Ramos-celler – forskning på B-celle-lymfom: Betydningen av Ramos-celler

Ramos-celler er en B-lymfocyttcellelinje som brukes mye i biomedisinsk forskning. De finner særlig anvendelse innen immunologi og kreftforskning. Forskere bruker disse cellene til å evaluere cytotoksiske legemidler og studere B-celleoverflateantigener, mutasjoner og apoptotiske mekanismer.

Opprinnelse og generelle egenskaper ved Ramos-celler

Å forstå en cellelinjes opprinnelse og viktige egenskaper spiller en avgjørende rolle når du skal avgjøre om den er egnet for din forskning. Det anbefales derfor å vurdere denne informasjonen grundig før du starter noe arbeid med den. Dette avsnittet dekker følgende ofte stilte spørsmål: Hva er Ramos-kreftcellelinjen? Hva er Ramos-cellelinjen CD19? Hva er Ramos-cellelinjen CD20? Hva er opprinnelsen til Ramos-cellene? Hvilke markører finnes på Ramos-cellelinjen? Hva er størrelsen på Ramos-cellene? Hva er morfologien til Ramos-cellelinjen?

• Ramos-cellelinjen ble etablert i 1972. Disse cellene stammer fra ascitesvæsken til en 3 år gammel kaukasisk gutt med Burkitt-lymfom av amerikansk type [1].
• De uttrykker viktige B-cellemarkører, blant annet immunoglobulin M (IgM), CD19, CD20 og CD22.
• Ramos-celler er Epstein-Barr-virus-negative celler. De kan imidlertid permanent omdannes til Epstein-Barr-virus-positive celler.
• Disse B-lymfoblastcellene har en rund form.

Ramos-blåceller vs. Ramos-B-celler

Ramos-blå celler og Ramos-B-celler er begge humane Burkitt-lymfomceller. Begge er negative for Epstein-Barr-virus. Forskjellen mellom disse cellene er at Ramos-blå celler uttrykker et NF-κB/AP-1-induserbart reportergen kalt SEAP (sekretert embryonalt alkalisk fosfat), mens hvite Ramos-celler ikke gjør det.

3D-animasjon i høy oppløsning som illustrerer dynamikken i en B-lymfocytt.

Dyrking av Ramos-celler

Denne delen av artikkelen er viet til å hjelpe deg med å lære viktig informasjon om cellekultur av Ramos-celler. Her vil du lære: Hva er cellelinjens doblingstid? Hva er det anbefalte mediet? Hvordan dyrker man Ramos-celler?

Viktige punkter for dyrking av Ramos-celler

Fordoblingstid:

Fordoblingstiden for Ramos-celler er omtrent 20,4 ± 1,5 timer. Den kan imidlertid variere avhengig av de gitte cellekulturforholdene.

Adherent eller i suspensjon:

Ramos-cellene vokser i suspensjon.

Cellekoncentrasjon:

Den optimale celletettheten for Ramos-cellelinjen er 3 x 10⁵ celler/ml. For subkultivering samles cellene i suspensjon opp ved sentrifugering. Cellene tilsettes ferskt medium og resuspenderes forsiktig. Deretter ble cellene overført til en ny kolbe med en tetthet på 3 til 9 × 10^⁵ celler/ml.

Vekstmedium:

RPMI 1640 tilsatt 10 % føtalt bovint serum, 2,1 mM stabilt glutamin og 2,0 g/L NaHCO₃ brukes til å dyrke Ramos-celler. Mediet bør skiftes ut to ganger per uke.

Vekstbetingelser:

Den humane Burkitt-lymfomcellelinjen (Ramos) oppbevares i en fuktet inkubator ved 5 % CO₂ og 37 °C.

Oppbevaring:

Frosne Ramos-celler oppbevares ved temperaturer under -150 grader Celsius eller i dampfasen av flytende nitrogen for å sikre cellenes levedyktighet over lengre tid.

Fryseprosess og medium:

CM-1 eller CM-ACF frysemedium anbefales for Ramos-celler. Det benyttes en langsom fryseprosess som tillater en gradvis temperaturreduksjon på 1 grad Celsius per minutt. Denne langsomme fryseprosessen beskytter cellene mot sjokk og forbedrer deres levedyktighet.

Tineprosess:

For tining oppbevares frosne celler i et forvarmet vannbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, til det kun gjenstår en liten isklump. Deretter tilsettes ferskt medium, og cellene sentrifugeres for å fjerne rester av frysemediet. Pelleten resuspenderes på nytt, og cellene overføres til en ny kolbe som inneholder dyrkningsmedium.

Biosikkerhetsnivå:

Et laboratorium med biosikkerhetsnivå 1 er avgjørende for å opprettholde Epstein-Barr-virus-negative Ramos-cellekulturer. Biosikkerhetsnivået heves imidlertid til 2 når Ramos-cellene blir permanent Epstein-Barr-virus-positive.

Ramos-cellelinje av prolifererende B-lymfocytter i suspensjon, vist med 10x og 20x forstørrelse.

Ramos: Fordeler og begrensninger

I likhet med andre cellelinjer har Ramos-celler også tydelige fordeler og begrensninger. I dette avsnittet vil vi se nærmere på noen av de viktigste, som kan ha betydelig innflytelse på bruken av dem i forskning.

Fordeler

• Cellemodell for Burkitt-lymfom: Ramos-cellene ble utviklet fra en pasient med Burkitt-lymfom, noe som gjør dem til en relevant cellemodell for studier av lymfoide maligniteter.
• Enkel dyrking: Ramos-celler er enkle å dyrke og vedlikeholde i laboratoriet. De har enkle krav og betingelser for cellekultur.

