Cellules Ramos – Recherche sur le lymphome à cellules B : l’importance des cellules Ramos

Les cellules Ramos constituent une lignée cellulaire de lymphocytes B largement utilisée dans la recherche biomédicale. Elles trouvent notamment des applications principales en immunologie et dans les études sur le cancer. Les chercheurs utilisent ces cellules pour évaluer les médicaments cytotoxiques et étudier les antigènes de surface des lymphocytes B, les mutations et les mécanismes d’apoptose.

Origine et caractéristiques générales des cellules Ramos

Comprendre l’origine et les caractéristiques essentielles d’une lignée cellulaire joue un rôle crucial pour déterminer si celle-ci est adaptée à vos recherches. Il est donc conseillé d’évaluer minutieusement ces informations avant de commencer tout travail sur cette lignée. Cette section aborde les questions fréquemment posées suivantes : Qu’est-ce que la lignée cellulaire cancéreuse Ramos ? Qu’est-ce que la lignée cellulaire Ramos CD19 ? Qu’est-ce que la lignée cellulaire Ramos CD20 ? Quelle est l’origine des cellules Ramos ? Quels sont les marqueurs de la lignée cellulaire Ramos ? Quelle est la taille des cellules Ramos ? Quelle est la morphologie de la lignée cellulaire Ramos ?

• La lignée cellulaire Ramos a été établie en 1972. Ces cellules ont été isolées à partir du liquide ascitique d’un garçon caucasien de 3 ans atteint d’un lymphome de Burkitt de type américain [1].
• Elles expriment des marqueurs clés des lymphocytes B, notamment l’immunoglobuline M (IgM), le CD19, le CD20 et le CD22.
• Les cellules Ramos sont négatives pour le virus d'Epstein-Barr. Elles peuvent toutefois être transformées de manière permanente en cellules positives pour le virus d'Epstein-Barr.
• Ces lymphoblastes B présentent une morphologie de forme ronde.

Cellules bleues de Ramos vs cellules B de Ramos

Les cellules bleues de Ramos et les cellules B de Ramos sont toutes deux des cellules issues du lymphome de Burkitt humain. Elles sont toutes deux négatives pour le virus d’Epstein-Barr. La différence entre ces cellules réside dans le fait que les cellules bleues de Ramos expriment un gène rapporteur inductible par NF-κB/AP-1 appelé SEAP (phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée), contrairement aux cellules blanches de Ramos.

Animation 3D haute résolution illustrant la dynamique d'un lymphocyte B.

Culture des cellules Ramos

Cette section de l'article a pour but de vous aider à acquérir des informations essentielles sur la culture des cellules Ramos. Vous y découvrirez notamment : quel est le temps de doublement de cette lignée cellulaire ? Quel est le milieu de culture recommandé ? Comment cultiver les cellules Ramos ?

Points clés pour la culture des cellules Ramos

Temps de doublement :

Le temps de doublement des cellules Ramos est d’environ 20,4 ± 1,5 heures. Il peut toutefois varier en fonction des conditions de culture mises en place.

En adhésion ou en suspension :

Les cellules Ramos se développent en suspension.

Densité cellulaire :

La densité cellulaire optimale pour la lignée cellulaire Ramos est de 3 × 10^⁵ cellules/ml. Pour la repiquage, les cellules en suspension sont récoltées par centrifugation. On ajoute du milieu frais aux cellules et on les remet soigneusement en suspension. Ensuite, les cellules sont transférées dans un nouveau flacon à une densité comprise entre 3 et 9 × 10^⁵ cellules/ml.

Milieu de culture :

Le milieu de culture utilisé pour les cellules Ramos est du RPMI 1640 complété par 10 % de sérum fœtal bovin, 2,1 mM de glutamine stable et 2,0 g/L de NaHCO₃. Le milieu doit être renouvelé deux fois par semaine.

Conditions de culture :

La lignée cellulaire de lymphome de Burkitt humain (Ramos) est conservée dans un incubateur humidifié à 5 % de CO₂ et à une température de 37 °C.

