خلايا راموس - أبحاث سرطان الغدد الليمفاوية من نوع الخلايا البائية: أهمية خلايا راموس

خلايا راموس هي سلالة من الخلايا الليمفاوية من نوع B تُستخدم على نطاق واسع في الأبحاث الطبية الحيوية. وتُستخدم بشكل خاص في دراسات علم المناعة ودراسات السرطان. يستخدم الباحثون هذه الخلايا لتقييم الأدوية السامة للخلايا ودراسة مستضدات سطح الخلايا البائية، والطفرات، وآليات موت الخلايا المبرمج.

أصل خلايا راموس وخصائصها العامة

يلعب فهم أصل خط الخلايا وخصائصه الأساسية دورًا حاسمًا في تحديد مدى ملاءمته لأبحاثك. لذلك، يُنصح بتقييم هذه المعلومات بدقة قبل البدء في أي عمل عليها. يغطي هذا القسم الأسئلة المتكررة التالية: ما هو خط الخلايا السرطانية Ramos؟ ما هو خط الخلايا Ramos CD19؟ ما هو خط الخلايا Ramos CD20؟ ما هو أصل خلايا Ramos؟ ما هي العلامات الموجودة على خط الخلايا Ramos؟ ما هو حجم خلايا Ramos؟ ما هي الشكل المورفولوجي لخط الخلايا Ramos؟

• تم إنشاء خط الخلايا Ramos في عام 1972. وقد تم استخلاص هذه الخلايا من السائل الاستسقائي لطفل قوقازي يبلغ من العمر 3 سنوات مصاب بليمفوما بوركيت من النوع الأمريكي [1].
• وتُعبِّر هذه الخلايا عن علامات الخلايا البائية الرئيسية، بما في ذلك الغلوبولين المناعي M (IgM)، وCD19، وCD20، وCD22.
• خلايا راموس هي خلايا سلبية لفيروس إبشتاين-بار. ومع ذلك، يمكن تحويلها بشكل دائم إلى خلايا إيجابية لفيروس إبشتاين-بار.
• تتميز خلايا اللمفوبلاستات البائية هذه بشكلها الدائري.

خلايا «راموس الزرقاء» مقابل خلايا «راموس B»

تعد كل من خلايا راموس الزرقاء وخلايا راموس B خلايا ليمفوما بوركيت بشرية. وكلاهما سلبيان لفيروس إبشتاين-بار. ويكمن الاختلاف بين هاتين الخلايا في أن خلايا راموس الزرقاء تعبر عن جين مبلغ قابل للتحفيز بواسطة NF-κB/AP-1 يُسمى SEAP (الفوسفات القلوي الجنيني المُفرز)، في حين أن خلايا راموس البيضاء لا تعبر عنه.

رسوم متحركة ثلاثية الأبعاد عالية الدقة توضح ديناميكيات الخلية الليمفاوية من النوع B.

زراعة خلايا راموس

يُخصص هذا القسم من المقال لمساعدتك في التعرف على المعلومات الأساسية المتعلقة بزراعة خلايا راموس. هنا، ستتعرف على: ما هو زمن تضاعف خطوط الخلايا؟ ما هي الوسط الموصى به؟ كيف تُزرع خلايا راموس؟

النقاط الرئيسية لاستزراع خلايا راموس

زمن التضاعف:

يبلغ وقت تضاعف خلايا راموس حوالي 20.4 ± 1.5 ساعة. ومع ذلك، قد يختلف هذا الوقت اعتمادًا على ظروف زراعة الخلايا المتوفرة.

ملتصقة أم معلقة:

تنمو خلايا راموس في حالة تعليق.

كثافة الخلايا:

الكثافة الخلوية المثلى لسلالة خلايا راموس هي 3 × 10⁵ خلية/مل. لإعادة الاستزراع، تُجمع الخلايا المعلقة عن طريق الطرد المركزي. تُضاف الخلايا إلى وسط جديد وتُعاد تعليقها بعناية. بعد ذلك، تُسكب الخلايا في قارورة جديدة بكثافة تتراوح من 3 إلى 9 × 10^⁵ خلية/مل.

وسط النمو:

يُستخدم RPMI 1640 المُضاف إليه 10% من مصل الأبقار الجنينية، و2.1 مليمول/مول من الجلوتامين المستقر، و2.0 غرام/لتر من NaHCO3 لزراعة خلايا راموس. يجب استبدال الوسط مرتين في الأسبوع.

ظروف النمو:

يُحفظ خط خلايا ليمفوما بوركيت البشري (راموس) في حاضنة مرطبة بنسبة 5% من ثاني أكسيد الكربون ودرجة حرارة 37 درجة مئوية.

التخزين:

يتم حفظ خلايا راموس المجمدة عند درجة حرارة أقل من -150 درجة مئوية أو في الطور البخاري للنيتروجين السائل للحفاظ على حيوية الخلايا لفترات أطول.

