Cellule di Ramos - Ricerca sul linfoma a cellule B: l’importanza delle cellule di Ramos

Le cellule Ramos sono una linea cellulare di linfociti B ampiamente utilizzata nella ricerca biomedica. In particolare, trovano applicazione principalmente negli studi di immunologia e oncologia. I ricercatori utilizzano queste cellule per valutare i farmaci citotossici e studiare gli antigeni di superficie dei linfociti B, le mutazioni e i meccanismi apoptotici.

Origine e caratteristiche generali delle cellule Ramos

Comprendere l’origine e le caratteristiche essenziali di una linea cellulare è fondamentale per valutare la sua idoneità alla propria ricerca. Pertanto, è consigliabile valutare attentamente queste informazioni prima di iniziare qualsiasi lavoro su di essa. Questa sezione risponde alle seguenti domande frequenti: Che cos’è la linea cellulare tumorale Ramos? Che cos’è la linea cellulare Ramos CD19? Che cos’è la linea cellulare Ramos CD20? Qual è l’origine delle cellule Ramos? Quali sono i marcatori presenti sulla linea cellulare Ramos? Qual è la dimensione delle cellule Ramos? Qual è la morfologia della linea cellulare Ramos?

• La linea cellulare Ramos è stata istituita nel 1972. Queste cellule sono state ottenute dal liquido ascitico di un bambino caucasico di 3 anni affetto da linfoma di Burkitt di tipo americano [1].
• Esprimono i principali marcatori delle cellule B, tra cui l’immunoglobulina M (IgM), CD19, CD20 e CD22.
• Le cellule Ramos sono negative al virus di Epstein-Barr. Tuttavia, possono essere trasformate in modo permanente in cellule positive al virus di Epstein-Barr.
• Queste cellule linfoblastiche B presentano una morfologia di forma rotonda.

Cellule blu di Ramos vs. cellule B di Ramos

Sia le cellule blu di Ramos che le cellule B di Ramos sono cellule del linfoma di Burkitt umano. Entrambe sono negative al virus di Epstein-Barr. La differenza tra queste cellule consiste nel fatto che le cellule blu di Ramos esprimono un gene reporter inducibile da NF-κB/AP-1 denominato SEAP (fosfatasi alcalina embrionale secreta), mentre le cellule bianche di Ramos no.

Animazione 3D ad alta risoluzione che illustra la dinamica di un linfocita B.

Coltura delle cellule Ramos

Questa sezione dell’articolo è dedicata a fornirti informazioni fondamentali sulla coltura delle cellule Ramos. Qui scoprirai: qual è il tempo di raddoppio della linea cellulare? Qual è il terreno di coltura raccomandato? Come si coltivano le cellule Ramos?

Punti chiave per la coltura delle cellule Ramos

Tempo di raddoppio:

Il tempo di raddoppio delle cellule Ramos è di circa 20,4 ± 1,5 ore. Tuttavia, può variare a seconda delle condizioni di coltura cellulare fornite.

Aderenzi o in sospensione:

Le cellule Ramos crescono in sospensione.

Densità cellulare:

La densità cellulare ottimale per la linea cellulare Ramos è di 3 x 10⁵ cellule/ml. Per la subcoltura, le cellule in sospensione vengono raccolte mediante centrifugazione. Alle cellule viene aggiunto terreno di coltura fresco e vengono risospese con cura. Successivamente, le cellule vengono trasferite in una nuova fiasca a una densità compresa tra 3 e 9 x 10^⁵ cellule/ml.

Terreno di coltura:

Per la coltura delle cellule Ramos si utilizza RPMI 1640 integrato con siero fetale bovino al 10%, glutammina stabile a 2,1 mM e NaHCO₃ a 2,0 g/L. Il terreno di coltura deve essere sostituito due volte alla settimana.

Condizioni di crescita:

La linea cellulare di linfoma di Burkitt umano (Ramos) viene mantenuta in un incubatore umidificato con il 5% di CO₂ e a una temperatura di 37 °C.

Conservazione:

Le cellule Ramos congelate vengono conservate a una temperatura inferiore a -150 gradi Celsius o nella fase vapore dell’azoto liquido per preservarne la vitalità a lungo termine.

