Ramos Hücreleri - B Hücreli Lenfoma Araştırması: Ramos Hücrelerinin Önemi

Ramos hücreleri, biyomedikal araştırmalarda yaygın olarak kullanılan bir B lenfosit hücre hattıdır. Özellikle immünoloji ve kanser çalışmalarında başlıca uygulama alanları bulunmaktadır. Araştırmacılar, sitotoksik ilaçları değerlendirmek ve B hücresi yüzey antijenlerini, mutasyonları ve apoptoz mekanizmalarını incelemek için bu hücreleri kullanmaktadır.

Ramos hücrelerinin kökeni ve genel özellikleri

Bir hücre hattının kökenini ve temel özelliklerini anlamak, araştırmanız için uygun olup olmadığını belirlemede çok önemli bir rol oynar. Bu nedenle, bu hücre hattı üzerinde herhangi bir çalışmaya başlamadan önce bu bilgileri kapsamlı bir şekilde değerlendirmeniz önerilir. Bu bölümde sıkça sorulan şu sorular ele alınmaktadır: Ramos kanser hücre hattı nedir? Ramos hücre hattı CD19 nedir? Ramos hücre hattı CD20 nedir? Ramos hücrelerinin kökeni nedir? Ramos hücre hattındaki belirteçler nelerdir? Ramos hücrelerinin boyutu nedir? Ramos hücre hattının morfolojisi nedir?

• Ramos hücre hattı 1972 yılında oluşturulmuştur. Bu hücreler, Amerikan tipi Burkitt lenfoması olan 3 yaşındaki Kafkasyalı bir erkek çocuğun asit sıvısından elde edilmiştir [1].
• Bu hücreler, immünoglobulin M (IgM), CD19, CD20 ve CD22 dahil olmak üzere temel B hücresi belirteçlerini ifade ederler.
• Ramos hücreleri, Epstein-Barr virüsü negatif hücrelerdir. Ancak, bu hücreler kalıcı olarak Epstein-Barr virüsü pozitif hücrelere dönüştürülebilir.
• Bu B lenfoblast hücreleri yuvarlak şekilli bir morfolojiye sahiptir.

Ramos mavi hücreleri ve Ramos B hücreleri

Ramos mavi hücreleri ve Ramos B hücreleri, her ikisi de insan Burkitt lenfoma hücreleridir. Her ikisi de Epstein-Barr virüsü açısından negatiftir. Bu hücreler arasındaki fark, Ramos mavi hücrelerinin SEAP (salınan embriyonik alkali fosfat) adı verilen NF-κB/AP-1 ile indüklenebilir bir raportör geni eksprese etmelerine karşın, beyaz Ramos hücrelerinin bunu yapmamasıdır.

Bir B lenfositinin dinamiklerini gösteren yüksek çözünürlüklü 3B animasyon.

Ramos Hücrelerinin Kültürü

Makalenin bu bölümü, Ramos hücreleri ile ilgili temel hücre kültürü bilgilerini öğrenmenize yardımcı olmak amacıyla hazırlanmıştır. Burada şu konularda bilgi edineceksiniz: Hücre hatlarının ikiye katlanma süresi nedir? Önerilen besiyeri hangisidir? Ramos hücreleri nasıl kültürlenir?

Ramos Hücrelerinin Kültürüyle İlgili Önemli Noktalar

Çoğalma Süresi:

Ramos hücrelerinin çoğalma süresi yaklaşık 20,4 ± 1,5 saattir. Ancak bu süre, sağlanan hücre kültürü koşullarına bağlı olarak değişiklik gösterebilir.

Yapışık mı, Süspansiyon Halinde mi:

Ramos hücreleri süspansiyon halinde büyür.

Hücre Yoğunluğu:

Ramos hücre hattı için optimum hücre yoğunluğu 3 x 10⁵ hücre/ml'dir. Alt kültür oluşturmak için, süspansiyon halindeki hücreler santrifüj yoluyla toplanır. Hücrelere taze besiyeri eklenir ve dikkatlice yeniden süspansiyona alınır. Ardından, hücreler 3 ila 9 x 10⁵ hücre/ml yoğunluğunda yeni şişeye aktarılır.

Büyüme Ortamı:

Ramos hücrelerinin kültürlenmesi için %10 fetal sığır serumu, 2,1 mM stabil glutamin ve 2,0 g/L NaHCO3 ile takviye edilmiş RPMI 1640 kullanılır. Besiyeri haftada 2 kez değiştirilmelidir.

Büyüme Koşulları:

İnsan Burkitt lenfoma hücre hattı (Ramos), %5 CO₂ ve 37°C sıcaklıkta nemlendirilmiş bir inkübatörde tutulur.