عملية التجميد والوسط:

يُوصى باستخدام وسط التجميد CM-1 أو CM-ACF لخلايا Ramos. تُستخدم عملية تجميد بطيئة تسمح بانخفاض تدريجي في درجة الحرارة بمقدار 1 درجة مئوية في الدقيقة. يحمي هذا التجميد البطيء الخلايا من أي صدمة ويعزز قابليتها للبقاء.

عملية الذوبان:

لإذابة الجليد، تُحفظ الخلايا المجمدة في حمام مائي مُسخّن مسبقًا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة تتراوح بين 40 و60 ثانية حتى يتبقى كتلة جليدية صغيرة. بعد ذلك، تُضاف وسط جديد وتُطرد الخلايا لإزالة عناصر وسط التجميد. يُعاد تعليق الحبيبات وتُوزع الخلايا في قارورة جديدة تحتوي على وسط الاستزراع.

مستوى السلامة الحيوية:

يُعد المختبر ذو مستوى السلامة الحيوية 1 ضروريًا للحفاظ على مزارع خلايا راموس السلبية لفيروس إبشتاين-بار. ومع ذلك، يتم رفع مستوى السلامة الحيوية إلى 2 عندما تتحول خلايا راموس بشكل دائم إلى خلايا إيجابية لفيروس إبشتاين-بار.

سلسلة خلايا اللمفاويات البائية المتكاثرة «راموس» في حالة تعليق، كما تظهر بتكبير 10x و20x.

خلايا راموس: المزايا والقيود

مثل سلالات الخلايا الأخرى، تتمتع خلايا راموس أيضًا بمزايا وقيود مميزة. سيستكشف هذا القسم بعضًا من أبرزها والتي قد تؤثر بشكل كبير على استخدامها في الأبحاث.

المزايا

• نموذج خلايا ليمفوما بوركيت: تم تطوير خلايا راموس من مريض مصاب بليمفوما بوركيت، مما يجعلها نموذجًا خلويًا مناسبًا لدراسة الأورام الخبيثة اللمفاوية.
• سهولة الاستزراع: من السهل استزراع خلايا راموس وصيانتها في المختبر. فهي تتميز بمتطلبات وشروط استزراع خلوية بسيطة.

القيود

• نموذج مختبري: قد لا تمثل خلايا راموس التعقيد الجيني لأورام المرضى بشكل كامل، مما يحد من قابلية تطبيقها. علاوة على ذلك، قد لا تعكس نتائج التجارب التي تستخدم سلالة خلايا راموس الظروف الحيوية بالكامل، مما قد يؤدي إلى تحديات في تطبيق النتائج السريرية.

 تطبيقات خلايا راموس في مجال البحوث

تقدم خلايا راموس تطبيقات واعدة في المجال الطبي الحيوي. وتشمل بعض الاستخدامات البحثية الضرورية لخلايا راموس ما يلي:

• بيولوجيا الليمفوما: تُستخدم خلايا راموس على نطاق واسع لدراسة بيولوجيا الليمفوما. وتُستخدم لاستكشاف العوامل الجينية والجزيئية الكامنة وراء الأورام الخبيثة اللمفاوية. إلى جانب ذلك، يكتسب الباحثون رؤى حول بداية المرض وتطوره وتباينه باستخدام خلايا سرطان الغدد الليمفاوية من نوع بوركيت هذه. كما يتم التحقيق في الطفرات الجينية ومسارات الإشارات، مما قد يؤدي إلى تطوير نُهج تشخيصية وعلاجية أكثر دقة. وقد وجدت دراسة أُجريت في عام 2019 أن تثبيط إنزيم أسيتيل ترانسفيراز الهستون GCN5 (التحكم العام غير القابل للتثبيط 5) يقلل من قدرة خلايا سرطان الغدد الليمفاوية من نوع بوركيت البشرية (راموس) على تكوين الأورام عن طريق تعطيل إشارات مستقبلات الخلايا البلازمية (BCR). لذلك، يُقترح GCN5 كهدف ممكن لتطوير العلاج الدوائي لليمفوما [2].
• فحص الأدوية واختبارها: تُستخدم سلالة خلايا Ramos على نطاق واسع في أغراض فحص الأدوية واختبارها. يقوم الباحثون بتقييم فعالية المركبات العلاجية المحتملة في تثبيط تكاثر الخلايا ونموها وتحفيز موت الخلايا في خلايا الليمفوما. ويساعد ذلك في تحديد المرشحين الواعدين من الأدوية، مما يسهل تطوير علاجات موجهة لمرضى الليمفوما. فقد أظهرت إحدى الدراسات أن المستخلص الميثانولي لقشر ولب وبذور فاكهة الأنونا أظهر تأثيرات معتدلة، في حين أظهر المستخلص الكلوروفورمي تأثيرات قوية على تكاثر خلايا راموس. وبالتالي، اقترحت الدراسة أن فاكهة الأنونا قد تثبت فعاليتها في الوقاية من الليمفوما وعلاجها [3].

