Ramos-cellen – Onderzoek naar B-cellymfoom: het belang van Ramos-cellen

Ramos-cellen zijn een B-lymfocytcellijn die op grote schaal wordt gebruikt in biomedisch onderzoek. Ze worden met name toegepast in de immunologie en bij kankeronderzoek. Onderzoekers gebruiken deze cellen voor het evalueren van cytotoxische geneesmiddelen en het bestuderen van B-celoppervlakte-antigenen, mutaties en apoptotische mechanismen.

Herkomst en algemene kenmerken van Ramos-cellen

Inzicht in de oorsprong en essentiële kenmerken van een cellijn speelt een cruciale rol bij het bepalen of deze geschikt is voor uw onderzoek. Daarom is het raadzaam om deze informatie grondig te beoordelen voordat u ermee aan de slag gaat. In dit gedeelte worden de volgende veelgestelde vragen behandeld: Wat is de Ramos-kankercellijn? Wat is de Ramos-cellijn CD19? Wat is de Ramos-cellijn CD20? Wat is de oorsprong van Ramos-cellen? Welke markers zijn aanwezig op de Ramos-cellijn? Hoe groot zijn Ramos-cellen? Wat is de morfologie van de Ramos-cellijn?

• De Ramos-cellijn werd in 1972 opgezet. Deze cellen zijn afkomstig uit de ascitesvloeistof van een 3-jarige blanke jongen met een Burkitt-lymfoom van het Amerikaanse type [1].
• Ze brengen belangrijke B-celmarkers tot expressie, waaronder immunoglobuline M (IgM), CD19, CD20 en CD22.
• Ramos-cellen zijn Epstein-Barr-virus-negatieve cellen. Ze kunnen echter permanent worden omgezet in Epstein-Barr-virus-positieve cellen.
• Deze B-lymfoblastcellen hebben een ronde vorm.

Ramos-blauwe cellen versus Ramos-B-cellen

Ramos-blauwe cellen en Ramos-B-cellen zijn beide menselijke Burkitt-lymfoomcellen. Beide zijn negatief voor het Epstein-Barr-virus. Het verschil tussen deze cellen is dat Ramos-blauwe cellen een door NF-κB/AP-1 induceerbaar reportergen tot expressie brengen, genaamd SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), terwijl witte Ramos-cellen dat niet doen.

3D-animatie met hoge resolutie die de dynamiek van een B-lymfocyt illustreert.

Het kweken van Ramos-cellen

Dit deel van het artikel is bedoeld om u te helpen essentiële informatie over de celkweek van Ramos-cellen te leren. Hier komt u het volgende te weten: Wat is de verdubbelingstijd van de cellijnen? Wat is het aanbevolen medium? Hoe kweekt u Ramos-cellen?

Belangrijke punten voor het kweken van Ramos-cellen

Verdubbelingstijd:

De verdubbelingstijd van Ramos-cellen bedraagt ongeveer 20,4 ± 1,5 uur. Deze kan echter afwijken, afhankelijk van de gehanteerde kweekomstandigheden.

Hechtend of in suspensie:

De Ramos-cellen groeien in suspensie.

Celdichtheid:

De optimale celdichtheid voor de Ramos-cellijn is 3 x 10⁵ cellen/ml. Voor het subcultiveren worden de cellen in suspensie verzameld door middel van centrifugeren. Er wordt vers medium aan de cellen toegevoegd en ze worden voorzichtig opnieuw in suspensie gebracht. Vervolgens worden de cellen in een nieuwe kolf gegoten met een dichtheid van 3 tot 9 × 10^⁵ cellen/ml.

Groeimedium:

Voor het kweken van Ramos-cellen wordt RPMI 1640 gebruikt, aangevuld met 10% foetaal runderserum, 2,1 mM stabiele glutamine en 2,0 g/L NaHCO₃. Het medium moet twee keer per week worden ververst.

Groeicondities:

De menselijke Burkitt-lymfoomcellijn (Ramos) wordt bewaard in een bevochtigde incubator bij 5% CO₂ en een temperatuur van 37 °C.

