Células de Ramos – Pesquisa sobre o linfoma de células B: a importância das células de Ramos

As células Ramos são uma linhagem de linfócitos B amplamente utilizada na pesquisa biomédica. Em particular, elas têm aplicações principais em estudos de imunologia e câncer. Os pesquisadores utilizam essas células para avaliar drogas citotóxicas e estudar antígenos da superfície das células B, mutações e mecanismos de apoptose.

Origem e características gerais das células Ramos

Compreender a origem e as características essenciais de uma linhagem celular desempenha um papel crucial na decisão sobre sua adequação à sua pesquisa. Portanto, é recomendável avaliar minuciosamente essas informações antes de iniciar qualquer trabalho com ela. Esta seção aborda as seguintes perguntas frequentes: O que é a linhagem celular cancerosa Ramos? O que é a linha celular Ramos CD19? O que é a linha celular Ramos CD20? Qual é a origem das células Ramos? Quais são os marcadores da linha celular Ramos? Qual é o tamanho das células Ramos? Qual é a morfologia da linha celular Ramos?

• A linhagem celular Ramos foi estabelecida em 1972. Essas células foram derivadas do líquido ascítico de um menino caucasiano de 3 anos com linfoma de Burkitt do tipo americano [1].
• Elas expressam marcadores-chave de células B, incluindo imunoglobulina M (IgM), CD19, CD20 e CD22.
• As células Ramos são negativas para o vírus de Epstein-Barr. No entanto, elas podem sofrer uma transformação permanente, tornando-se células positivas para o vírus de Epstein-Barr.
• Essas células linfoblastos B apresentam uma morfologia de forma arredondada.

Células azuis de Ramos vs. células B de Ramos

As células azuis de Ramos e as células B de Ramos são ambas células do linfoma de Burkitt humano. Ambas são negativas para o vírus de Epstein-Barr. A diferença entre essas células é que as células azuis de Ramos expressam um gene repórter induzível por NF-κB/AP-1 chamado SEAP (fosfatase alcalina embrionária secretada), enquanto as células brancas de Ramos não o expressam.

Animação 3D de alta resolução que ilustra a dinâmica de um linfócito B.

Cultura de células Ramos

Esta seção do artigo tem como objetivo ajudar você a aprender informações essenciais sobre a cultura de células Ramos. Aqui, você aprenderá: Qual é o tempo de duplicação dessas linhas celulares? Qual é o meio de cultura recomendado? Como se cultiva células Ramos?

Pontos-chave para a cultura de células Ramos

Tempo de duplicação:

O tempo de duplicação das células Ramos é de aproximadamente 20,4 ± 1,5 horas. No entanto, esse valor pode variar dependendo das condições de cultura celular proporcionadas.

Adesivas ou em suspensão:

As células Ramos crescem em suspensão.

Densidade celular:

A densidade celular ideal para a linhagem celular Ramos é de 3 x 10⁵ células/ml. Para a subcultura, as células em suspensão são coletadas por centrifugação. As células recebem meio fresco e são ressuspensas cuidadosamente. Em seguida, as células são transferidas para um novo frasco a uma densidade de 3 a 9 x 10^⁵ células/ml.

Meio de crescimento:

Para a cultura das células Ramos, utiliza-se RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino, 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃. O meio deve ser trocado duas vezes por semana.

Condições de crescimento:

A linhagem celular de linfoma de Burkitt humano (Ramos) é mantida em uma incubadora umidificada com 5% de CO₂ e temperatura de 37 °C.

Armazenamento:

As células Ramos congeladas são mantidas a temperaturas inferiores a -150 graus Celsius ou na fase de vapor de nitrogênio líquido para preservar a viabilidade das células por períodos mais longos.

Processo de congelamento e meio:

Recomenda-se o uso dos meios de congelamento CM-1 ou CM-ACF para as células Ramos. É utilizado um processo de congelamento lento, que permite uma redução gradual da temperatura de 1 grau Celsius por minuto. Esse congelamento lento protege as células contra qualquer choque e aumenta sua viabilidade.

Processo de descongelamento:

Para o descongelamento, as células congeladas são mantidas em um banho-maria pré-aquecido a 37 °C por 40 a 60 segundos, até que reste apenas um pequeno pedaço de gelo. Em seguida, adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento. O sedimento é novamente ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco contendo meio de cultura.

Nível de biossegurança:

O laboratório de nível de biossegurança 1 é essencial para manter culturas de células Ramos negativas para o vírus de Epstein-Barr. No entanto, o nível de biossegurança é elevado para 2 quando as células Ramos se tornam permanentemente positivas para o vírus de Epstein-Barr.

Linha celular de linfócitos B proliferantes de Ramos em suspensão, vista com ampliação de 10x e 20x.

Células de Ramos: Vantagens e Limitações

Assim como outras linhagens celulares, as células Ramos também apresentam vantagens e limitações específicas. Esta seção abordará algumas das mais notáveis, que podem influenciar significativamente seu uso em pesquisas.

Vantagens

• Modelo celular do linfoma de Burkitt: as células Ramos foram desenvolvidas a partir de um paciente com linfoma de Burkitt, o que as torna um modelo celular relevante para o estudo de neoplasias linfóides.
• Fácil cultivo: As células Ramos são fáceis de cultivar e manter em laboratório. Elas apresentam requisitos e condições de cultura celular simples.