خلايا راموس لأبحاثك

المنشورات التي تتناول خط الخلايا «راموس»

يستعرض هذا القسم من المقالة بعض المنشورات البحثية المثيرة للاهتمام التي تتناول سلالة خلايا راموس:

الإشارة المستمرة لـ CD 79b و CD 19 ضرورية لصلاحية خلايا B في ليمفوما بوركيت

نُشرت هذه الدراسة في مجلة EMBO في عام 2018. ووجدت الدراسة أن خلايا B من سلالة راموس تتطلب التعبير عن علامتي CD19 وCD79b (مكون إشارة BCR Igβ) من أجل صلاحيتها ونموها التنافسي.

تتعاون مقلدات Smac وTRAIL على تحفيز النيكروبتوز المعتمد على MLKL في سلالات خلايا ليمفوما بوركيت

استخدمت هذه الدراسة، التي نُشرت في مجلة Neoplasia (2021)، خلايا راموس واقترحت أن مجال كيناز السلالة المختلطة (MLKL) يخضع للتنظيم اللاجيني في خلايا ليمفوما بوركيت (راموس). وبالتالي، فهو علامة تنبؤية واعدة لنجاح العلاج بالعلاجات المرتبطة بالنكروبتوز.

يساهم فسفرة PBK/TOPK Tyr74 بواسطة JAK2 في تعزيز نمو ورم ليمفوما بوركيت

أشارت هذه المقالة البحثية المنشورة في مجلة «Cancer Letters» (2022) إلى أن محور الإشارة JAK2/TOPK/هيستون H3 يلعب دورًا حاسمًا في تكاثر سلالات خلايا ليمفوما B في المختبر.

الإجهاد في الشبكة الإندوبلازمية (ER) الناجم عن فيروتوكسين-1 يُحفز مسارات موت الخلايا المبرمج أو البقاء على قيد الحياة في خلايا ليمفوما بوركيت

نُشرت هذه المقالة في عام 2020 في مجلة «Toxins». اقترحت الدراسة أن العلاج بفيروتوكسين-1 يسبب إجهاد الشبكة الإندوبلازمية (ER) في خلايا Ramos B. ويؤدي ذلك إلى بدء إشارات الموت الخلوي المبرمج أو البقاء في سلالات خلايا الليمفوما.

يُثبط السيليمارين التعبير الجيني لمستقبلات تول-لايك 8 (TLR8) وموت الخلايا المبرمج في سلالة خلايا راموس السرطانية

أفادت هذه الدراسة المنشورة في مجلة Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) أن مركبًا طبيعيًّا، وهو السيليمارين، يثبط التعبير الجيني لمستقبلات تول-لايك 8 (TLR8) وموت الخلايا المبرمج في سلالة خلايا راموس.

موارد حول خط الخلايا راموس: بروتوكولات، مقاطع فيديو، والمزيد

فيما يلي بعض الموارد المتاحة عبر الإنترنت حول خلايا راموس:

• إدخال الجينات في خلايا راموس: سيساعدك هذا المستند على تعلم بروتوكول إدخال الجينات في خط الخلايا راموس.

يحتوي الرابط التالي على بروتوكول زراعة خلايا راموس:

• خلايا راموس: يحتوي هذا الموقع الإلكتروني على معلومات أساسية حول خط خلايا راموس. كما يحتوي على بروتوكول لإعادة زراعة خلايا راموس والتعامل مع المزارع المتكاثرة والمحفوظة بالتبريد. علاوة على ذلك، تتوفر أيضًا معلومات بشأن وسط زراعة خلايا راموس، ووقت التضاعف، وكثافة الخلايا.

رؤى أساسية حول خلايا راموس: الأسئلة المتداولة

المراجع

1. Kerntke, C.G., تحليل تنظيم وقدرة إرسال الإشارات لـ IgE الغشائي أثناء تفاعله مع CD19 و CD23 في الخلايا الليمفاوية B. 2021، جامعة جورج-أوغست في غوتنغن.
2. Farria, A.T.، وآخرون، تثبيط GCN5 HAT يقلل من بقاء خلايا ليمفوما بوركيت البشرية من خلال تقليل التعبير الجيني المستهدف لـ MYC وإعاقة مسارات إشارات BCR. Oncotarget، 2019. 10(56): ص. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M.، وآخرون، «التركيب الكيميائي النباتي والنشاط المضاد للأكسدة لفاكهة الأنونا وتأثيرها على تكاثر خلايا الليمفوما». Food Science & Nutrition، 2020. 8(1): ص. 58-68.