Ramos šūnas — pētījumi par B-šūnu limfomu: Ramos šūnu nozīme

Ramos šūnas ir B limfocītu šūnu līnija, ko plaši izmanto biomedicīniskajos pētījumos. Tās galvenokārt tiek izmantotas imunoloģijas un vēža pētījumos. Pētnieki izmanto šīs šūnas, lai novērtētu citotoksiskos medikamentus un pētītu B šūnu virsmas antigēnus, mutācijas un apoptozes mehānismus.

Ramos šūnu izcelsme un vispārējās īpašības

Šajā sadaļā ir atbildes uz šādiem bieži uzdotajiem jautājumiem: Kas ir Ramos vēža šūnu līnija? Kas ir Ramos šūnu līnija CD19? Kas ir Ramos šūnu līnija CD20? Kāda ir Ramos šūnu izcelsme? Kādi ir Ramos šūnu līnijas marķieri? Kāds ir Ramos šūnu izmērs? Kāda ir Ramos šūnu līnijas morfoloģija?

• Ramos šūnu līnija tika izveidota 1972. gadā. Šīs šūnas tika iegūtas no 3 gadus veca kaukāziešu zēna, kuram bija amerikāņu tipa Burkita limfoma, ascīta šķidruma [1].
• Tās ekspresē galvenos B šūnu marķierus, tostarp imūnglobulīnu M (IgM), CD19, CD20 un CD22.
• Ramos šūnas ir Epšteina-Barra vīrusa negatīvas šūnas. Tomēr tās var pastāvīgi pārveidoties par Epšteina-Barra vīrusa pozitīvām šūnām.
• Šīm B limfoblastu šūnām ir apaļa forma.

Ramosa zilās šūnas salīdzinājumā ar Ramosa B šūnām

Gan Ramosa zilās šūnas, gan Ramosa B šūnas ir cilvēka Burkita limfomas šūnas. Abas ir negatīvas attiecībā uz Epšteina-Barra vīrusu. Atšķirība starp šīm šūnām ir tāda, ka Ramosa zilās šūnas ekspresē NF-κB/AP-1 induciblu reportergēnu, ko sauc par SEAP (sekretētais embrionālais sārmainais fosfatāzs), turpretim Ramosa baltās šūnas to neekspresē.

Augstas izšķirtspējas 3D animācija, kas ilustrē B limfocīta dinamiku.

Ramos šūnu kultivēšana

Šī raksta sadaļa ir veltīta tam, lai palīdzētu jums apgūt svarīgu informāciju par Ramos šūnu kultivēšanu. Šeit jūs uzzināsiet: kāds ir šūnu līnijas dubultošanās laiks? Kāda ir ieteicamā barotne? Kā kultivēt Ramos šūnas?

Galvenie punkti Ramos šūnu kultivēšanā

Dubultošanās laiks:

Ramos šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 20,4 ± 1,5 stundas. Tomēr tas var atšķirties atkarībā no nodrošinātajiem šūnu kultivēšanas apstākļiem.

Pielipušas vai suspensijā:

Ramos šūnas aug suspensijā.

Šūnu blīvums:

Optimālais šūnu blīvums Ramos šūnu līnijai ir 3 x 10⁵ šūnas/ml. Subkultivēšanai suspendētās šūnas savāc ar centrifugēšanu. Šūnām pievieno svaigu barotni un tās uzmanīgi atkārtoti suspendē. Pēc tam šūnas ielej jaunā kolbā ar blīvumu no 3 līdz 9 x 10^⁵ šūnu/ml.

Augšanas barotne:

Ramos šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640, kam pievienots 10 % teļa serums, 2,1 mM stabila glutamīna un 2,0 g/l NaHCO3. Barotni jāmaina 2 reizes nedēļā.

Augšanas apstākļi:

Cilvēka Burkita limfomas šūnu līnija (Ramos) tiek turēta mitrinātā inkubatorā 5 % CO₂ koncentrācijā un 37 °C temperatūrā.

Uzglabāšana:

Sasaldētās Ramos šūnas tiek glabātas temperatūrā zem -150 grādiem pēc Celsija vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē, lai ilgāk saglabātu šūnu dzīvotspēju.

