Ramosove celice – raziskave limfoma B-celic: pomen Ramosovih celic

Ramosove celice so linija B-limfocitov, ki se pogosto uporablja v biomedicinskih raziskavah. Uporabljajo se predvsem v imunologiji in raziskavah raka. Raziskovalci te celice uporabljajo za ocenjevanje citotoksičnih zdravil ter preučevanje površinskih antigenov B-celic, mutacij in mehanizmov apoptoze.

Poreklo in splošne lastnosti Ramosovih celic

Razumevanje izvora in bistvenih lastnosti celične linije igra ključno vlogo pri odločanju o njeni primernosti za vaše raziskave. Zato je priporočljivo, da te informacije temeljito preučite, preden začnete z delom na njej. Ta razdelek obravnava naslednja pogosto zastavljena vprašanja: Kaj je rakava celična linija Ramos? Kaj je celična linija Ramos CD19? Kaj je celična linija Ramos CD20? Kakšen je izvor celic Ramos? Kateri so markerji na celični liniji Ramos? Kakšna je velikost celic Ramos? Kakšna je morfologija celične linije Ramos?

• Celična linija Ramos je bila vzpostavljena leta 1972. Te celice so bile pridobljene iz ascitične tekočine 3-letnega belopoltega dečka z ameriškim tipom Burkittovega limfoma [1].
• Izražajo ključne markerje B-celic, vključno z imunoglobulinom M (IgM), CD19, CD20 in CD22.
• Celice Ramos so celice, negativne na virus Epstein-Barr. Vendar se lahko trajno spremenijo v celice, pozitivne na virus Epstein-Barr.
• Te B-limfoblastne celice imajo okroglo morfologijo.

Modre Ramosove celice v primerjavi z Ramosovimi B-celicami

Modre Ramosove celice in Ramosove B-celice so obe človeške celice Burkittovega limfoma. Obe sta negativni za virus Epstein-Barr. Razlika med tema celicama je v tem, da modre Ramosove celice izražajo NF-κB/AP-1-inducirani poročevalski gen, imenovan SEAP (izločeni embrionalni alkalni fosfat), medtem ko bele Ramosove celice tega ne izražajo.

3D-animacija z visoko ločljivostjo, ki prikazuje dinamiko B-limfocita.

Gojenje celic Ramos

Ta del članka je namenjen temu, da vam pomaga pridobiti nujne informacije o gojenju celic Ramos. Tukaj boste izvedeli: Kakšen je čas podvojitve celične linije? Kateri gojišče se priporoča? Kako se gojijo celice Ramos?

Ključne točke za gojenje Ramosovih celic

Čas podvojitve:

Čas podvojitve Ramosovih celic je približno 20,4 ± 1,5 ure. Vendar se lahko odstopa glede na zagotovljene pogoje gojenja celic.

Adherente ali v suspenziji:

Ramosove celice rastejo v suspenziji.

Gostota celic:

Optimalna gostota celic za celično linijo Ramos je 3 x 10⁵ celic/ml. Za subkultiviranje se celice v suspenziji zbirajo s centrifugiranjem. Celicam se doda svež gojišče in se previdno ponovno suspendirajo. Nato se celice prelijejo v novo kolbo v gostoti od 3 do 9 × 10⁵ celic/ml.

Gojišče:

Za gojenje celic Ramos se uporablja RPMI 1640, dopolnjen z 10 % fetalnim govejim serumom, 2,1 mM stabilnim glutaminom in 2,0 g/l NaHCO3. Gojišče je treba zamenjati dvakrat na teden.

Pogoji rasti:

Človeška celična linija Burkittovega limfoma (Ramos) se goji v vlažnem inkubatorju pri 5 % CO₂ in temperaturi 37 °C.

Shranjevanje:

Zamrznjene celice Ramos se hranijo pri temperaturi pod -150 stopinj Celzija ali v plinski fazi tekočega dušika, da se ohrani njihova vitalnost za daljše obdobje.