Opslag:

Ingevroren Ramos-cellen worden bewaard bij een temperatuur van minder dan -150 graden Celsius of in de dampfase van vloeibare stikstof om de levensvatbaarheid van de cellen op langere termijn te waarborgen.

Invriesproces en medium:

Voor Ramos-cellen wordt het invriesmedium CM-1 of CM-ACF aanbevolen. Er wordt een langzaam invriesproces toegepast, waarbij de temperatuur geleidelijk met 1 graad Celsius per minuut daalt. Dit langzame invriesproces beschermt de cellen tegen schokken en bevordert hun levensvatbaarheid.

Ontdooiproces:

Voor het ontdooien worden de ingevroren cellen 40 tot 60 seconden in een voorverwarmd waterbad bij 37 °C gehouden, totdat er nog slechts een klein klompje ijs overblijft. Daarna wordt vers medium toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd om resten van het invriesmedium te verwijderen. Het pellet wordt opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden overgebracht naar een nieuwe kolf met kweekmedium.

Bioveiligheidsniveau:

Een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1 is essentieel voor het in stand houden van Epstein-Barr-virus-negatieve Ramos-celculturen. Het bioveiligheidsniveau wordt echter verhoogd naar 2 wanneer Ramos-cellen permanent Epstein-Barr-virus-positief worden.

De prolifererende B-lymfocytcellijn van Ramos in suspensie, afgebeeld bij een vergroting van 10x en 20x.

Ramos: Voordelen en beperkingen

Net als andere cellijnen hebben Ramos-cellen ook duidelijke voordelen en beperkingen. In dit gedeelte worden enkele opvallende daarvan besproken die van grote invloed kunnen zijn op het gebruik ervan in onderzoek.

Voordelen

• Celmodel voor Burkitt-lymfoom: Ramos-cellen zijn afkomstig van een patiënt met Burkitt-lymfoom, waardoor ze een relevant celmodel vormen voor het onderzoek naar lymfoïde maligniteiten.
• Eenvoudige kweek: Ramos-cellen zijn eenvoudig te kweken en te onderhouden in het laboratorium. De vereisten en omstandigheden voor de celkweek zijn duidelijk en eenvoudig.

Beperkingen

• In-vitro-model: Ramos-cellen geven mogelijk niet de volledige genetische complexiteit van tumoren bij patiënten weer, wat hun toepasbaarheid beperkt. Bovendien weerspiegelen de resultaten van experimenten met de Ramos-cellijn mogelijk niet volledig de in-vivo-omstandigheden, wat mogelijk tot uitdagingen bij de vertaling naar de klinische praktijk kan leiden.

 Toepassingen van Ramos-cellen in onderzoek

Ramos-cellen bieden veelbelovende toepassingen op biomedisch gebied. Enkele van de belangrijkste onderzoeksdoeleinden van Ramos-cellen zijn:

• Lymfoombiologie: Ramos-cellen worden op grote schaal gebruikt om de biologie van lymfomen te bestuderen. Ze worden ingezet om genetische en moleculaire factoren te onderzoeken die ten grondslag liggen aan lymfoïde maligniteiten. Daarnaast verkrijgen onderzoekers met behulp van deze Burkitt-lymfoomcellen inzicht in het ontstaan, de progressie en de heterogeniteit van de ziekte. Ook worden genetische mutaties en signaalroutes onderzocht, wat mogelijk leidt tot de ontwikkeling van nauwkeurigere diagnostische en therapeutische benaderingen. Uit een in 2019 uitgevoerd onderzoek bleek dat remming van het histonacetyltransferase GCN5 (General control non-depressible 5) de tumorigeniciteit van menselijke Burkitt-lymfoomcellen (Ramos) vermindert door de BCR-signaalroute te verstoren. Daarom wordt GCN5 voorgesteld als een haalbaar doelwit voor de ontwikkeling van medicamenteuze behandelingen tegen lymfomen [2].
• Geneesmiddelenscreening en -testen: De Ramos-cellijn wordt op grote schaal gebruikt voor geneesmiddelenscreening en -testen. Onderzoekers evalueren de werkzaamheid van potentiële therapeutische verbindingen bij het remmen van celproliferatie en -groei en het induceren van celdood in lymfoomcellen. Dit helpt bij het identificeren van veelbelovende kandidaat-geneesmiddelen, wat de ontwikkeling van gerichte behandelingen voor lymfoompatiënten vergemakkelijkt. Zo bleek uit onderzoek dat het methanol-extract van de schil, het vruchtvlees en de zaden van de Annona-vrucht een matig effect had, terwijl het chloroform-extract een krachtig effect vertoonde op de proliferatie van Ramos-cellen. Daarom stelde de studie voor dat Annona-vruchten effectief zouden kunnen blijken te zijn bij de preventie en behandeling van lymfoom [3].

