Ramosi rakud – B-rakk-lümfoomi uurimine: Ramosi rakkude tähtsus

Ramosi rakud on B-lümfotsüütide rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt biomeditsiinilistes uuringutes. Eelkõige leiavad need rakud peamist rakendust immunoloogias ja vähiuuringutes. Teadlased kasutavad neid rakke tsütotoksiliste ravimite hindamiseks ning B-rakkude pinnal asuvate antigeenide, mutatsioonide ja apoptootiliste mehhanismide uurimiseks.

Ramosi rakkude päritolu ja üldised omadused

Rakuliini päritolu ja oluliste omaduste mõistmine mängib olulist rolli selle sobivuse hindamisel teie uurimistööks. Seetõttu on soovitatav seda teavet põhjalikult hinnata enne töö alustamist. Käesolevas jaotises käsitletakse järgmisi korduma kippuvaid küsimusi: Mis on Ramosi vähirakuliin? Mis on Ramosi rakuliini CD19? Mis on Ramosi rakuliini CD20? Mis on Ramosi rakkude päritolu? Millised on Ramosi rakuliini markerid? Milline on Ramosi rakkude suurus? Milline on Ramosi rakuliini morfoloogia?

• Ramosi rakuliin loodi 1972. aastal. Need rakud saadi Ameerika tüüpi Burkitti lümfoomiga 3-aastase valge poisi astsiitvedelikust [1].
• Need ekspresseerivad peamisi B-rakkude markereid, sealhulgas immunoglobuliini M (IgM), CD19, CD20 ja CD22.
• Ramosi rakud on Epstein-Barr-viirus-negatiivsed rakud. Neid on siiski võimalik püsivalt muuta Epstein-Barr-viirus-positiivseteks rakkudeks.
• Need B-lümfoblastid on morfoloogiliselt ümmarguse kujuga.

Ramosi sinised rakud vs Ramosi B-rakud

Ramosi sinised rakud ja Ramosi B-rakud on mõlemad inimese Burkitti lümfoomi rakud. Mõlemad on Epstein-Barr-viiruse suhtes negatiivsed. Nende rakkude vahe seisneb selles, et Ramosi sinised rakud ekspresseerivad NF-κB/AP-1 poolt indutseeritavat reportergeeni nimega SEAP (sekreteeritud embrüonaalne aluseline fosfataas), samas kui valged Ramosi rakud seda ei tee.

Kõrge eraldusvõimega 3D-animatsioon, mis illustreerib B-lümfotsüüdi dünaamikat.

Ramos-rakkude kasvatamine

Artikli käesolev osa on pühendatud Ramosi rakkude kultiveerimisega seotud olulise teabe tutvustamisele. Siit saate teada: milline on rakuliini kahekordistumisaeg? Milline on soovitatav kasvukeskkond? Kuidas Ramosi rakke kultiveerida?

Ramosi rakkude kasvatamise põhipunktid

Kaksikustumisaeg:

Ramos-rakkude kahekordistumisaeg on ligikaudu 20,4 ± 1,5 tundi. See võib aga varieeruda sõltuvalt rakukultuuri kasvatamistingimustest.

Adherentsed või suspensioonis:

Ramosi rakud kasvavad suspensioonis.

Rakkude tihedus:

Ramosi rakuliini optimaalne rakutihedus on 3 × 10^⁵ rakku/ml. Subkultiveerimiseks kogutakse suspensioonis olevad rakud tsentrifuugimise teel. Rakudele lisatakse värsket kasvukeskkonda ja need suspendeeritakse hoolikalt uuesti. Seejärel valati rakud uude kolbi tihedusega 3–9 × 10^⁵ rakku/ml.

Kasvukeskkond:

Ramosi rakkude kasvatamiseks kasutatakse RPMI 1640-i, millele on lisatud 10% veise loote seerumit, 2,1 mM stabiilset glutamiini ja 2,0 g/l NaHCO3. Kasvukeskkonda tuleks vahetada kaks korda nädalas.

Kasvatustingimused:

Inimese Burkitti lümfoomi rakuliini (Ramos) hoitakse niisutatud inkubaatoris 5% CO₂ ja 37 °C juures.

Säilitamine:

Külmutatud Ramosi rakke hoitakse temperatuuril alla -150 °C või vedela lämmastiku aurufaasis, et tagada rakkude eluvõime pikemaks ajaks.