Processo di congelamento e terreno:

Per le cellule Ramos si raccomanda l’uso dei terreni di congelamento CM-1 o CM-ACF. Viene utilizzato un processo di congelamento lento che consente una graduale diminuzione della temperatura di 1 grado Celsius al minuto. Questo congelamento lento protegge le cellule da eventuali shock e ne migliora la vitalità.

Processo di scongelamento:

Per lo scongelamento, le cellule congelate vengono tenute in un bagno d'acqua preriscaldato a 37 °C per 40-60 secondi, fino a quando rimane solo un piccolo grumo di ghiaccio. Successivamente, si aggiunge terreno fresco e le cellule vengono centrifugate per rimuovere i residui del terreno di congelamento. Il pellet viene nuovamente risospeso e le cellule vengono trasferite in una nuova fiasca contenente terreno di coltura.

Livello di biosicurezza:

Il laboratorio di livello di biosicurezza 1 è essenziale per mantenere le colture di cellule Ramos negative al virus di Epstein-Barr. Tuttavia, il livello di biosicurezza viene portato a 2 quando le cellule Ramos diventano definitivamente positive al virus di Epstein-Barr.

Linea cellulare di linfociti B proliferanti Ramos in sospensione, osservata con ingrandimento 10x e 20x.

Ramos: Vantaggi e limiti

Come altre linee cellulari, anche le cellule Ramos presentano vantaggi e limiti ben definiti. Questa sezione ne esaminerà alcuni particolarmente rilevanti che potrebbero influenzare in modo significativo il loro impiego nella ricerca.

Vantaggi

• Modello cellulare del linfoma di Burkitt: le cellule Ramos sono state sviluppate a partire da un paziente affetto da linfoma di Burkitt, il che le rende un modello cellulare rilevante per lo studio delle neoplasie linfoidi.
• Facilità di coltura: le cellule Ramos sono facili da coltivare e mantenere in laboratorio. Presentano requisiti e condizioni di coltura cellulare semplici.

Limiti

• Modello in vitro: le cellule Ramos potrebbero non rappresentare completamente la complessità genetica dei tumori dei pazienti, limitandone così l’applicabilità. Inoltre, i risultati degli esperimenti che utilizzano la linea cellulare Ramos potrebbero non riflettere interamente le condizioni in vivo, portando potenzialmente a difficoltà di traslazione.

 Applicazioni delle cellule Ramos nella ricerca

Le cellule Ramos offrono applicazioni promettenti nel campo biomedico. Alcuni degli impieghi di ricerca fondamentali delle cellule Ramos includono:

• Biologia del linfoma: le cellule Ramos sono ampiamente utilizzate per studiare la biologia del linfoma. Vengono impiegate per esplorare i fattori genetici e molecolari alla base delle neoplasie linfoidi. Inoltre, i ricercatori ottengono informazioni sull’insorgenza, la progressione e l’eterogeneità della malattia utilizzando queste cellule del linfoma di Burkitt. Vengono studiate anche le mutazioni genetiche e le vie di segnalazione, il che potrebbe portare allo sviluppo di approcci diagnostici e terapeutici più precisi. Uno studio condotto nel 2019 ha rilevato che l’inibizione dell’istone acetiltransferasi GCN5 (General control non-depressible 5) riduce la tumorigenicità delle cellule del linfoma di Burkitt umano (Ramos) attraverso l’interruzione della segnalazione del BCR. Pertanto, GCN5 è indicato come un potenziale bersaglio per lo sviluppo di terapie farmacologiche contro il linfoma [2].
• Screening e test farmacologici: la linea cellulare Ramos è ampiamente utilizzata per lo screening e i test farmacologici. I ricercatori valutano l’efficacia di potenziali composti terapeutici nell’inibire la proliferazione e la crescita cellulare e nell’indurre la morte cellulare nelle cellule del linfoma. Ciò contribuisce a identificare candidati farmacologici promettenti, facilitando così lo sviluppo di trattamenti mirati per i pazienti affetti da linfoma. Ad esempio, una ricerca ha dimostrato che l’estratto metanolico della buccia, della polpa e dei semi del frutto di Annona esercitava effetti moderati, mentre l’estratto cloroformico mostrava effetti robusti sulla proliferazione delle cellule Ramos. Pertanto, lo studio ha ipotizzato che i frutti di Annona potrebbero rivelarsi efficaci nella prevenzione e nel trattamento del linfoma [3].

