Ramos-celler – Forskning om B-cellslymfom: Betydelsen av Ramos-celler

Ramosceller är en B-lymfocytcellinje som används i stor utsträckning inom biomedicinsk forskning. De används framför allt inom immunologi och cancerforskning. Forskare använder dessa celler för att utvärdera cytotoxiska läkemedel och studera B-cellers ytantigener, mutationer och apoptosmekanismer.

Ramos-cellernas ursprung och allmänna egenskaper

Att förstå en cellinjes ursprung och väsentliga egenskaper spelar en avgörande roll för att avgöra om den är lämplig för din forskning. Därför är det tillrådligt att noggrant utvärdera denna information innan du påbörjar något arbete med den. Detta avsnitt behandlar följande vanliga frågor: Vad är Ramos-cancercellinjen? Vad är Ramos-cellinjen CD19? Vad är Ramos-cellinjen CD20? Vad är ursprunget till Ramos-cellerna? Vilka markörer finns på Ramos-cellinjen? Hur stor är en Ramos-cell? Hur ser morfologin ut hos Ramos-cellinjen?

• Ramos-cellinjen etablerades 1972. Dessa celler härstammar från ascitesvätskan hos en 3-årig kaukasisk pojke med Burkitt-lymfom av amerikansk typ [1].
• De uttrycker viktiga B-cellsmarkörer, däribland immunoglobulin M (IgM), CD19, CD20 och CD22.
• Ramos-celler är Epstein-Barr-virusnegativa. De kan dock permanent omvandlas till Epstein-Barr-viruspositiva celler.
• Dessa B-lymfoblastceller har en rund morfologi.

Ramos-blå celler jämfört med Ramos-B-celler

Ramos-blå celler och Ramos-B-celler är båda humana Burkitt-lymfomceller. Båda är negativa för Epstein-Barr-virus. Skillnaden mellan dessa celler är att Ramos-blå celler uttrycker ett NF-κB/AP-1-inducerbart reportergen som kallas SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), medan vita Ramos-celler inte gör det.

En högupplöst 3D-animation som illustrerar dynamiken hos en B-lymfocyt.

Odling av Ramos-celler

Detta avsnitt av artikeln är avsett att hjälpa dig att lära dig viktig information om cellodling av Ramos-celler. Här får du veta: Vad är cellinjernas fördubblingstid? Vilket medium rekommenderas? Hur odlar man Ramos-celler?

Viktiga punkter för odling av Ramos-celler

Fördubblingstid:

Fördubblingstiden för Ramos-celler är ungefär 20,4 ± 1,5 timmar. Den kan dock variera beroende på de givna odlingsförhållandena.

Adherenta eller i suspension:

Ramos-cellerna växer i suspension.

Celltäthet:

Den optimala celltätheten för Ramos-cellinjen är 3 × 10^⁵ celler/ml. För subkultivering samlas de suspenderade cellerna in genom centrifugering. Cellerna tillsätts färskt odlingsmedium och resuspenderas försiktigt. Därefter hälldes cellerna över i en ny kolv med en densitet på 3 till 9 × 10^⁵ celler/ml.

Odlingsmedium:

RPMI 1640 kompletterat med 10 % fetalt bovint serum, 2,1 mM stabilt glutamin och 2,0 g/L NaHCO₃ används för odling av Ramos-celler. Odlingsmediet bör bytas ut två gånger per vecka.

Odlingsförhållanden:

Den humana Burkitt-lymfomcellinjen (Ramos) förvaras i en befuktad inkubator vid 5 % CO₂ och 37 °C.

Förvaring:

Frysta Ramos-celler förvaras vid en temperatur under -150 grader Celsius eller i ångfasen av flytande kväve för att säkerställa cellernas livskraft under längre tid.

Frysningsprocess och medium:

Frysmediet CM-1 eller CM-ACF rekommenderas för Ramos-celler. En långsam frysningsprocess används som möjliggör en gradvis temperatursänkning på 1 grad Celsius per minut. Denna långsamma frysning skyddar cellerna från chock och förbättrar deras livskraft.

Upptining:

Vid upptining förvaras de frysta cellerna i ett förvärmt vattenbad vid 37 °C i 40 till 60 sekunder tills endast en liten isklump återstår. Därefter tillsätts färskt odlingsmedium och cellerna centrifugeras för att avlägsna rester av frysmediet. Pelleten resuspenderas återigen och cellerna överförs till en ny kolv innehållande odlingsmedium.

Biosäkerhetsnivå:

Ett laboratorium med biosäkerhetsnivå 1 är nödvändigt för att upprätthålla Epstein-Barr-virusnegativa Ramos-cellkulturer. Biosäkerhetsnivån höjs dock till 2 när Ramos-cellerna permanent har blivit Epstein-Barr-viruspositiva.

Den prolifererande B-lymfocytcellinjen Ramos i suspension, visad med 10x och 20x förstoring.

Ramos: Fördelar och begränsningar

Precis som andra cellinjer har även Ramos-celler tydliga fördelar och begränsningar. I detta avsnitt kommer vi att undersöka några viktiga sådana som kan ha betydande inverkan på deras användning inom forskningen.

Fördelar

• Cellmodell för Burkitt-lymfom: Ramos-cellerna utvecklades från en patient med Burkitt-lymfom, vilket gör dem till en relevant cellmodell för studier av lymfoida maligniteter.
• Enkel odling: Ramos-celler är lätta att odla och underhålla i laboratoriet. De har enkla krav och villkor för cellodling.