Külmutamisprotsess ja keskkond:

Ramosi rakkude jaoks soovitatakse kasutada CM-1 või CM-ACF külmutuskeskkonda. Kasutatakse aeglast külmutamisprotsessi, mis võimaldab temperatuuri järkjärgulist langust 1 kraadi Celsiuse järgi minutis. See aeglane külmutamine kaitseb rakke šoki eest ja parandab nende eluvõimelisust.

Sulatusprotsess:

Sulatamiseks hoitakse külmutatud rakke eelsoojendatud veevannis temperatuuril 37 °C 40–60 sekundit, kuni jääb alles väike jääklomp. Seejärel lisatakse värsket kasvatuskeskkonda ja rakke tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda jäävad osakesed. Sett resuspendeeritakse uuesti ja rakud jaotatakse uude kolbi, mis sisaldab kasvatuskeskkonda.

Bioloogilise ohutuse tase:

Epstein-Barr-viirusega negatiivsete Ramosi rakukultuuride säilitamiseks on hädavajalik 1. bioloogilise ohutuse taseme labor. Kui Ramosi rakud muutuvad püsivalt Epstein-Barr-viirusega positiivseks, tõstetakse bioloogilise ohutuse tase 2. tasemele.

Ramosi paljunev B-lümfotsüütide rakuliin suspensioonis, pildistatud 10- ja 20-kordse suurendusega.

Ramos: eelised ja piirangud

Nagu teistelgi rakuliinidel, on ka Ramosi rakkudel oma eelised ja piirangud. Käesolevas jaotises käsitletakse mõningaid märkimisväärseid aspekte, mis võivad oluliselt mõjutada nende kasutamist teadustöös.

Eelised

• Burkitti lümfoomi rakumudel: Ramosi rakud on arendatud Burkitti lümfoomiga patsiendilt, mistõttu on need asjakohane rakumudel lümfoidsete pahaloomuliste kasvajate uurimiseks.
• Lihtne kasvatamine: Ramosi rakke on laboris lihtne kasvatada ja hooldada. Nende rakukultuuri nõuded ja tingimused on lihtsad.

Piirangud

• In vitro mudel: Ramosi rakud ei pruugi täielikult kajastada patsiendi kasvajate geneetilist keerukust, mis piirab nende rakendatavust. Lisaks ei pruugi Ramosi rakuliini kasutamisel saadud eksperimentide tulemused täielikult kajastada in vivo tingimusi, mis võib kaasa tuua translatsioonilisi väljakutseid.

 Ramosi rakkude rakendused teadustöös

Ramosi rakud pakuvad paljutõotavaid rakendusi biomeditsiinivaldkonnas. Mõned Ramosi rakkude olulisemad teaduslikud rakendused on järgmised:

• Lümfoomi bioloogia: Ramosi rakke kasutatakse laialdaselt lümfoomi bioloogia uurimiseks. Neid kasutatakse lümfoidsete pahaloomuliste kasvajate aluseks olevate geneetiliste ja molekulaarsete tegurite uurimiseks. Lisaks saavad teadlased nende Burkitti lümfoomi rakkude abil teadmisi haiguse tekkimise, progresseerumise ja heterogeensuse kohta. Uuritakse ka geneetilisi mutatsioone ja signaaliteid, mis võib viia täpsemate diagnostiliste ja ravivõtete väljatöötamiseni. 2019. aastal läbi viidud uuringus leiti, et GCN5 (General control non-depressible 5) histooni atsetüültransferaasi inhibeerimine vähendab inimese Burkitti lümfoomi rakkude (Ramos) tuumorigeensust, häirides BCR-signaalimist. Seetõttu soovitatakse GCN5-d kui sobivat sihtmärki lümfoomi ravimite väljatöötamiseks [2].
• Ravimite sõelumine ja katsetamine: Ramosi rakuliini kasutatakse laialdaselt ravimite sõelumisel ja katsetamisel. Teadlased hindavad potentsiaalsete ravimühendite tõhusust lümfoomirakkude proliferatsiooni ja kasvu pärssimisel ning rakkude surma esilekutsumisel. See aitab tuvastada paljulubavaid ravimikandidaate, hõlbustades seeläbi sihtotstarbeliste ravimeetodite väljatöötamist lümfoomipatsientidele. Näiteks näitas üks uuring, et Annona puuvilja koore, viljaliha ja seemnete metanooliekstrakt avaldas Ramosi rakkude proliferatsioonile mõõdukat mõju, samas kui kloroformiekstrakt avaldas tugevat mõju. Seega järeldati uuringus, et Annona puuviljad võivad osutuda efektiivseks lümfoomi ennetamisel ja ravis [3].