Cellule di Ramos per la tua ricerca

Pubblicazioni relative alle cellule Ramos

Questa sezione dell’articolo elenca alcune interessanti pubblicazioni di ricerca che trattano la linea cellulare Ramos:

La segnalazione continua di CD79b e CD19 è necessaria per la sopravvivenza delle cellule B del linfoma di Burkitt

Questa ricerca è stata pubblicata sulla rivista The EMBO Journal nel 2018. Lo studio ha rilevato che le cellule B Ramos necessitano dell’espressione dei marcatori CD19 e CD79b (componente di segnalazione BCR Igβ) per la loro vitalità e crescita competitiva.

I mimici di Smac e il TRAIL cooperano per indurre la necroptosi MLKL-dipendente nelle linee cellulari del linfoma di Burkitt

Questo studio, pubblicato su *Neoplasia* (2021), ha utilizzato le cellule Ramos e ha ipotizzato che il dominio della chinasi a lignaggio misto (MLKL) sia regolato a livello epigenetico nelle cellule del linfoma di Burkitt (Ramos). Pertanto, rappresenta un promettente marcatore prognostico per il successo terapeutico delle terapie basate sulla necroptosi.

La fosforilazione di PBK/TOPK Tyr74 da parte di JAK2 favorisce la crescita tumorale del linfoma di Burkitt

Questo articolo di ricerca pubblicato su *Cancer Letters* (2022) ha suggerito che l’asse di segnalazione JAK2/TOPK/istone H3 svolga un ruolo cruciale nella proliferazione delle linee cellulari del linfoma B in vitro.

Lo stress del reticolo endoplasmatico (ER) indotto dalla verotossina-1 innesca vie apoptotiche o di sopravvivenza nelle cellule del linfoma di Burkitt

Questo articolo è stato pubblicato nel 2020 su *Toxins*. Lo studio ha ipotizzato che il trattamento con verotossina-1 induca lo stress del reticolo endoplasmatico (ER) nelle cellule B Ramos. Ciò porta all’attivazione di segnali di apoptosi o di sopravvivenza nelle linee cellulari di linfoma.

La silimarina inibisce l’espressione genica del recettore Toll-like 8 e l’apoptosi nella linea cellulare tumorale Ramos

Questo studio, pubblicato sull’Avicenna Journal of Phytomedicine (2020), ha riportato che un composto naturale, la silimarina, sopprime l’espressione del TLR8 (recettore Toll-like 8) e l’apoptosi nella linea cellulare Ramos.

Risorse sulla linea cellulare Ramos: protocolli, video e altro

Di seguito sono riportate alcune risorse online sulle cellule Ramos:

• Trasfezione delle cellule Ramos: questo documento vi aiuterà a comprendere il protocollo per la trasfezione della linea cellulare Ramos.

Il link seguente contiene il protocollo di coltura delle cellule Ramos:

• Cellule Ramos: questo sito web contiene informazioni di base sulla linea cellulare Ramos. Include inoltre un protocollo per la subcoltura delle cellule Ramos e la gestione delle colture proliferanti e crioconservate. Sono inoltre disponibili informazioni relative ai terreni di coltura delle cellule Ramos, al tempo di raddoppio e alla densità cellulare.

Approfondimenti sulle cellule Ramos: Domande frequenti

Bibliografia

1. Kerntke, C.G., Analisi dell'organizzazione e della capacità di segnalazione dell'IgE di membrana durante la sua interazione con CD19 e CD23 nei linfociti B. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T., et al., L’inibizione dell’HAT GCN5 riduce la sopravvivenza delle cellule del linfoma di Burkitt umano attraverso la riduzione dell’espressione dei geni bersaglio di MYC e l’ostacolo alle vie di segnalazione del BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., et al., Profilo fitochimico e attività antiossidante del frutto dell’annona e suo effetto sulla proliferazione delle cellule di linfoma. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.