Limitações

• Modelo in vitro: as células Ramos podem não representar completamente a complexidade genética dos tumores dos pacientes, limitando assim sua aplicabilidade. Além disso, os resultados de experimentos que utilizam a linhagem celular Ramos podem não refletir inteiramente as condições in vivo, o que pode levar a desafios de translacionalidade.

 Aplicações das células Ramos na pesquisa

As células Ramos oferecem aplicações promissoras no campo biomédico. Alguns dos principais usos das células Ramos na pesquisa incluem:

• Biologia do linfoma: As células Ramos são amplamente utilizadas para estudar a biologia do linfoma. Elas são empregadas para explorar fatores genéticos e moleculares subjacentes às neoplasias linfóides. Além disso, os pesquisadores obtêm insights sobre o início, a progressão e a heterogeneidade da doença utilizando essas células do linfoma de Burkitt. Mutações genéticas e vias de sinalização também são investigadas, o que pode levar ao desenvolvimento de abordagens diagnósticas e terapêuticas mais precisas. Um estudo realizado em 2019 constatou que a inibição da histona acetiltransferase GCN5 (General control non-depressible 5) diminui a tumorigenicidade das células do linfoma de Burkitt humano (Ramos) por meio da interrupção da sinalização do BCR. Portanto, o GCN5 é sugerido como um alvo viável para o desenvolvimento de terapia medicamentosa contra o linfoma [2].
• Triagem e testes de medicamentos: a linhagem celular Ramos é amplamente utilizada para fins de triagem e testes de medicamentos. Os pesquisadores avaliam a eficácia de potenciais compostos terapêuticos na inibição da proliferação e do crescimento celular, bem como na indução da morte celular em células de linfoma. Isso ajuda a identificar candidatos promissores a medicamentos, facilitando assim o desenvolvimento de tratamentos direcionados para pacientes com linfoma. Por exemplo, uma pesquisa mostrou que o extrato metanólico da casca, da polpa e das sementes do fruto da Annona exerceu efeitos moderados, enquanto o extrato de clorofórmio apresentou efeitos robustos sobre a proliferação das células Ramos. Assim, o estudo propôs que os frutos da Annona poderiam se mostrar eficazes na prevenção e no tratamento do linfoma [3].

Células de Ramos para sua pesquisa

Publicações que abordam as células Ramos

Esta seção do artigo lista algumas publicações de pesquisa interessantes que abordam a linhagem celular Ramos:

A sinalização contínua de CD79b e CD19 é necessária para a viabilidade das células B do linfoma de Burkitt

Esta pesquisa foi publicada na revista The EMBO Journal em 2018. O estudo constatou que as células B Ramos necessitam da expressão dos marcadores CD19 e CD79b (componente de sinalização do BCR, Igβ) para sua viabilidade e crescimento competitivo.

Os miméticos de Smac e o TRAIL cooperam para induzir a necroptose dependente de MLKL em linhagens celulares do linfoma de Burkitt

Este estudo, publicado na revista *Neoplasia* (2021), utilizou células Ramos e propôs que o domínio da quinase de linhagem mista (MLKL) é regulado epigeneticamente nas células do linfoma de Burkitt (Ramos). Assim, trata-se de um marcador prognóstico promissor para o sucesso do tratamento com terapias relacionadas à necroptose.

A fosforilação de PBK/TOPK Tyr74 por JAK2 promove o crescimento tumoral do linfoma de Burkitt

Este artigo de pesquisa publicado na revista *Cancer Letters* (2022) sugeriu que o eixo de sinalização JAK2/TOPK/histona H3 desempenha um papel crucial na proliferação de linhagens celulares de linfoma B in vitro.

O estresse do retículo endoplasmático (RE) induzido pela verotoxina-1 aciona vias apoptóticas ou de sobrevivência em células do linfoma de Burkitt

Este artigo foi publicado em 2020 na revista Toxins. O estudo propôs que o tratamento com verotoxina-1 induz estresse do retículo endoplasmático (RE) nas células B da linhagem Ramos. Isso leva ao início de vias de sinalização de apoptose ou sobrevivência em linhagens celulares de linfoma.

A silimarina inibe a expressão gênica do receptor Toll-like 8 e a apoptose na linhagem celular cancerosa Ramos

Este estudo, publicado na revista *Avicenna Journal of Phytomedicine* (2020), relatou que um composto natural, a silimarina, suprime a expressão do TLR8 (receptor Toll-like 8) e a apoptose na linhagem celular Ramos.

Recursos sobre a linhagem celular Ramos: protocolos, vídeos e muito mais

A seguir, apresentamos alguns recursos online sobre as células Ramos:

• Transfecção de células Ramos: este documento ajudará você a aprender o protocolo para a transfecção da linhagem celular Ramos.

O link a seguir contém o protocolo de cultura de células Ramos:

• Células Ramos: este site contém informações básicas sobre a linhagem celular Ramos. Ele também contém um protocolo para subcultivo de células Ramos e manuseio de culturas proliferativas e criopreservadas. Além disso, também estão disponíveis informações sobre meios de cultura para células Ramos, tempo de duplicação e densidade celular.

Referências

1. Kerntke, C.G., Análise da organização e da capacidade de sinalização da IgE de membrana durante sua interação com CD19 e CD23 em linfócitos B. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., A inibição da HAT por GCN5 reduz a sobrevivência das células do linfoma de Burkitt humano por meio da redução da expressão de genes-alvo do MYC e do bloqueio das vias de sinalização do BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Perfil fitoquímico e atividade antioxidante do fruto da annona e seu efeito na proliferação de células de linfoma. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.