Postopek zamrzovanja in gojišče:

Za celice Ramos se priporočata zamrzovalna sredstva CM-1 ali CM-ACF. Uporablja se postopek počasnega zamrzovanja, ki omogoča postopno zniževanje temperature za 1 stopinjo Celzija na minuto. To počasno zamrzovanje ščiti celice pred kakršnim koli šokom in izboljša njihovo vitalnost.

Postopek odmrzovanja:

Za odmrzovanje se zamrznjene celice hranijo v predhodno ogreti vodni kopeli pri 37 °C 40 do 60 sekund, dokler ne ostane le še majhen kepec ledu. Nato se doda svež gojišče in celice se centrifugirajo, da se odstranijo ostanki sredstva za zamrzovanje. Pelet se ponovno suspendira in celice se prenesejo v novo kolbo, ki vsebuje gojišče.

Raven biološke varnosti:

Laboratorij z ravnjo biološke varnosti 1 je nujen za vzdrževanje kultur celic Ramos, ki so negativne na virus Epstein-Barr. Vendar se raven biološke varnosti dvigne na 2, ko se celice Ramos trajno spremenijo v celice, pozitivne na virus Epstein-Barr.

Celična linija proliferirajočih B-limfocitov Ramos v suspenziji, prikazana pri 10-kratni in 20-kratni povečavi.

Ramos: Prednosti in omejitve

Tako kot druge celične linije imajo tudi Ramosove celice določene prednosti in omejitve. V tem poglavju bomo raziskali nekatere pomembnejše, ki lahko bistveno vplivajo na njihovo uporabo v raziskavah.

Prednosti

• Celični model Burkittovega limfoma: Ramosove celice so bile razvite iz vzorca bolnika z Burkittovim limfomom, kar jih naredi za ustrezen celični model za preučevanje limfoidnih malignomov.
• Enostavno gojenje: Ramosove celice je enostavno gojiti in vzdrževati v laboratoriju. Imajo preproste zahteve in pogoje za gojenje celic.

Omejitve

• Model in vitro: Ramosove celice morda ne odražajo v celoti genetske kompleksnosti tumorjev bolnikov, kar omejuje njihovo uporabnost. Poleg tega rezultati poskusov z uporabo celične linije Ramos morda ne odražajo v celoti pogojev in vivo, kar lahko povzroči težave pri prenosu iz laboratorija v klinično prakso.

 Uporaba celic Ramos v raziskavah

Ramosove celice ponujajo obetavne možnosti uporabe na biomedicinskem področju. Med najpomembnejše raziskovalne namene uporabe Ramosovih celic spadajo:

• Biologija limfoma: Ramosove celice se široko uporabljajo za preučevanje biologije limfoma. Uporabljajo se za raziskovanje genetskih in molekularnih dejavnikov, ki so osnova limfoidnih malignih obolenj. Poleg tega raziskovalci s pomočjo teh celic Burkittovega limfoma pridobivajo vpogled v nastanek, napredovanje in heterogenost bolezni. Preučujejo se tudi genetske mutacije in signalne poti, kar lahko vodi k razvoju natančnejših diagnostičnih in terapevtskih pristopov. Študija, izvedena leta 2019, je pokazala, da zaviranje histonske acetiltransferaze GCN5 (General control non-depressible 5) zmanjša tumorigenost človeških celic Burkittovega limfoma (Ramos) prek motenja signalizacije BCR. Zato se GCN5 predlaga kot primeren cilj za razvoj zdravljenja limfoma z zdravili [2].
• Presejanje in testiranje zdravil: Celična linija Ramos se pogosto uporablja za presejanje in testiranje zdravil. Raziskovalci ocenjujejo učinkovitost potencialnih terapevtskih spojin pri zaviranju celične proliferacije in rasti ter pri indukciji celične smrti v limfomskih celicah. To pomaga pri prepoznavanju obetavnih kandidatov za zdravila, s čimer se olajša razvoj ciljno usmerjenih zdravljenj za bolnike z limfomom. Raziskave so na primer pokazale, da je metanolni ekstrakt iz lupine, meseca in semen plodov Annona imel zmeren učinek, medtem ko je kloroformni ekstrakt pokazal močan učinek na proliferacijo celic Ramos. Zato je študija predlagala, da bi se plodovi Annona lahko izkazali za učinkovite pri preprečevanju in zdravljenju limfoma [3].

