos) sa uchováva vo zvlhčenom inkubátore pri 5 % CO₂ a teplote 37 °C.

Skladovanie:

Zmrazené bunky Ramos sa uchovávajú pri teplote nižšej ako -150 stupňov Celzia alebo v parnej fáze tekutého dusíka, aby sa zachovala životaschopnosť buniek po dlhšiu dobu.

Proces zmrazovania a médium:

Pre bunky Ramos sa odporúča mraziace médium CM-1 alebo CM-ACF. Používa sa proces pomalého zmrazovania, ktorý umožňuje postupný pokles teploty o 1 stupeň Celzia za minútu. Toto pomalé zmrazovanie chráni bunky pred akýmkoľvek šokom a zvyšuje ich životaschopnosť.

Proces rozmrazovania:

Na rozmrazenie sa zmrazené bunky umiestnia do predhriateho vodného kúpeľa s teplotou 37 °C na 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá zrazenina ľadu. Potom sa pridá čerstvé médium a bunky sa odstreďujú, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Peleta sa opäť resuspenduje a bunky sa nanesú do novej fľaše obsahujúcej kultivačné médium.

Úroveň biologickej bezpečnosti:

Laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1 je nevyhnutné na udržanie kultúr Ramosových buniek negatívnych na vírus Epstein-Barrov. Úroveň biologickej bezpečnosti sa však zvyšuje na 2, keď sa Ramosové bunky trvalo zmenia na vírus Epstein-Barrov pozitívne.

Proliiferujúca bunková línia B-lymfocytov Ramos v suspenzii, zobrazená pri 10-násobnom a 20-násobnom zväčšení.

Ramos: Výhody a obmedzenia

Rovnako ako iné bunkové línie, aj Ramosove bunky majú svoje špecifické výhody a obmedzenia. V tejto časti sa zameriame na niektoré z nich, ktoré môžu významne ovplyvniť ich využitie vo výskume.

Výhody

• Bunka model Burkittovho lymfómu: Ramosové bunky boli vyvinuté z pacienta s Burkittovým lymfómom, čo z nich robí relevantný bunkový model na štúdium lymfoidných malignít.
• Jednoduchá kultivácia: Ramosove bunky sa v laboratóriu ľahko kultivujú a udržiavajú. Majú jednoduché požiadavky a podmienky na kultiváciu.

Obmedzenia

• In vitro model: Ramosove bunky nemusia úplne reprezentovať genetickú komplexnosť nádorov pacientov, čo obmedzuje ich použiteľnosť. Navyše výsledky experimentov s použitím Ramosovej buneckej línie nemusia úplne odrážať in vivo podmienky, čo môže viesť k problémom pri preklade do klinickej praxe.

 Využitie buniek Ramos vo výskume

Bunky Ramos ponúkajú sľubné možnosti využitia v biomedicínskej oblasti. Medzi najdôležitejšie oblasti výskumu, v ktorých sa bunky Ramos využívajú, patria:

• Biológia lymfómu: Ramosove bunky sa široko používajú na štúdium biológie lymfómu. Využívajú sa na skúmanie genetických a molekulárnych faktorov, ktoré sú základom lymfoidných malignít. Okrem toho výskumníci pomocou týchto buniek Burkittovho lymfómu získavajú poznatky o vzniku, progresi a heterogenite ochorenia. Skúmajú sa aj genetické mutácie a signálne dráhy, čo môže viesť k vývoju presnejších diagnostických a terapeutických prístupov. Štúdia vykonaná v roku 2019 zistila, že inhibícia histónovej acetyltransferázy GCN5 (General control non-depressible 5) znižuje tumorigenitu ľudských buniek Burkittovho lymfómu (Ramos) prostredníctvom narušenia BCR signálnej dráhy. Preto sa GCN5 navrhuje ako vhodný cieľ pre vývoj liečby lymfómu [2].
• Skríning a testovanie liekov: Bunky línie Ramos sa široko využívajú na účely skríningu a testovania liekov. Výskumníci hodnotia účinnosť potenciálnych terapeutických zlúčenín pri inhibícii proliferácie a rastu buniek a pri indukcii bunkovej smrti v lymfómových bunkách. To pomáha identifikovať sľubné kandidátske lieky, čím sa uľahčuje vývoj cielených liečebných postupov pre pacientov s lymfómom. Napríklad výskum ukázal, že metanolový extrakt z kôry, dužiny a semien plodov Annona mal mierny účinok, zatiaľ čo chloroformový extrakt vykazoval silný účinok na proliferáciu buniek Ramos. Štúdia preto navrhla, že plody Annona by sa mohli ukázať ako účinné pri prevencii a liečbe lymfómu [3].