Sasaldēšanas process un barotne:

Ramos šūnām ieteicams izmantot CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas vidi. Tiek izmantots lēns sasaldēšanas process, kas ļauj temperatūru pazemināt pakāpeniski par 1 grādu pēc Celsija minūtē. Šī lēnā sasaldēšana pasargā šūnas no jebkāda šoka un uzlabo to dzīvotspēju.

Atkausēšanas process:

Atkausēšanai sasaldētās šūnas 40–60 sekundes tur iepriekš uzsildītā ūdens vannā 37 °C temperatūrā, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam pievieno svaigu barotni un šūnas centrifugē, lai atbrīvotos no sasaldēšanas barotnes elementiem. Nogulsnes atkārtoti suspendē un šūnas pārnes jaunā kolbā, kas satur kultūras barotni.

Bioloģiskās drošības līmenis:

1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija ir nepieciešama, lai uzturētu Epšteina-Barra vīrusam negatīvas Ramos šūnu kultūras. Tomēr bioloģiskās drošības līmenis tiek paaugstināts līdz 2, ja Ramos šūnas tiek pastāvīgi pārveidotas par Epšteina-Barra vīrusam pozitīvām.

Ramos proliferējošā B limfocītu šūnu līnija suspensijā, attēlota ar 10x un 20x palielinājumu.

Ramos: priekšrocības un ierobežojumi

Tāpat kā citām šūnu līnijām, arī Ramos šūnām ir savas priekšrocības un ierobežojumi. Šajā sadaļā tiks izskatītas dažas nozīmīgākās, kas var būtiski ietekmēt to izmantošanu pētniecībā.

Priekšrocības

• Burkita limfomas šūnu modelis: Ramos šūnas tika izstrādātas, izmantojot Burkita limfomas pacienta šūnas, tādējādi padarot tās par atbilstošu šūnu modeli limfoīdo ļaundabīgo audzēju pētīšanai.
• Viegla kultivēšana: Ramos šūnas ir viegli kultivējamas un uzturamas laboratorijā. Tām ir vienkāršas šūnu kultivēšanas prasības un apstākļi.

Ierobežojumi

• In vitro modelis: Ramos šūnas var pilnībā neatspoguļot pacientu audzēju ģenētisko sarežģītību, tādējādi ierobežojot to piemērojamību. Turklāt eksperimentu rezultāti, kuros izmantota Ramos šūnu līnija, var pilnībā neatspoguļot in vivo apstākļus, kas var radīt problēmas pētījumu rezultātu pārnesē uz klīnisko praksi.

 Ramos šūnu pielietojums pētniecībā

Ramos šūnas piedāvā daudzsološas pielietojuma iespējas biomedicīnas jomā. Daži no svarīgākajiem Ramos šūnu izmantošanas veidiem pētniecībā ir:

• Limfomas bioloģija: Ramos šūnas plaši izmanto limfomas bioloģijas pētījumos. Tās izmanto, lai izpētītu ģenētiskos un molekulāros faktorus, kas ir limfoīdo ļaundabīgo audzēju pamatā. Turklāt, izmantojot šīs Burkita limfomas šūnas, pētnieki gūst ieskatu slimības sākumā, progresēšanā un heterogenitātē. Tiek pētītas arī ģenētiskās mutācijas un signālceļi, kas potenciāli var novest pie precīzāku diagnostikas un ārstēšanas pieeju izstrādes. 2019. gadā veiktajā pētījumā tika konstatēts, ka GCN5 (General control non-depressible 5) histona acetiltransferāzes inhibīcija samazina cilvēka Burkita limfomas šūnu (Ramos) tumorigenitāti, traucējot BCR signālceļu darbību. Tāpēc GCN5 tiek ieteikts kā iespējams mērķis limfomas medikamentozās terapijas izstrādei [2].
• Zāļu skrīnings un testēšana: Ramos šūnu līnija tiek plaši izmantota zāļu skrīninga un testēšanas nolūkos. Pētnieki novērtē potenciālo terapeitisko savienojumu efektivitāti limfomas šūnu proliferācijas un augšanas inhibēšanā, kā arī šūnu nāves indukcijā. Tas palīdz identificēt daudzsološus zāļu kandidātus, tādējādi veicinot mērķtiecīgas ārstēšanas metožu izstrādi limfomas pacientiem. Piemēram, pētījums parādīja, ka Annona augļu mizas, mīkstuma un sēklu metanola ekstrakts izrādīja mērenu iedarbību, savukārt hloroforma ekstrakts izrādīja spēcīgu iedarbību uz Ramos šūnu proliferāciju. Tādējādi pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka Annona augļi varētu izrādīties efektīvi limfomas profilaksē un ārstēšanā [3].