Conservation :

Les cellules Ramos congelées sont conservées à une température inférieure à -150 °C ou dans la phase vapeur d’azote liquide afin de préserver leur viabilité à long terme.

Procédé et milieu de congélation :

Les milieux de congélation CM-1 ou CM-ACF sont recommandés pour les cellules Ramos. On utilise un processus de congélation lente qui permet une baisse progressive de la température de 1 degré Celsius par minute. Cette congélation lente protège les cellules de tout choc et améliore leur viabilité.

Procédé de décongélation :

Pour la décongélation, les cellules congelées sont placées dans un bain-marie préchauffé à 37 °C pendant 40 à 60 secondes, jusqu’à ce qu’il ne reste plus qu’un petit amas de glace. Ensuite, on ajoute du milieu frais et on centrifuge les cellules pour éliminer les résidus du milieu de congélation. Le culot est à nouveau remis en suspension et les cellules sont transférées dans un nouveau flacon contenant du milieu de culture.

Niveau de biosécurité :

Un laboratoire de niveau de biosécurité 1 est indispensable pour maintenir des cultures de cellules Ramos négatives pour le virus d’Epstein-Barr. Cependant, le niveau de biosécurité passe à 2 lorsque les cellules Ramos deviennent définitivement positives pour le virus d’Epstein-Barr.

Lignée cellulaire de lymphocytes B en prolifération de Ramos en suspension, observée à un grossissement de 10x et 20x.

Ramos : avantages et limites

À l’instar d’autres lignées cellulaires, les cellules Ramos présentent également des avantages et des limites bien distincts. Cette section abordera certains d’entre eux, particulièrement notables, qui peuvent influencer de manière significative leur utilisation dans la recherche.

Avantages

• Modèle cellulaire du lymphome de Burkitt : les cellules Ramos ont été développées à partir d’un patient atteint d’un lymphome de Burkitt, ce qui en fait un modèle cellulaire pertinent pour l’étude des hémopathies malignes lymphoïdes.
• Culture aisée : les cellules Ramos sont faciles à cultiver et à entretenir en laboratoire. Leurs besoins et leurs conditions de culture sont simples.

Limites

• Modèle in vitro : les cellules Ramos ne reflètent pas nécessairement toute la complexité génétique des tumeurs des patients, ce qui limite leur applicabilité. De plus, les résultats des expériences menées à l’aide de la lignée cellulaire Ramos peuvent ne pas refléter entièrement les conditions in vivo, ce qui peut poser des défis en matière de transposition clinique.

 Applications des cellules Ramos dans la recherche

Les cellules Ramos offrent des applications prometteuses dans le domaine biomédical. Parmi les utilisations essentielles de ces cellules en recherche, on peut citer :

• Biologie du lymphome : les cellules Ramos sont largement utilisées pour étudier la biologie du lymphome. Elles servent à explorer les facteurs génétiques et moléculaires à l’origine des hémopathies malignes lymphoïdes. Par ailleurs, les chercheurs acquièrent des connaissances sur l’apparition, la progression et l’hétérogénéité de la maladie grâce à ces cellules de lymphome de Burkitt. Les mutations génétiques et les voies de signalisation font également l’objet d’études, ce qui pourrait déboucher sur le développement d’approches diagnostiques et thérapeutiques plus précises. Une étude menée en 2019 a montré que l’inhibition de l’histone acétyltransférase GCN5 (General control non-depressible 5) réduit la tumorigénicité des cellules du lymphome de Burkitt humain (Ramos) en perturbant la signalisation du BCR. Par conséquent, GCN5 est proposé comme cible viable pour le développement d’un traitement médicamenteux contre le lymphome [2].
• Criblage et essais de médicaments : la lignée cellulaire Ramos est largement utilisée à des fins de criblage et d’essais de médicaments. Les chercheurs évaluent l’efficacité de composés thérapeutiques potentiels pour inhiber la prolifération et la croissance cellulaires et induire la mort cellulaire dans les cellules de lymphome. Cela permet d’identifier des candidats-médicaments prometteurs, facilitant ainsi le développement de traitements ciblés pour les patients atteints de lymphome. Une étude a notamment montré que l’extrait méthanolique de l’écorce, de la pulpe et des graines du fruit d’Annona exerçait des effets modérés, tandis que l’extrait de chloroforme présentait des effets marqués sur la prolifération des cellules Ramos. Ainsi, l’étude a suggéré que les fruits d’Annona pourraient s’avérer efficaces dans la prévention et le traitement du lymphome [3].