Begränsningar

• In vitro-modell: Ramos-celler representerar kanske inte helt den genetiska komplexiteten hos patienternas tumörer, vilket begränsar deras tillämplighet. Dessutom kanske resultaten från experiment med Ramos-cellinjen inte helt återspeglar in vivo-förhållandena, vilket potentiellt kan leda till utmaningar vid tillämpning i klinisk praxis.

 Tillämpningar av Ramos-celler inom forskning

Ramos-cellerna erbjuder lovande tillämpningar inom det biomedicinska området. Några av de viktigaste forskningsändamålen för Ramos-cellerna är:

• Lymfombiologi: Ramos-celler används i stor utsträckning för att studera lymfombiologi. De används för att undersöka genetiska och molekylära faktorer som ligger till grund för lymfoida maligniteter. Dessutom får forskare insikter i sjukdomens uppkomst, progression och heterogenitet genom att använda dessa Burkitt-lymfomceller. Genetiska mutationer och signalvägar undersöks också, vilket potentiellt kan leda till utvecklingen av mer precisa diagnostiska och terapeutiska metoder. En studie som genomfördes 2019 visade att hämning av histonacetyltransferaset GCN5 (General control non-depressible 5) minskar tumörbildningsförmågan hos humana Burkitt-lymfomceller (Ramos) genom att störa BCR-signaleringen. Därför föreslås GCN5 som en möjlig målmolekyl för utveckling av läkemedelsbehandling mot lymfom [2].
• Läkemedelsscreening och -testning: Ramos-cellinjen används i stor utsträckning för läkemedelsscreening och -testning. Forskare utvärderar effekten av potentiella terapeutiska föreningar när det gäller att hämma cellproliferation och tillväxt samt att inducera celldöd i lymfomceller. Detta bidrar till att identifiera lovande läkemedelskandidater, vilket underlättar utvecklingen av riktade behandlingar för lymfompatienter. Forskning har till exempel visat att metanolextrakt från skal, fruktkött och frön av Annona-frukten hade en måttlig effekt, medan kloroformextraktet uppvisade en kraftig effekt på Ramos-cellernas proliferation. Studien föreslog därför att Annona-frukter kan visa sig vara effektiva vid förebyggande och behandling av lymfom [3].

Ramos-celler för din forskning

Publikationer om Ramos-celler

I detta avsnitt av artikeln listas några intressanta forskningspublikationer som handlar om Ramos-cellinjen:

Kontinuerlig signalering av CD 79b och CD 19 krävs för att B-celler i Burkitt-lymfom ska vara livskraftiga

Denna forskning publicerades i tidskriften The EMBO Journal 2018. Studien visade att Ramos-B-celler kräver uttryck av markörerna CD19 och CD79b (BCR-signalkomponenten Igβ) för sin livskraft och konkurrenskraftiga tillväxt.

Smac-mimetika och TRAIL samverkar för att inducera MLKL-beroende nekroptos i cellinjer från Burkitts lymfom

Denna studie, publicerad i Neoplasia (2021), utnyttjade Ramos-celler och föreslog att mixed lineage kinase domain (MLKL) regleras epigenetiskt i Burkitt-lymfomceller (Ramos). Det är således en lovande prognostisk markör för behandlingsframgång vid nekroptosrelaterade terapier.

Fosforylering av PBK/TOPK Tyr74 genom JAK2 främjar tumörtillväxt vid Burkitts lymfom

Denna forskningsartikel i Cancer Letters (2022) tyder på att signalaxeln JAK2/TOPK/histon H3 spelar en avgörande roll för proliferation av B-lymfomcellinjer in vitro.

Verotoxin-1-inducerad ER-stress utlöser apoptotiska eller överlevnadsvägar i Burkitt-lymfomceller

Denna artikel publicerades 2020 i Toxins. Studien föreslog att behandling med verotoxin-1 inducerar endoplasmatisk retikulum (ER)-stress i Ramos B-celler. Detta leder till initiering av apoptotiska eller överlevnadssignaler i lymfomcellinjer.

Silymarin hämmar genuttrycket av Toll-liknande receptor 8 och apoptos i Ramos-cancercellinjen

Denna studie i Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) rapporterade att en naturlig förening, silymarin, hämmar TLR8-uttrycket (Toll-liknande receptor 8) och apoptos i Ramos-cellinjen.

Resurser för Ramos-cellinjen: protokoll, videor och mer

Här följer några online-resurser om Ramos-celler:

• Transfektion av Ramos-celler: Detta dokument hjälper dig att lära dig protokollet för transfektion av Ramos-cellinjen.

Följande länk innehåller protokollet för odling av Ramos-celler:

• Ramos-celler: Denna webbplats innehåller grundläggande information om Ramos-cellinjen. Den innehåller även ett protokoll för subkultivering av Ramos-celler samt hantering av prolifererande och kryokonserverade odlingar. Dessutom finns information om odlingsmedier för Ramos-celler, fördubblingstid och celltäthet tillgänglig.

Nyckelinsikter om Ramos-celler: Ofta ställda frågor

Referenser

1. Kerntke, C.G., Analys av organisationen och signaleringsförmågan hos membran-IgE under dess interaktion med CD19 och CD23 i B-lymfocyter. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., Hämning av GCN5 HAT minskar överlevnaden hos humana Burkitt-lymfomceller genom att minska uttrycket av MYC-målgener och hämma BCR-signalvägarna. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fytokemisk profil och antioxidantaktivitet hos annonafrukt samt dess effekt på lymfomcellernas proliferation. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58–68.