Ramosove bunky pre váš výskum

Publikácie zaoberajúce sa Ramosovými bunkami

V tejto časti článku uvádzame niekoľko zaujímavých vedeckých publikácií zaoberajúcich sa bunkovou líniou Ramos:

Pre funkčnosť B-buniek Burkittovho lymfómu je potrebná nepretržitá signalizácia CD 79b a CD 19

Tento výskum bol uverejnený v časopise The EMBO Journal v roku 2018. Štúdia zistila, že B-bunky Ramos potrebujú na svoju životaschopnosť a konkurenčný rast expresiu markerov CD19 a CD79b (signálna zložka BCR Igβ).

Mimetiká Smac a TRAIL spolupracujú pri indukcii MLKL-dependentnej nekroptózy v bunkových líniách Burkittovho lymfómu

Táto štúdia, uverejnená v časopise Neoplasia (2021), využívala Ramosove bunky a navrhla, že doména kinázy zmiešanej línie (MLKL) je v bunkách Burkittovho lymfómu (Ramos) epigeneticky regulovaná. Ide teda o sľubný prognostický marker úspešnosti liečby založenej na nekroptóze.

Fosforylácia PBK/TOPK Tyr74 prostredníctvom JAK2 podporuje rast nádoru Burkittovho lymfómu

Tento výskumný článok v časopise Cancer Letters (2022) naznačil, že signálna os JAK2/TOPK/histón H3 zohráva kľúčovú úlohu v proliferácii bunkových línií B-lymfómu in vitro.

Stres endoplazmatického retikula vyvolaný verotoxínom-1 spúšťa apoptotické alebo prežívacie dráhy v bunkách Burkittovho lymfómu

Tento článok bol uverejnený v roku 2020 v časopise Toxins. Štúdia navrhla, že liečba verotoxínom-1 indukuje stres endoplazmatického retikula (ER) v B-bunkách Ramos. To vedie k spusteniu apoptotických alebo prežívacích signálnych dráh v bunkových líniách lymfómu.

Silymarín inhibuje expresiu génu Toll-like receptora 8 a apoptózu v rakovinovej buneckej línii Ramos

Táto štúdia uverejnená v časopise Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) uvádza, že prírodná zlúčenina silymarín potláča expresiu TLR8 (Toll-like receptor 8) a apoptózu v bunkovej línii Ramos.

Zdroje týkajúce sa buneckej línie Ramos: protokoly, videá a ďalšie informácie

Nižšie uvádzame niekoľko online zdrojov týkajúcich sa buniek Ramos:

• Transfekcia buniek Ramos: Tento dokument vám pomôže zoznámiť sa s protokolom transfekcie buniek Ramos.

Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek Ramos:

• Bunky Ramos: Táto webová stránka obsahuje základné informácie o bunkovej línii Ramos. Obsahuje tiež protokol na subkultiváciu buniek Ramos a manipuláciu s proliferujúcimi a kryokonzervovanými kultúrami. Okrem toho sú k dispozícii aj informácie týkajúce sa kultivačných médií pre bunky Ramos, doby zdvojnásobenia a hustoty buniek.

Kľúčové poznatky o Ramosových bunkách: Často kladené otázky

Referencie

1. Kerntke, C.G., Analýza organizácie a signálnej kapacity membránového IgE počas jeho interakcie s CD19 a CD23 v B lymfocytoch. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., Inhibícia GCN5 HAT znižuje prežívanie buniek ľudského Burkittovho lymfómu prostredníctvom zníženia expresie cieľových génov MYC a blokovania signálnych dráh BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fytochemický profil a antioxidačná aktivita plodov annony a jej vplyv na proliferáciu lymfómových buniek. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58–68.