Клетките „Рамос“ – изследвания в областта на В-клетъчния лимфом: значението на клетките „Рамос“

Клетките Рамос представляват клетъчна линия от В-лимфоцити, широко използвана в биомедицинските изследвания. По-конкретно, те намират основно приложение в имунологията и изследванията в областта на рака. Изследователите използват тези клетки за оценка на цитотоксични лекарства и за изучаване на повърхностните антигени на В-клетките, мутациите и механизмите на апоптозата.

Произход и общи характеристики на клетките Ramos

Разбирането на произхода и основните характеристики на дадена клетъчна линия играе решаваща роля при определянето на нейната пригодност за вашите изследвания. Ето защо е препоръчително да оцените внимателно тази информация, преди да започнете каквато и да е работа с нея. В този раздел са разгледани следните често задавани въпроси: Какво представлява раковата клетъчна линия Ramos? Какво представлява клетъчната линия Ramos CD19? Какво представлява клетъчната линия Ramos CD20? Какъв е произходът на клетките Ramos? Какви са маркерите на клетъчната линия Ramos? Какъв е размерът на клетките Ramos? Каква е морфологията на клетъчната линия Ramos?

• Клетъчната линия „Рамос“ е създадена през 1972 г. Тези клетки са получени от асцитна течност на 3-годишно момче от кавказки произход с лимфом на Бъркит от американски тип [1].
• Те експресират ключови маркери на В-клетките, включително имуноглобулин М (IgM), CD19, CD20 и CD22.
• Клетките Ramos са отрицателни за вируса на Епщайн-Бар. Въпреки това те могат да бъдат трайно превърнати в клетки, положителни за вируса на Епщайн-Бар.
• Тези В-лимфобластни клетки имат кръгла морфология.

Сини клетки на Рамос срещу В-клетки на Рамос

Сините клетки на Рамос и В-клетките на Рамос са и двете човешки клетки от лимфом на Бъркит. И двете са отрицателни за вируса на Епщайн-Бар. Разликата между тези клетки е, че сините клетки на Рамос експресират индуцируем от NF-κB/AP-1 репортер-ген, наречен SEAP (секретиран ембрионален алкален фосфат), докато белите клетки на Рамос не го експресират.

3D анимация с висока разделителна способност, илюстрираща динамиката на В-лимфоцит.

Отглеждане на клетки „Рамос“

Тази част от статията е посветена на това да ви помогне да научите важни сведения за култивирането на клетките Рамос. Тук ще разберете: Какво е времето за удвояване на клетъчната линия? Каква е препоръчителната среда? Как се култивират клетките Рамос?

Ключови моменти при култивирането на клетки Ramos

Време за удвояване:

Времето за удвояване на клетките Ramos е приблизително 20,4 ± 1,5 часа. То обаче може да варира в зависимост от условията на култивиране.

Адхезивни или в суспензия:

Клетките Ramos растат в суспензия.

Клетъчна плътност:

Оптималната клетъчна плътност за клетъчната линия Ramos е 3 x 10⁵ клетки/мл. За субкултивиране клетките в суспензия се събират чрез центрофугиране. Клетките се добавят към свежа среда и се ресуспендират внимателно. След това клетките се прехвърлят в нова колба при плътност от 3 до 9 × 10^⁵ клетки/мл.

Среда за отглеждане:

За култивиране на клетките Ramos се използва RPMI 1640, допълнена с 10% фетално телешко серум, 2,1 mM стабилен глутамин и 2,0 g/L NaHCO3. Средата трябва да се сменя 2 пъти седмично.

Условия за отглеждане:

Клетъчната линия на човешкия лимфом на Бъркит (Ramos) се съхранява във влажен инкубатор при 5% CO₂ и температура 37 °C.

Съхранение:

Замразените клетки Ramos се съхраняват при температура под -150 градуса Целзий или във фазата на пари на течен азот, за да се запази жизнеспособността на клетките за по-дълъг период.