Ramosove celice za vaše raziskave

Objave, v katerih so predstavljene Ramosove celice

V tem delu članka je navedenih nekaj zanimivih raziskovalnih publikacij, ki obravnavajo celično linijo Ramos:

Za funkcionalno sposobnost B-celic Burkittovega limfoma je potrebno neprekinjeno signaliziranje CD 79b in CD 19

Ta raziskava je bila objavljena v reviji The EMBO journal leta 2018. Študija je ugotovila, da B-celice Ramos za svojo sposobnost preživetja in konkurenčno rast potrebujejo izražanje markerjev CD19 in CD79b (komponenta signalizacije BCR Igβ).

Smac-mimetiki in TRAIL sodelujejo pri indukciji MLKL-odvisne nekroptoze v celičnih linijah Burkittovega limfoma

Ta študija, objavljena v reviji Neoplasia (2021), je uporabila Ramosove celice in predlagala, da je domena kinaze mešanega porekla (MLKL) v celicah Burkittovega limfoma (Ramos) epigenetsko regulirana. Zato je obetaven prognostični marker za uspeh zdravljenja s terapijami, povezanimi z nekroptozo.

Fosforilacija PBK/TOPK Tyr74 s strani JAK2 spodbuja rast tumorja Burkittovega limfoma

Ta raziskovalni članek v reviji Cancer Letters (2022) je nakazal, da signalna os JAK2/TOPK/histon H3 igra ključno vlogo pri proliferaciji celičnih linij B-limfoma in vitro.

Stres endoplazmatskega retikuluma, ki ga povzroča verotoksin-1, sproži apoptotične ali preživetvene poti v celicah Burkittovega limfoma

Ta članek je bil objavljen leta 2020 v reviji Toxins. Študija je pokazala, da zdravljenje z verotoksinom-1 povzroča stres endoplazmatskega retikuluma (ER) v B-celicah Ramos. To vodi do sprožitve signalnih poti za apoptozo ali preživetje v celičnih linijah limfoma.

Silimarin zavira izražanje gena za Toll-podobni receptor 8 in apoptozo v rakavi celični liniji Ramos

Ta študija, objavljena v reviji *Avicenna Journal of Phytomedicine* (2020), poroča, da naravna spojina silimarin zavira izražanje TLR8 (Toll-like receptor 8) in apoptozo v celični liniji Ramos.

Viri o celični liniji Ramos: protokoli, videoposnetki in več

Spodaj je navedenih nekaj spletnih virov o celicah Ramos:

• Transfekcija celic Ramos: Ta dokument vam bo pomagal spoznati protokol za transfekcijo celične linije Ramos.

Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic Ramos:

• Celice Ramos: Ta spletna stran vsebuje osnovne informacije o celični liniji Ramos. Vsebuje tudi protokol za subkultiviranje celic Ramos ter ravnanje s proliferativnimi in krioprezerviranimi kulturami. Poleg tega so na voljo tudi informacije o gojiščih za celice Ramos, času podvojitve in gostoti celic.

Ključni vpogledi v Ramosove celice: Pogosto zastavljena vprašanja

Viri

1. Kerntke, C.G., Analiza organizacije in signalne sposobnosti membranskega IgE med njegovo interakcijo s CD19 in CD23 v B-limfocitih. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., Zaviranje GCN5 HAT zmanjša preživetje celic človeškega Burkittovega limfoma z zmanjšanjem ekspresije ciljnih genov MYC in oviranjem signalnih poti BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): str. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fitokemični profil in antioksidativna aktivnost plodov annone ter njen vpliv na proliferacijo limfomskih celic. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): str. 58–68.