Saklama:

Dondurulmuş Ramos hücreleri, hücrelerin canlılığını daha uzun süre korumak için -150 santigrat derecenin altındaki sıcaklıkta veya sıvı azotun buhar fazında muhafaza edilir.

Dondurma Süreci ve Ortam:

Ramos hücreleri için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamları önerilir. Sıcaklığın dakikada 1 derece Celsius kademeli olarak düşmesini sağlayan yavaş bir dondurma işlemi kullanılır. Bu yavaş dondurma işlemi, hücreleri şoktan korur ve canlılıklarını artırır.

Çözme Süreci:

Çözme işlemi için, dondurulmuş hücreler, küçük bir buz topakçığı kalana kadar 37°C'de önceden ısıtılmış bir su banyosunda 40 ila 60 saniye tutulur. Bundan sonra, taze besiyeri eklenir ve hücreler santrifüjlenerek dondurma besiyeri bileşenleri uzaklaştırılır. Pelet tekrar süspansiyona alınır ve hücreler, kültür besiyeri içeren yeni bir şişeye aktarılır.

Biyogüvenlik Seviyesi:

Epstein-Barr virüsü negatif Ramos hücre kültürlerinin sürdürülmesi için Biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvarı gereklidir. Ancak, Ramos hücreleri kalıcı olarak Epstein-Barr virüsü pozitif hale geldiğinde biyogüvenlik seviyesi 2'ye yükseltilir.

Süspansiyon halindeki Ramos çoğalan B lenfosit hücre hattı; 10x ve 20x büyütmede gösterilmiştir.

Ramos: Avantajlar ve Sınırlamalar

Diğer hücre hatları gibi, Ramos hücrelerinin de kendine özgü avantajları ve sınırlamaları vardır. Bu bölümde, araştırma amaçlı kullanımlarını önemli ölçüde etkileyebilecek bazı önemli hususlar ele alınacaktır.

Avantajlar

• Burkitt lenfoma hücre modeli: Ramos hücreleri, bir Burkitt lenfoma hastasından geliştirilmiştir; bu da onları lenfoid malignitelerin incelenmesi için uygun bir hücre modeli haline getirir.
• Kolay Kültüre Alma: Ramos hücrelerinin laboratuvarda kültüre edilmesi ve bakımı kolaydır. Hücre kültürü gereksinimleri ve koşulları basittir.

Sınırlamalar

• İn vitro model: Ramos hücreleri, hasta tümörlerinin genetik karmaşıklığını tam olarak yansıtmayabilir, bu da uygulanabilirliklerini sınırlayabilir. Ayrıca, Ramos hücre hattı kullanılarak yapılan deneylerin sonuçları, in vivo koşulları tam olarak yansıtmayabilir ve bu da translasyonel zorluklara yol açabilir.

 Araştırmada Ramos hücrelerinin uygulamaları

Ramos, biyomedikal alanda umut verici uygulamalar sunar. Ramos hücrelerinin en önemli araştırma kullanımlarından bazıları şunlardır:

• Lenfoma Biyolojisi: Ramos hücreleri, lenfoma biyolojisini incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Lenfoid malignitelerin altında yatan genetik ve moleküler faktörleri araştırmak için kullanılırlar. Ayrıca, araştırmacılar bu Burkitt lenfoma hücrelerini kullanarak hastalığın başlangıcı, ilerlemesi ve heterojenliği hakkında bilgi edinmektedir. Genetik mutasyonlar ve sinyal yolları da araştırılmakta olup, bu da potansiyel olarak daha hassas tanı ve tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesine yol açabilir. 2019 yılında yapılan bir çalışmada, GCN5 (General control non-depressible 5) histon asetiltransferaz inhibisyonunun, BCR sinyal yolunu bozarak insan Burkitt lenfoma hücrelerinin (Ramos) tümör oluşturma yeteneğini azalttığı bulunmuştur. Bu nedenle, GCN5’in lenfoma ilaç tedavisi geliştirilmesi için uygun bir hedef olduğu öne sürülmektedir [2].
• İlaç taraması ve testleri: Ramos hücre hattı, ilaç taraması ve test amaçları için yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmacılar, potansiyel terapötik bileşiklerin lenfoma hücrelerinde hücre çoğalmasını ve büyümesini inhibe etme ve hücre ölümünü indükleme konusundaki etkinliğini değerlendirmektedir. Bu, umut vaat eden ilaç adaylarının belirlenmesine yardımcı olur ve böylece lenfoma hastaları için hedefe yönelik tedavilerin geliştirilmesini kolaylaştırır. Bu tür araştırmalar, Annona meyvesinin kabuğu, özü ve tohumlarından elde edilen metanol ekstraktının Ramos hücrelerinin çoğalması üzerinde orta derecede etki gösterirken, kloroform ekstraktının ise güçlü bir etki sergilediğini ortaya koymuştur. Dolayısıyla, çalışma Annona meyvelerinin lenfoma önleme ve tedavisinde etkili olabileceğini öne sürmüştür [3].