„Ramos Cells“ jūsu pētījumiem

Publikācijas, kurās aprakstītas Ramos šūnas

Šajā raksta sadaļā ir uzskaitītas dažas interesantas pētnieciskās publikācijas, kurās aprakstīta Ramos šūnu līnija:

Burkita limfomas B šūnu dzīvotspējai ir nepieciešama nepārtraukta CD 79b un CD 19 signālu pārraide

Šis pētījums tika publicēts žurnālā „The EMBO Journal” 2018. gadā. Pētījumā tika konstatēts, ka Ramos B šūnu dzīvotspējai un konkurētspējīgai augšanai ir nepieciešama Ramos šūnu marķieru CD19 un CD79b (BCR signālpārraides komponents Igβ) ekspresija.

Smac mimētikas un TRAIL sadarbojas, lai izraisītu MLKL atkarīgu nekroptozi Burkita limfomas šūnu līnijās

Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Neoplasia“ (2021), tika izmantotas Ramos šūnas un izvirzīts pieņēmums, ka jauktās izcelsmes kināzes domēns (MLKL) Burkita limfomas šūnās (Ramos) tiek epigenētiski regulēts. Tādējādi tas ir daudzsološs prognostiskais marķieris nekroptozes saistītu terapiju ārstēšanas panākumiem.

PBK/TOPK Tyr74 fosforilācija ar JAK2 veicina Burkita limfomas audzēja augšanu

Šis pētījuma raksts, kas publicēts žurnālā „Cancer Letters“ (2022), liecina, ka JAK2/TOPK/histona H3 signālu pārraides ass spēlē izšķirošu lomu B limfomas šūnu līniju proliferācijā in vitro.

Verotoksīna-1 izraisītais ER stresa stāvoklis iedarbina apoptozes vai izdzīvošanas ceļus Burkita limfomas šūnās

Šis raksts tika publicēts 2020. gadā žurnālā „Toxins”. Pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka verotoksīna-1 iedarbība izraisa endoplazmatiskā tīkla (ER) stresu Ramos B šūnās. Tas izraisa apoptozes vai izdzīvošanas signālu ceļu aktivizēšanos limfomas šūnu līnijās.

Silimarīns inhibē Toll-līdzīgā receptora 8 gēna ekspresiju un apoptozi Ramos vēža šūnu līnijā

Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Avicenna Journal of Phytomedicine“ (2020), ziņots, ka dabiskais savienojums silimarīns nomāc TLR8 (Toll-līdzīgā receptora 8) ekspresiju un apoptozi Ramos šūnu līnijā.

Resursi par Ramos šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli

Tālāk ir uzskaitīti daži tiešsaistes resursi par Ramos šūnām:

• Ramos šūnu transfekcija: Šis dokuments palīdzēs jums iepazīties ar Ramos šūnu līnijas transfekcijas protokolu.

Šajā saitē ir atrodams Ramos šūnu kultivēšanas protokols:

• Ramos šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir sniegta pamatinformācija par Ramos šūnu līniju. Tajā ir iekļauts arī protokols par Ramos šūnu subkultivēšanu un to, kā rīkoties ar proliferējošām un kriokonservētām kultūrām. Turklāt ir pieejama informācija par Ramos šūnu barotnēm, dubultošanās laiku un šūnu blīvumu.

Galvenās atziņas par Ramosa šūnām: Biežāk uzdotie jautājumi

Atsauces

1. Kerntke, C.G., Membrānas IgE organizācijas un signālu pārraides spēju analīze tās mijiedarbības laikā ar CD19 un CD23 B limfocītos. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., GCN5 HAT inhibīcija samazina cilvēka Burkita limfomas šūnu izdzīvošanu, samazinot MYC mērķa gēnu ekspresiju un traucējot BCR signālceļu darbību. Oncotarget, 2019. 10(56): 5847. lpp.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Annonas augļu fitoķīmiskais profils un antioksidatīvā aktivitāte, kā arī tās ietekme uz limfomas šūnu proliferāciju. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): 58.–68. lpp.