Begrensninger

• In vitro-modell: Ramos-celler representerer kanskje ikke fullt ut den genetiske kompleksiteten i pasienters svulster, noe som begrenser anvendbarheten deres. Videre vil resultatene fra eksperimenter med Ramos-cellelinjen kanskje ikke helt gjenspeile in vivo-forholdene, noe som potensielt kan føre til utfordringer ved overføring til klinisk praksis.

 Anvendelser av Ramos-celler i forskning

Ramos-cellelinjen har lovende anvendelser innen det biomedisinske feltet. Noen av de viktigste forskningsformålene for Ramos-cellene inkluderer:

• Lymfombiologi: Ramos-celler brukes i stor utstrekning til å studere lymfombiologi. De brukes til å utforske genetiske og molekylære faktorer som ligger til grunn for lymfoide maligniteter. I tillegg får forskere innsikt i sykdommens opprinnelse, progresjon og heterogenitet ved å benytte disse Burkitt-lymfomcellene. Genetiske mutasjoner og signalveier undersøkes også, noe som potensielt kan føre til utvikling av mer presise diagnostiske og terapeutiske tilnærminger. En studie gjennomført i 2019 viste at hemming av GCN5 (General control non-depressible 5) histonacetyltransferase reduserer tumorigenisiteten til humane Burkitt-lymfomceller (Ramos) ved å forstyrre BCR-signalveien. Derfor foreslås GCN5 som et mulig mål for utvikling av medikamentell behandling av lymfom [2].
• Legemiddelscreening og -testing: Ramos-cellelinjen brukes i stor utstrekning til legemiddelscreening og -testing. Forskere vurderer effekten av potensielle terapeutiske forbindelser når det gjelder å hemme celleproliferasjon og -vekst samt å indusere celledød i lymfomceller. Dette bidrar til å identifisere lovende legemiddelkandidater, og letter dermed utviklingen av målrettede behandlinger for lymfompasienter. Forskning har for eksempel vist at metanolekstrakt fra skallet, fruktkjøttet og frøene til Annona-frukten hadde en moderat effekt, mens kloroformekstraktet hadde en kraftig effekt på proliferasjonen av Ramos-celler. Studien foreslo derfor at Annona-frukter kan vise seg å være effektive i forebygging og behandling av lymfom [3].

Ramos-celler til din forskning

Publikasjoner som omhandler Ramos-celler

Denne delen av artikkelen inneholder en liste over noen interessante forskningspublikasjoner som omhandler Ramos-cellelinjen:

Kontinuerlig signalering av CD 79b og CD 19 er nødvendig for at B-celler i Burkitt-lymfom skal være livskraftige

Denne forskningen ble publisert i tidsskriftet The EMBO Journal i 2018. Studien fant at Ramos-B-celler trenger uttrykk av markørene CD19 og CD79b (BCR-signalkomponenten Igβ) for å opprettholde sin levedyktighet og konkurransedyktige vekst.

Smac-mimetika og TRAIL samarbeider om å indusere MLKL-avhengig nekroptose i Burkitt-lymfomcellelinjer

Denne studien, publisert i *Neoplasia* (2021), benyttet Ramos-celler og foreslo at mixed lineage kinase domain (MLKL) er epigenetisk regulert i Burkitt-lymfomceller (Ramos). Dermed er det en lovende prognostisk markør for behandlingssuksess ved nekroptose-relaterte terapier.

Fosforylering av PBK/TOPK Tyr74 ved JAK2 fremmer tumorvekst ved Burkitts lymfom

Denne forskningsartikkelen i Cancer Letters (2022) antydet at JAK2/TOPK/histon H3-signalaksen spiller en avgjørende rolle i proliferasjonen av B-lymfomcellelinjer in vitro.

Verotoksin-1-indusert ER-stress utløser apoptotiske eller overlevelsesveier i Burkitt-lymfomceller

Denne artikkelen ble publisert i 2020 i Toxins. Studien antydet at behandling med verotoksin-1 induserer endoplasmatisk retikulum (ER)-stress i Ramos B-celler. Dette fører til igangsetting av apoptotiske eller overlevelsessignaler i lymfomcellelinjer.

Silymarin hemmer genuttrykk av Toll-lignende reseptor 8 og apoptose i Ramos-kreftcellelinjen

Denne studien i Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) rapporterte at et naturlig stoff, silymarin, hemmer TLR8-ekspresjon (Toll-lignende reseptor 8) og apoptose i Ramos-cellelinjen.

Ressurser for Ramos-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer

Her er noen nettressurser om Ramos-celler:

• Transfeksjon av Ramos-celler: Dette dokumentet vil hjelpe deg med å lære protokollen for transfeksjon av Ramos-cellelinjen.

Følgende lenke inneholder protokollen for Ramos-cellekultur:

• Ramos-celler: Dette nettstedet inneholder grunnleggende informasjon om Ramos-cellelinjen. Det inneholder også en protokoll for subkultivering av Ramos-celler og håndtering av prolifererende og kryokonserverte kulturer. Videre er informasjon om Ramos-cellemedier, doblingstid og celletetthet også tilgjengelig.

Nøkkelinformasjon om Ramos-celler: Ofte stilte spørsmål

Referanser

1. Kerntke, C.G., Analyse av organiseringen og signaleringskapasiteten til membran-IgE under dets interaksjon med CD19 og CD23 i B-lymfocytter. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., GCN5 HAT-hemming reduserer overlevelsen av humane Burkitt-lymfomceller gjennom reduksjon av MYC-målgenuttrykk og hemming av BCR-signalveier. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fytokjemisk profil og antioksidantaktivitet hos annona-frukt og dens effekt på lymfomcellers proliferasjon. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58–68.