Ramos-celler – Forskning i B-celle-lymfom: Betydningen af Ramos-celler

Ramos-celler er en B-lymfocytcellelinje, der i vid udstrækning anvendes i biomedicinsk forskning. De finder især anvendelse inden for immunologi og kræftforskning. Forskere bruger disse celler til at evaluere cytotoksiske lægemidler og til at undersøge B-celleoverfladeantigener, mutationer og apoptotiske mekanismer.

Oprindelse og generelle egenskaber ved Ramos-celler

At forstå en cellelinjes oprindelse og væsentlige egenskaber spiller en afgørende rolle, når man skal afgøre, om den er egnet til din forskning. Det anbefales derfor at vurdere disse oplysninger grundigt, inden du påbegynder noget arbejde med den. Dette afsnit dækker følgende ofte stillede spørgsmål: Hvad er Ramos-kræftcellelinjen? Hvad er Ramos-cellelinjen CD19? Hvad er Ramos-cellelinjen CD20? Hvad er Ramos-cellernes oprindelse? Hvilke markører findes på Ramos-cellelinjen? Hvad er Ramos-cellernes størrelse? Hvad er Ramos-cellelinjens morfologi?

• Ramos-cellelinjen blev etableret i 1972. Disse celler stammer fra ascitesvæsken hos en 3-årig kaukasisk dreng med Burkitt-lymfom af den amerikanske type [1].
• De udtrykker vigtige B-cellemarkører, herunder immunoglobulin M (IgM), CD19, CD20 og CD22.
• Ramos-celler er Epstein-Barr-virus-negative celler. De kan dog permanent omdannes til Epstein-Barr-virus-positive celler.
• Disse B-lymfoblastceller har en rund form.

Ramos-blåceller vs. Ramos-B-celler

Ramos-blåceller og Ramos-B-celler er begge humane Burkitt-lymfomceller. Begge er negative for Epstein-Barr-virus. Forskellen mellem disse celler er, at Ramos-blåceller udtrykker et NF-κB/AP-1-inducerbart reportergen kaldet SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), mens hvide Ramos-celler ikke gør det.

3D-animation i høj opløsning, der illustrerer dynamikken i en B-lymfocyt.

Dyrkning af Ramos-celler

Dette afsnit af artiklen har til formål at hjælpe dig med at tilegne dig vigtig viden om cellekultur vedrørende Ramos-celler. Her vil du lære: Hvad er cellelinjernes fordoblingstid? Hvad er det anbefalede medium? Hvordan dyrker man Ramos-celler?

Nøglepunkter for dyrkning af Ramos-celler

Fordoblingstid:

Fordoblingstiden for Ramos-celler er ca. 20,4 ± 1,5 timer. Den kan dog variere afhængigt af de givne cellekulturforhold.

Adhærent eller i suspension:

Ramos-cellerne vokser i suspension.

Celledensitet:

Den optimale celletæthed for Ramos-cellelinjen er 3 x 10⁵ celler/ml. Ved subkultivering opsamles de suspenderede celler ved centrifugering. Cellerne tilsættes frisk medium og resuspenderes omhyggeligt. Derefter hældes cellerne over i den nye kolbe med en tæthed på 3 til 9 x 10^⁵ celler/ml.

Vækstmedium:

RPMI 1640 tilsat 10 % føtal bovint serum, 2,1 mM stabilt glutamin og 2,0 g/L NaHCO3 anvendes til dyrkning af Ramos-celler. Mediet bør udskiftes 2 gange om ugen.

Vækstbetingelser:

Den humane Burkitt-lymfomcellelinje (Ramos) opbevares i en befugtet inkubator ved 5 % CO₂ og en temperatur på 37 °C.

Opbevaring:

Frosne Ramos-celler opbevares ved en temperatur under -150 grader Celsius eller i dampfasen af flydende nitrogen for at bevare cellernes levedygtighed i længere tid.

Fryseproces og medium:

CM-1- eller CM-ACF-frysemedier anbefales til Ramos-celler. Der anvendes en langsom fryseproces, der muliggør et gradvist temperaturfald på 1 grad Celsius pr. minut. Denne langsomme fryseproces beskytter cellerne mod chok og forbedrer deres levedygtighed.

Optøningsproces:

Ved optøning opbevares de frosne celler i et forvarmet vandbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes frisk medium, og cellerne centrifugeres for at fjerne rester af frysemediet. Pelleten resuspenderes igen, og cellerne overføres til en ny kolbe med dyrkningsmedium.

Biosikkerhedsniveau:

Et laboratorium på biosikkerhedsniveau 1 er afgørende for at opretholde Epstein-Barr-virus-negative Ramos-cellekulturer. Biosikkerhedsniveauet hæves dog til 2, når Ramos-cellerne permanent er blevet Epstein-Barr-virus-positive.

Ramos-prolifererende B-lymfocytcellelinje i suspension, vist ved 10x og 20x forstørrelse.

Ramos: Fordele og begrænsninger

Ligesom andre cellelinjer har Ramos-celler også tydelige fordele og begrænsninger. I dette afsnit vil vi se nærmere på nogle af de væsentligste, som kan have stor indflydelse på deres anvendelse i forskning.

Fordele

• Cellemodel for Burkitt-lymfom: Ramos-cellerne blev udviklet ud fra en patient med Burkitt-lymfom, hvilket gør dem til en relevant cellemodel til undersøgelse af lymfoide maligniteter.
• Nem dyrkning: Ramos-celler er nemme at dyrke og vedligeholde i laboratoriet. De har enkle krav og betingelser for cellekultivering.