Ramosi rakud teie teadustööks

Ramosi rakke käsitlevad publikatsioonid

Artikli selles osas on loetletud mõned huvitavad teaduspublikatsioonid, milles käsitletakse Ramosi rakuliini:

Burkitti lümfoomi B-rakkude elujõulisuseks on vajalik CD 79b ja CD 19 pidev signaalimine

See uurimus avaldati ajakirjas „The EMBO Journal“ 2018. aastal. Uuringus leiti, et Ramosi B-rakkude elujõulisus ja konkurentsivõimeline kasv eeldavad Ramosi rakkude CD19 ja CD79b (BCR-signaalimiskomponent Igβ) markerite ekspressiooni.

Smac-mimeetikumid ja TRAIL indutseerivad koostöös MLKL-sõltuvat nekroptoosi Burkitti lümfoomi rakuliinides

Selles ajakirjas „Neoplasia“ (2021) avaldatud uuringus kasutati Ramosi rakke ja esitati hüpotees, et segaliini kinaasi domeen (MLKL) on Burkitti lümfoomi rakkudes (Ramos) epigeneetiliselt reguleeritud. Seega on see paljulubav prognostiline marker nekroptoosiga seotud ravimeetodite edukuse hindamiseks.

JAK2 poolt PBK/TOPK Tyr74 fosforüleerimine soodustab Burkitti lümfoomi kasvaja kasvu

Ajakirjas „Cancer Letters“ (2022) avaldatud uurimus viitas, et JAK2/TOPK/histoon H3 signaalitee mängib olulist rolli B-lümfoomi rakuliinide proliferatsioonis in vitro.

Verotoksiin-1-i poolt indutseeritud ER-stress käivitab Burkitti lümfoomi rakkudes apoptootilisi või ellujäämisradusid

See artikkel avaldati 2020. aastal ajakirjas „Toxins“. Uuringus väidetakse, et verotoksiin-1-ravi indutseerib Ramosi B-rakkudes endoplasmaatilise retikulu (ER) stressi. See viib lümfoomi rakuliinides apoptootiliste või ellujäämissignaalide käivitumiseni.

Silümariin pärsib Toll-like retseptori 8 geeni ekspressiooni ja apoptoosi Ramosi vähirakkude liinis

Selles ajakirjas „Avicenna Journal of Phytomedicine“ (2020) avaldatud uuringus teatati, et looduslik ühend silümariin pärsib TLR8 (Toll-like retseptor 8) ekspressiooni ja apoptoosi Ramosi rakuliinis.

Ramosi rakuliini alased materjalid: protokollid, videod ja muud

Allpool on toodud mõned Ramosi rakke käsitlevad veebivahendid:

• Ramosi rakkude transfektsioon: see dokument aitab teil tutvuda Ramosi rakuliini transfektsiooni protokolliga.

Järgmine link sisaldab Ramosi rakuliini kultiveerimise protokolli:

• Ramosi rakud: See veebisait sisaldab põhiandmeid Ramosi rakuliini kohta. Samuti on seal toodud Ramosi rakkude subkultiveerimise protokoll ning juhised proliferatsioonis olevate ja krüokonserveeritud kultuuride käitlemiseks. Lisaks on saadaval teave Ramosi rakkude kasvukeskkonna, kahekordistumisaja ja rakutiheduse kohta.

Ramos Cells'i peamised teadmised: Korduma kippuvad küsimused

Viited

1. Kerntke, C.G., Membraani-IgE struktuuri ja signaaliedastusvõime analüüs selle interaktsiooni ajal CD19 ja CD23-ga B-lümfotsüütides. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T. jt., GCN5 HAT-i inhibeerimine vähendab inimese Burkitti lümfoomi rakkude elulemust, vähendades MYC sihtgeeni ekspressiooni ja takistades BCR signaaliteid. Oncotarget, 2019. 10(56): lk 5847.
3. Al‐Shaya, H.M. jt., Annona-vilja fütokeemiline profiil ja antioksüdantne toime ning selle mõju lümfoomirakkude proliferatsioonile. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): lk 58–68.