Células de Ramos – Investigação sobre o linfoma de células B: A importância das células de Ramos

As células de Ramos são uma linha celular de linfócitos B amplamente utilizada na investigação biomédica. Em particular, têm aplicações principais na imunologia e nos estudos sobre o cancro. Os investigadores utilizam estas células para avaliar fármacos citotóxicos e estudar os antígenos da superfície das células B, as mutações e os mecanismos de apoptose.

Origem e características gerais das células Ramos

Compreender a origem e as características essenciais de uma linha celular desempenha um papel crucial na decisão sobre a sua adequação à sua investigação. Por isso, é aconselhável avaliar minuciosamente esta informação antes de iniciar qualquer trabalho com a mesma. Esta secção aborda as seguintes perguntas frequentes: O que é a linha celular cancerígena Ramos? O que é a linha celular Ramos CD19? O que é a linha celular Ramos CD20? Qual é a origem das células Ramos? Quais são os marcadores da linha celular Ramos? Qual é o tamanho das células Ramos? Qual é a morfologia da linha celular Ramos?

• A linha celular Ramos foi estabelecida em 1972. Estas células foram derivadas do líquido ascítico de um menino caucasiano de 3 anos com linfoma de Burkitt do tipo americano [1].
• Exprimem marcadores-chave das células B, incluindo imunoglobulina M (IgM), CD19, CD20 e CD22.
• As células Ramos são negativas para o vírus de Epstein-Barr. No entanto, podem sofrer uma mutação permanente, tornando-se positivas para o vírus de Epstein-Barr.
• Estas células linfoblastos B apresentam uma morfologia de forma redonda.

Células azuis de Ramos vs. células B de Ramos

As células azuis de Ramos e as células B de Ramos são ambas células do linfoma de Burkitt humano. Ambas são negativas para o vírus de Epstein-Barr. A diferença entre estas células reside no facto de as células azuis de Ramos expressarem um gene repórter induzível por NF-κB/AP-1 denominado SEAP (fosfatase alcalina embrionária secretada), ao passo que as células brancas de Ramos não o fazem.

Animação 3D de alta resolução que ilustra a dinâmica de um linfócito B.

Cultura de células Ramos

Esta secção do artigo destina-se a ajudá-lo a conhecer informações essenciais sobre a cultura celular das células Ramos. Aqui, irá ficar a saber: Qual é o tempo de duplicação das linhas celulares? Qual é o meio recomendado? Como se cultivam as células Ramos?

Pontos-chave para a cultura de células Ramos

Tempo de duplicação:

O tempo de duplicação das células Ramos é de aproximadamente 20,4 ± 1,5 horas. No entanto, pode variar dependendo das condições de cultura celular proporcionadas.

Adesivas ou em suspensão:

As células Ramos crescem em suspensão.

Densidade celular:

A densidade celular ideal para a linha celular Ramos é de 3 x 10^⁵ células/ml. Para a subcultura, as células em suspensão são recolhidas por centrifugação. Adiciona-se meio fresco às células e estas são ressuspensas cuidadosamente. Posteriormente, as células foram transferidas para um novo frasco a uma densidade de 3 a 9 x 10^⁵ células/ml.

Meio de crescimento:

Para a cultura das células Ramos, utiliza-se RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino, 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃. O meio deve ser substituído duas vezes por semana.

Condições de crescimento:

A linha celular de linfoma de Burkitt humano (Ramos) é mantida numa incubadora humidificada com 5% de CO₂ e a uma temperatura de 37 °C.

Armazenamento:

As células Ramos congeladas são mantidas a uma temperatura inferior a -150 graus Celsius ou na fase de vapor de azoto líquido, para preservar a viabilidade das células a longo prazo.

Processo de congelação e meio:

Recomenda-se a utilização dos meios de congelação CM-1 ou CM-ACF para as células Ramos. É utilizado um processo de congelação lenta que permite uma diminuição gradual da temperatura de 1 grau Celsius por minuto. Esta congelação lenta protege as células de qualquer choque e aumenta a sua viabilidade.

Processo de descongelação:

Para a descongelação, as células congeladas são mantidas num banho-maria pré-aquecido a 37 °C durante 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno aglomerado de gelo. Em seguida, adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação. O sedimento é novamente ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco contendo meio de cultura.

Nível de biossegurança:

É essencial dispor de um laboratório de nível de biossegurança 1 para manter culturas de células Ramos negativas para o vírus de Epstein-Barr. No entanto, o nível de biossegurança passa para 2 quando as células Ramos se tornam permanentemente positivas para o vírus de Epstein-Barr.

Linha celular de linfócitos B em proliferação de Ramos em suspensão, observada com ampliações de 10x e 20x.

Ramos: Vantagens e Limitações

Tal como outras linhas celulares, as células Ramos também apresentam vantagens e limitações específicas. Esta secção irá explorar algumas das mais notáveis, que podem influenciar significativamente a sua utilização na investigação.

Vantagens

• Modelo celular do linfoma de Burkitt: As células Ramos foram desenvolvidas a partir de um doente com linfoma de Burkitt, o que as torna um modelo celular relevante para o estudo de neoplasias linfóides.
• Fácil cultura: As células Ramos são fáceis de cultivar e manter em laboratório. Apresentam requisitos e condições de cultura celular simples.