Cellules de Ramos pour vos recherches

Publications consacrées aux cellules Ramos

Cette section de l'article répertorie quelques publications de recherche intéressantes consacrées à la lignée cellulaire Ramos :

Une signalisation continue des marqueurs CD79b et CD19 est nécessaire au bon fonctionnement des cellules B du lymphome de Burkitt

Cette étude a été publiée dans la revue The EMBO Journal en 2018. Elle a montré que les cellules B Ramos ont besoin de l'expression des marqueurs CD19 et CD79b (composant de signalisation BCR Igβ) pour assurer leur viabilité et leur croissance compétitive.

Les mimétiques de Smac et le TRAIL coopèrent pour induire une nécroptose dépendante de MLKL dans les lignées cellulaires du lymphome de Burkitt

Cette étude, publiée dans *Neoplasia* (2021), a utilisé des cellules Ramos et a suggéré que le domaine de kinase de lignée mixte (MLKL) est régulé de manière épigénétique dans les cellules du lymphome de Burkitt (Ramos). Il s’agit donc d’un marqueur pronostique prometteur pour le succès thérapeutique des traitements ciblant la nécroptose.

La phosphorylation de PBK/TOPK Tyr74 par JAK2 favorise la croissance tumorale du lymphome de Burkitt

Cet article de recherche publié dans Cancer Letters (2022) suggère que l’axe de signalisation JAK2/TOPK/histone H3 joue un rôle crucial dans la prolifération des lignées cellulaires du lymphome B in vitro.

Le stress du réticulum endoplasmique induit par la vérotoxine-1 déclenche des voies d’apoptose ou de survie dans les cellules du lymphome de Burkitt

Cet article a été publié en 2020 dans la revue *Toxins*. L’étude a montré que l’exposition à la vérotoxine-1 induit un stress du réticulum endoplasmique (RE) dans les cellules B Ramos. Cela conduit au déclenchement de voies de signalisation apoptotiques ou de survie dans les lignées cellulaires de lymphome.

La silymarine inhibe l’expression du gène du récepteur Toll-like 8 et l’apoptose dans la lignée cellulaire cancéreuse Ramos

Cette étude, parue dans l’Avicenna Journal of Phytomedicine (2020), a montré qu’un composé naturel, la silymarine, inhibe l’expression du TLR8 (récepteur Toll-like 8) et l’apoptose dans la lignée cellulaire Ramos.

Ressources sur la lignée cellulaire Ramos : protocoles, vidéos et plus encore

Voici quelques ressources en ligne sur les cellules Ramos :

• Transfection des cellules Ramos : ce document vous aidera à prendre connaissance du protocole de transfection de la lignée cellulaire Ramos.

Le lien suivant contient le protocole de culture des cellules Ramos :

• Cellules Ramos : ce site web contient des informations de base sur la lignée cellulaire Ramos. Il contient également un protocole pour la sous-culture des cellules Ramos et la manipulation des cultures en prolifération et cryoconservées. De plus, des informations concernant les milieux de culture des cellules Ramos, le temps de doublement et la densité cellulaire sont également disponibles.

Aperçu des cellules de Ramos : Questions fréquemment posées

Références

1. Kerntke, C.G., Analyse de l'organisation et de la capacité de signalisation de l'IgE membranaire lors de son interaction avec les molécules CD19 et CD23 dans les lymphocytes B. 2021, Université Georg-August de Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., L’inhibition de l’HAT GCN5 réduit la survie des cellules du lymphome de Burkitt humain en diminuant l’expression des gènes cibles de MYC et en bloquant les voies de signalisation du BCR. Oncotarget, 2019. 10(56) : p. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Profil phytochimique et activité antioxydante du fruit de l’annona et son effet sur la prolifération des cellules de lymphome. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1) : p. 58-68.