Ramos-cellen voor uw onderzoek

Publicaties waarin de Ramos-celreeks aan bod komt

In dit deel van het artikel worden enkele interessante onderzoekspublicaties over de Ramos-cellijn opgesomd:

Continue signalering van CD79b en CD19 is noodzakelijk voor de fitness van B-cellen bij Burkitt-lymfoom

Dit onderzoek werd in 2018 gepubliceerd in The EMBO Journal. Uit de studie bleek dat Ramos-B-cellen de expressie van de markers CD19 en CD79b (Igβ, een onderdeel van de BCR-signaalroute) nodig hebben voor hun levensvatbaarheid en competitieve groei.

Smac-mimetica en TRAIL werken samen om MLKL-afhankelijke necroptose te induceren in Burkitt-lymfoomcellijnen

Deze studie, gepubliceerd in *Neoplasia* (2021), maakte gebruik van Ramos-cellen en stelde dat het mixed lineage kinase-domein (MLKL) epigenetisch wordt gereguleerd in Burkitt-lymfoomcellen (Ramos). Het is dus een veelbelovende prognostische marker voor het succes van behandelingen die gericht zijn op necroptose.

Fosforylering van PBK/TOPK Tyr74 door JAK2 bevordert de tumorgroei bij Burkitt-lymfoom

Dit onderzoeksartikel in *Cancer Letters* (2022) suggereerde dat de JAK2/TOPK/histon H3-signaalas een cruciale rol speelt bij de proliferatie van B-lymfoomcellijnen in vitro.

Door verotoxine-1 geïnduceerde ER-stress activeert apoptotische of overlevingsroutes in Burkitt-lymfoomcellen

Dit artikel verscheen in 2020 in Toxins. De studie stelde dat behandeling met verotoxine-1 endoplasmatisch reticulum (ER)-stress induceert in Ramos B-cellen. Dit leidt tot het op gang brengen van apoptotische of overlevingssignaalroutes in lymfoomcellijnen.

Silymarine remt de genexpressie van Toll-like receptor 8 en apoptose in de Ramos-kankercellijn

Deze studie in het Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) rapporteerde dat een natuurlijke stof, silymarine, de TLR8-expressie (Toll-like receptor 8) en apoptose in de Ramos-cellijn onderdrukt.

Bronnen over de Ramos-cellijn: protocollen, video’s en meer

Hieronder volgen enkele online bronnen over Ramos-cellen:

• Transfectie van Ramos-cellen: Dit document helpt u het protocol voor de transfectie van de Ramos-cellijn te leren.

De volgende link bevat het protocol voor het kweken van Ramos-cellen:

• Ramos-cellen: Deze website bevat basisinformatie over de Ramos-cellijn. Ook vindt u hier een protocol voor het subcultiveren van Ramos-cellen en het omgaan met prolifererende en cryogeen bewaarde culturen. Daarnaast is er informatie beschikbaar over Ramos-celmedia, verdubbelingstijd en celdichtheid.

Belangrijke inzichten in Ramos Cellen: Veelgestelde vragen

Referenties

1. Kerntke, C.G., Analyse van de organisatie en het signaalvermogen van het membraan-IgE tijdens de interactie met CD19 en CD23 in B-lymfocyten. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., Remming van GCN5 HAT vermindert de overleving van menselijke Burkitt-lymfoomcellen door vermindering van de expressie van MYC-doelgenen en belemmering van BCR-signaalroutes. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fytochemisch profiel en antioxidatieve activiteit van annona-vruchten en het effect daarvan op de proliferatie van lymfoomcellen. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.