Процес на замразяване и среда:

За клетките Ramos се препоръчват средите за замразяване CM-1 или CM-ACF. Използва се процес на бавно замразяване, който позволява постепенно понижаване на температурата с 1 градус Целзий на минута. Това бавно замразяване предпазва клетките от шок и подобрява тяхната жизнеспособност.

Процес на размразяване:

За размразяване замразените клетки се държат в предварително затоплена водна баня при 37°C в продължение на 40 до 60 секунди, докато остане малък леден буцик. След това се добавя свежа среда и клетките се центрофугират, за да се отстранят елементите на средата за замразяване. Пелетата се ресуспендира отново и клетките се прехвърлят в нова колба, съдържаща културална среда.

Ниво на биологична безопасност:

Лабораторията с ниво на биологична безопасност 1 е от съществено значение за поддържането на култури от клетки „Рамос“, които са отрицателни за вируса на Епщайн-Бар. Нивото на биологична безопасност обаче се повишава до 2, когато клетките „Рамос“ станат трайно положителни за вируса на Епщайн-Бар.

Клетъчна линия от пролифериращи В-лимфоцити „Рамос“ в суспензия, показана при 10-кратно и 20-кратно увеличение.

Рамос: Предимства и ограничения

Подобно на другите клетъчни линии, клетките Ramos също имат определени предимства и ограничения. В тази секция ще разгледаме някои от най-забележителните, които могат значително да повлияят на тяхното използване в научните изследвания.

Предимства

• Клетъчен модел на лимфом на Бъркит: Клетките Ramos са разработени от пациент с лимфом на Бъркит, което ги прави подходящ клетъчен модел за изучаване на лимфоидни злокачествени заболявания.
• Лесно култивиране: Клетките „Рамос“ се култивират и поддържат лесно в лабораторни условия. Изискванията и условията за тяхното култивиране са прости.

Ограничения

• Модел „in vitro“: Клетките Ramos може да не отразяват напълно генетичната сложност на туморите на пациентите, което ограничава приложимостта им. Освен това резултатите от експерименти, използващи клетъчната линия Ramos, може да не отразяват изцяло условията „in vivo“, което потенциално може да доведе до предизвикателства при пренасянето на резултатите в клиничната практика.

 Приложения на клетките Ramos в научните изследвания

Клетките Ramos предлагат обещаващи приложения в биомедицинската област. Някои от най-важните приложения на клетките Ramos в научните изследвания включват:

• Биология на лимфома: Клетките Ramos се използват широко за изучаване на биологията на лимфома. Те се използват за изследване на генетичните и молекулярните фактори, лежащи в основата на лимфоидните злокачествени заболявания. Освен това, изследователите получават по-добро разбиране за възникването, прогресията и хетерогенността на заболяването, като използват тези клетки от лимфом на Бъркит. Изследват се също генетични мутации и сигнални пътища, което потенциално може да доведе до разработването на по-прецизни диагностични и терапевтични подходи. Проучване, проведено през 2019 г., установи, че инхибирането на хистоновата ацетилтрансфераза GCN5 (General control non-depressible 5) намалява туморогенността на човешките клетки на лимфом на Бъркит (Рамос) чрез нарушаване на BCR сигнализацията. Поради това GCN5 се предлага като възможна мишена за разработване на лекарствена терапия срещу лимфома [2].
• Скрининг и тестване на лекарства: Клетъчната линия Ramos се използва широко за скрининг и тестване на лекарства. Изследователите оценяват ефикасността на потенциални терапевтични съединения при инхибиране на клетъчната пролиферация и растеж, както и при индуциране на клетъчна смърт в лимфомните клетки. Това помага за идентифицирането на обещаващи кандидат-лекарства, като по този начин улеснява разработването на целеви лечения за пациенти с лимфом. Например, изследване показа, че метанолният екстракт от кората, пулпата и семената на плода на Annona оказва умерено действие, докато хлороформният екстракт проявява силно въздействие върху пролиферацията на клетките Ramos. По този начин проучването предложи, че плодовете на Annona могат да се окажат ефективни при профилактиката и лечението на лимфома [3].