Limitações

• Modelo in vitro: as células Ramos podem não representar completamente a complexidade genética dos tumores dos doentes, limitando assim a sua aplicabilidade. Além disso, os resultados de experiências que utilizam a linha celular Ramos podem não refletir inteiramente as condições in vivo, o que pode levar a desafios de transposição.

 Aplicações das células Ramos na investigação

As células Ramos oferecem aplicações promissoras no campo biomédico. Algumas das principais utilizações das células Ramos na investigação incluem:

• Biologia do linfoma: As células Ramos são amplamente utilizadas para estudar a biologia do linfoma. São utilizadas para explorar os fatores genéticos e moleculares subjacentes às neoplasias linfóides. Além disso, os investigadores obtêm informações sobre o início, a progressão e a heterogeneidade da doença utilizando estas células do linfoma de Burkitt. As mutações genéticas e as vias de sinalização também são investigadas, o que pode conduzir ao desenvolvimento de abordagens diagnósticas e terapêuticas mais precisas. Um estudo realizado em 2019 revelou que a inibição da histona acetiltransferase GCN5 (General control non-depressible 5) diminui a tumorigenicidade das células do linfoma de Burkitt humano (Ramos) através da interrupção da sinalização do BCR. Por conseguinte, a GCN5 é sugerida como um alvo viável para o desenvolvimento de terapêuticas farmacológicas contra o linfoma [2].
• Triagem e testes de fármacos: a linha celular Ramos é amplamente utilizada para fins de triagem e testes de fármacos. Os investigadores avaliam a eficácia de potenciais compostos terapêuticos na inibição da proliferação e do crescimento celular e na indução da morte celular em células de linfoma. Isto ajuda a identificar candidatos a fármacos promissores, facilitando assim o desenvolvimento de tratamentos direcionados para doentes com linfoma. Por exemplo, uma investigação demonstrou que o extrato metanólico da casca, polpa e sementes do fruto da Annona exerceu efeitos moderados, enquanto o extrato de clorofórmio apresentou efeitos robustos na proliferação das células Ramos. Assim, o estudo propôs que os frutos da Annona poderiam revelar-se eficazes na prevenção e no tratamento do linfoma [3].

Células de Ramos para a sua investigação

Publicações que abordam as células Ramos

Esta secção do artigo enumera algumas publicações de investigação interessantes que abordam a linha celular Ramos:

A sinalização contínua de CD79b e CD19 é necessária para a viabilidade das células B do linfoma de Burkitt

Esta investigação foi publicada na revista «The EMBO Journal» em 2018. O estudo concluiu que as células B Ramos necessitam da expressão dos marcadores CD19 e CD79b (componente de sinalização do BCR, Igβ) para a sua viabilidade e crescimento competitivo.

Os miméticos de Smac e o TRAIL cooperam para induzir a necroptose dependente de MLKL em linhas celulares do linfoma de Burkitt

Este estudo, publicado na revista «Neoplasia» (2021), utilizou células Ramos e propôs que o domínio da quinase de linhagem mista (MLKL) é regulado epigeneticamente nas células do linfoma de Burkitt (Ramos). Assim, constitui um marcador prognóstico promissor para o sucesso do tratamento com terapias relacionadas com a necroptose.

A fosforilação de PBK/TOPK Tyr74 por JAK2 promove o crescimento tumoral do linfoma de Burkitt

Este artigo de investigação publicado na revista *Cancer Letters* (2022) sugeriu que o eixo de sinalização JAK2/TOPK/histona H3 desempenha um papel crucial na proliferação de linhas celulares de linfoma B in vitro.

O stress do retículo endoplasmático induzido pela verotoxina-1 desencadeia vias de apoptose ou de sobrevivência nas células do linfoma de Burkitt

Este artigo foi publicado em 2020 na revista «Toxins». O estudo propôs que o tratamento com verotoxina-1 induz stress no retículo endoplasmático (RE) nas células B Ramos. Isto leva ao início de vias de sinalização apoptóticas ou de sobrevivência em linhas celulares de linfoma.

A silimarina inibe a expressão do gene do recetor Toll-like 8 e a apoptose na linha celular cancerígena Ramos

Este estudo, publicado na revista *Avicenna Journal of Phytomedicine* (2020), relatou que um composto natural, a silimarina, suprime a expressão do TLR8 (receptor Toll-like 8) e a apoptose na linha celular Ramos.

Recursos sobre a linha celular Ramos: protocolos, vídeos e muito mais

Seguem-se alguns recursos online sobre as células Ramos:

• Transfecção de células Ramos: Este documento irá ajudá-lo a aprender o protocolo para a transfecção da linha celular Ramos.

A ligação seguinte contém o protocolo de cultura das células Ramos:

• Células Ramos: Este site contém informações básicas sobre a linha celular Ramos. Contém também um protocolo para a subcultura de células Ramos e para o manuseamento de culturas em proliferação e criopreservadas. Além disso, estão disponíveis informações relativas aos meios de cultura das células Ramos, ao tempo de duplicação e à densidade celular.

Informações importantes sobre as células de Ramos: Perguntas mais frequentes

Referências

1. Kerntke, C.G., Análise da organização e da capacidade de sinalização da IgE de membrana durante a sua interação com o CD19 e o CD23 nos linfócitos B. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., A inibição da HAT GCN5 reduz a sobrevivência das células do linfoma de Burkitt humano através da redução da expressão dos genes-alvo do MYC e do bloqueio das vias de sinalização do BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Perfil fitoquímico e atividade antioxidante do fruto da annona e o seu efeito na proliferação de células de linfoma. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.