Begrænsninger

• In vitro-model: Ramos-celler repræsenterer muligvis ikke fuldt ud den genetiske kompleksitet i patienttumorer, hvilket begrænser deres anvendelighed. Desuden afspejler resultaterne fra eksperimenter med Ramos-cellelinjen muligvis ikke fuldt ud in vivo-forholdene, hvilket potentielt kan føre til udfordringer i forbindelse med overførsel til klinisk praksis.

 Anvendelser af Ramos-celler i forskning

Ramos-cellerne byder på lovende anvendelsesmuligheder inden for det biomedicinske felt. Nogle af de vigtigste forskningsmæssige anvendelser af Ramos-cellerne omfatter:

• Lymfombiologi: Ramos-celler anvendes i vid udstrækning til at studere lymfombiologi. De bruges til at undersøge de genetiske og molekylære faktorer, der ligger til grund for lymfoide maligniteter. Desuden får forskere indsigt i sygdommens opståen, progression og heterogenitet ved hjælp af disse Burkitt-lymfomceller. Genetiske mutationer og signalveje undersøges også, hvilket potentielt kan føre til udviklingen af mere præcise diagnostiske og terapeutiske tilgange. En undersøgelse fra 2019 viste, at hæmning af GCN5 (General control non-depressible 5)-histonacetyltransferase mindsker tumorigeniciteten hos humane Burkitt-lymfomceller (Ramos) ved at forstyrre BCR-signalvejen. Derfor foreslås GCN5 som et muligt mål for udvikling af lægemiddelbehandling mod lymfom [2].
• Lægemiddelscreening og -testning: Ramos-cellelinjen anvendes i vid udstrækning til lægemiddelscreening og -testning. Forskere vurderer effektiviteten af potentielle terapeutiske forbindelser med hensyn til at hæmme celleproliferation og -vækst samt fremkalde celledød i lymfomceller. Dette bidrager til at identificere lovende lægemiddelkandidater og fremmer dermed udviklingen af målrettede behandlinger til lymfompatienter. Forskning har f.eks. vist, at et metanolekstrakt af Annona-frugtens skræl, frugtkød og frø udøvede en moderat virkning, mens et chloroformekstrakt udviste en kraftig virkning på Ramos-cellernes proliferation. Undersøgelsen foreslog derfor, at Annona-frugter kunne vise sig at være effektive til forebyggelse og behandling af lymfom [3].

Ramos-celler til din forskning

Publikationer om Ramos-celler

Dette afsnit af artiklen indeholder en række interessante forskningspublikationer, der omhandler Ramos-cellelinjen:

Kontinuerlig signalering af CD 79b og CD 19 er nødvendig for, at B-celler i Burkitt-lymfom kan overleve

Denne forskning blev offentliggjort i tidsskriftet The EMBO Journal i 2018. Undersøgelsen viste, at Ramos-B-celler kræver ekspression af markørerne CD19 og CD79b (BCR-signalkomponenten Igβ) for at opretholde deres levedygtighed og konkurrencedygtige vækst.

Smac-mimetika og TRAIL samarbejder om at inducere MLKL-afhængig nekroptose i Burkitt-lymfom-cellelinjer

Denne undersøgelse, der blev offentliggjort i *Neoplasia* (2021), anvendte Ramos-celler og fremsatte den hypotese, at mixed lineage kinase domain (MLKL) reguleres epigenetisk i Burkitt-lymfomceller (Ramos). Det er således en lovende prognostisk markør for behandlingssucces ved nekroptose-relaterede terapier.

Fosforylering af PBK/TOPK Tyr74 ved JAK2 fremmer tumorvækst i Burkitt-lymfom

Denne forskningsartikel i Cancer Letters (2022) antydede, at JAK2/TOPK/histon H3-signalaksen spiller en afgørende rolle i proliferationen af B-lymfomcellelinjer in vitro.

Verotoxin-1-induceret ER-stress udløser apoptotiske eller overlevelsesveje i Burkitt-lymfomceller

Denne artikel blev offentliggjort i 2020 i Toxins. Undersøgelsen foreslog, at behandling med verotoxin-1 inducerer endoplasmatisk retikulum (ER)-stress i Ramos B-celler. Dette fører til initiering af apoptotiske eller overlevelsessignaler i lymfomcellelinjer.

Silymarin hæmmer genekspressionen af Toll-lignende receptor 8 og apoptose i Ramos-kræftcellelinjen

Denne undersøgelse i Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) rapporterede, at et naturligt stof, silymarin, undertrykker TLR8-ekspression (Toll-lignende receptor 8) og apoptose i Ramos-cellelinjen.

Ressourcer til Ramos-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere

Her følger nogle online-ressourcer om Ramos-celler:

• Transfektion af Ramos-celler: Dette dokument hjælper dig med at lære protokollen for transfektion af Ramos-cellelinjen.

Følgende link indeholder protokollen for Ramos-cellekultur:

• Ramos-celler: Denne hjemmeside indeholder grundlæggende oplysninger om Ramos-cellelinjen. Den indeholder også en protokol til subkultivering af Ramos-celler og håndtering af prolifererende og kryopræserverede kulturer. Derudover findes der også oplysninger om Ramos-cellemedier, fordoblingstid og celletæthed.

Vigtig indsigt i Ramos-celler: Ofte stillede spørgsmål

Referencer

1. Kerntke, C.G., Analyse af membran-IgE's organisation og signaleringsevne under dets interaktion med CD19 og CD23 i B-lymfocytter. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., Hæmning af GCN5 HAT reducerer overlevelsen af humane Burkitt-lymfomceller gennem reduktion af ekspressionen af MYC-målgener og hæmning af BCR-signalveje. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Fytokemisk profil og antioxidantaktivitet af annona-frugten og dens effekt på lymfomcellers proliferation. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58-68.