Araştırmalarınız İçin Ramos Hücreleri

Ramos hücrelerini konu alan yayınlar

Makalenin bu bölümünde, Ramos hücre hattını konu alan birkaç ilginç araştırma yayını listelenmiştir:

Burkitt lenfoma B hücrelerinin uygunluğu için CD 79b ve CD 19'un sürekli sinyal iletimi gereklidir

Bu araştırma 2018 yılında The EMBO Journal dergisinde yayınlanmıştır. Çalışma, Ramos B hücrelerinin sağlığı ve rekabetçi büyümesi için Ramos hücrelerinin CD19 ve CD79b (BCR sinyal bileşeni Igβ) belirteçlerinin ekspresyonuna ihtiyaç duyduğunu ortaya koymuştur.

Smac mimetikleri ve TRAIL, Burkitt lenfoma hücre hatlarında MLKL'ye bağlı nekroptozu indüklemek için işbirliği yapar

Neoplasia dergisinde (2021) yayınlanan bu çalışmada Ramos hücreleri kullanılmış ve karışık soy kinaz alanı (MLKL) geninin Burkitt lenfoma hücrelerinde (Ramos) epigenetik olarak düzenlendiği öne sürülmüştür. Dolayısıyla bu, nekroptoz ile ilişkili tedavilerin başarı açısından umut verici bir prognostik belirteçtir.

JAK2 tarafından PBK/TOPK Tyr74'ün fosforilasyonu, Burkitt lenfoma tümörünün büyümesini teşvik eder

Cancer Letters (2022) dergisinde yayınlanan bu araştırma makalesi, JAK2/TOPK/histon H3 sinyal ekseninin, in vitro ortamda B lenfoma hücre hatlarının çoğalmasında kritik bir rol oynadığını öne sürmüştür.

Verotoksin-1'in Neden Olduğu ER Stresi, Burkitt Lenfoma Hücrelerinde Apoptoz veya Hayatta Kalma Yollarını Tetikler

Bu makale 2020 yılında Toxins dergisinde yayınlanmıştır. Çalışma, verotoksin-1 tedavisinin Ramos B hücrelerinde endoplazmik retikulum (ER) stresini indüklediğini öne sürmüştür. Bu durum, lenfoma hücre hatlarında apoptoz veya hayatta kalma sinyal yolaklarının başlatılmasına yol açmaktadır.

Silimarin, Ramos kanser hücre hattında Toll-benzeri reseptör 8 gen ekspresyonunu ve apoptozu inhibe eder

Avicenna Journal of Phytomedicine dergisinde (2020) yayınlanan bu çalışma, doğal bir bileşik olan silimarinin, Ramos hücre hattında TLR8 (Toll-benzeri reseptör 8) ekspresyonunu ve apoptozu bastırdığını bildirmiştir.

Ramos hücre hattı ile ilgili kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası

Aşağıda, Ramos hücreleri ile ilgili birkaç çevrimiçi kaynak yer almaktadır:

• Ramos hücre transfeksiyonu: Bu belge, Ramos hücre hattının transfeksiyonu için protokolü öğrenmenize yardımcı olacaktır.

Aşağıdaki bağlantı, Ramos hücre kültürü protokolünü içermektedir:

• Ramos hücreleri: Bu web sitesi, Ramos hücre hattı hakkında temel bilgiler içermektedir. Ayrıca, Ramos hücrelerinin alt kültürlenmesi ve çoğalan ve kriyoprezervasyonlu kültürlerin işlenmesi için bir protokol de içermektedir. Bunun yanı sıra, Ramos hücre besiyeri, ikiye katlanma süresi ve hücre yoğunluğu ile ilgili bilgiler de mevcuttur.

Ramos Hücreleri Hakkında Temel Bilgiler: Sıkça Sorulan Sorular

Kaynakça

1. Kerntke, C.G., B lenfositlerinde CD19 ve CD23 ile etkileşimi sırasında membran IgE'nin organizasyonu ve sinyal verme kapasitesinin analizi. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T. ve ark., GCN5 HAT inhibisyonu, MYC hedef gen ekspresyonunu azaltarak ve BCR sinyal yollarını engelleyerek insan Burkitt lenfoma hücrelerinin hayatta kalmasını azaltır. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M. ve ark., Annona meyvesinin fitokimyasal profili ve antioksidan aktivitesi ile lenfoma hücre çoğalması üzerindeki etkisi. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58-68.