Клетки „Рамос“ за вашите научни изследвания

Публикации, посветени на клетъчната линия „Рамос“

В тази част от статията са изброени няколко интересни научни публикации, посветени на клетъчната линия Ramos:

Непрекъснатото сигнализиране на CD 79b и CD 19 е необходимо за жизнеспособността на В-клетките при лимфом на Бъркит

Това изследване беше публикувано в списанието „The EMBO Journal“ през 2018 г. Проучването установи, че B-клетките Ramos се нуждаят от експресията на маркерите CD19 и CD79b (компонент на BCR сигнализацията Igβ) за своята жизнеспособност и конкурентен растеж.

Smac-миметиците и TRAIL си взаимодействат, за да индуцират MLKL-зависима некроптоза в клетъчни линии на лимфом на Бъркит

Това проучване, публикувано в списанието „Neoplasia“ (2021 г.), използва Ramos клетки и предлага хипотезата, че домейнът на киназата със смесен произход (MLKL) се регулира епигенетично в клетките на лимфома на Бъркит (Ramos). По този начин той представлява обещаващ прогностичен маркер за успеха на терапиите, свързани с некроптозата.

Фосфорилирането на PBK/TOPK Tyr74 от JAK2 стимулира растежа на тумора при лимфом на Бъркит

Тази научна статия в списанието „Cancer Letters“ (2022 г.) предполага, че сигналната ос JAK2/TOPK/хистон H3 играе решаваща роля в пролиферацията на клетъчни линии на В-лимфом in vitro.

Стресът в ендоплазматичния ретикулум, предизвикан от веротоксин-1, задейства апоптотични или оцеляващи пътища в клетките на лимфом на Бъркит

Тази статия е публикувана през 2020 г. в списанието „Toxins“. Проучването показва, че лечението с веротоксин-1 предизвиква стрес в ендоплазматичния ретикулум (ЕР) в B-клетките Ramos. Това води до задействане на апоптотични или оцеляващи сигнални пътища в клетъчните линии на лимфома.

Силимарин инхибира експресията на гена на Toll-подобен рецептор 8 и апоптозата в раковата клетъчна линия Ramos

Това проучване, публикувано в списанието „Avicenna Journal of Phytomedicine“ (2020 г.), съобщава, че естественото съединение силимарин потиска експресията на TLR8 (Toll-подобен рецептор 8) и апоптозата в клетъчната линия Ramos.

Ресурси за клетъчната линия Ramos: протоколи, видеоклипове и други

Ето няколко онлайн ресурса за клетките Ramos:

• Трансфекция на клетки Ramos: Този документ ще ви помогне да се запознаете с протокола за трансфекция на клетъчната линия Ramos.

Следният линк съдържа протокола за култивиране на клетки Ramos:

• Клетки Ramos: Този уебсайт съдържа основна информация за клетъчната линия Ramos. Той съдържа също протокол за субкултивиране на клетки Ramos и работа с пролифериращи и криоконсервирани култури. Освен това е налична и информация относно средите за клетки Ramos, времето за удвояване и клетъчната плътност.

Основни познания за клетките на Рамос: Често задавани въпроси

Източници

1. Kerntke, C.G., Анализ на организацията и сигналния капацитет на мембранния IgE по време на взаимодействието му с CD19 и CD23 в В-лимфоцитите. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., и др., Инхибирането на GCN5 HAT намалява оцеляването на човешките клетки от лимфом на Бъркит чрез намаляване на експресията на гени, които са мишени на MYC, и възпрепятстване на сигналните пътища на BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): стр. 5847.
3. Ал-Шая, Х.М. и др., Фитохимичен профил и антиоксидантна активност на плода на анона и неговото въздействие върху пролиферацията на лимфомни клетки. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): стр. 58–68.