Komórki Ramosa – badania nad chłoniakiem z komórek B: znaczenie komórek Ramosa

Komórki Ramosa to linia komórkowa limfocytów B szeroko stosowana w badaniach biomedycznych. Znajdują one przede wszystkim zastosowanie w immunologii i badaniach nad nowotworami. Naukowcy wykorzystują te komórki do oceny leków cytotoksycznych oraz badania antygenów powierzchniowych komórek B, mutacji i mechanizmów apoptozy.

Pochodzenie i ogólne cechy komórek Ramos

Zrozumienie pochodzenia linii komórkowej i jej podstawowych cech odgrywa kluczową rolę w ocenie jej przydatności do prowadzonych badań. Dlatego przed rozpoczęciem jakichkolwiek prac z jej wykorzystaniem zaleca się dokładną analizę tych informacji. W tej sekcji omówiono następujące często zadawane pytania: Czym jest linia komórkowa nowotworowa Ramos? Czym jest linia komórkowa Ramos CD19? Czym jest linia komórkowa Ramos CD20? Jakie jest pochodzenie komórek Ramos? Jakie są markery linii komórkowej Ramos? Jaka jest wielkość komórek Ramos? Jaka jest morfologia linii komórkowej Ramos?

• Linia komórkowa Ramos została wyizolowana w 1972 roku. Komórki te pochodziły z płynu puchlinowego 3-letniego chłopca rasy kaukaskiej cierpiącego na chłoniaka Burkitta typu amerykańskiego [1].
• Wykazują one ekspresję kluczowych markerów komórek B, w tym immunoglobuliny M (IgM), CD19, CD20 i CD22.
• Komórki Ramos są komórkami ujemnymi pod względem wirusa Epsteina-Barra. Można je jednak trwale przekształcić w komórki dodatnie pod względem wirusa Epsteina-Barra.
• Te limfoblasty B mają okrągły kształt.

Niebieskie komórki Ramosa a komórki B Ramosa

Niebieskie komórki Ramosa i komórki B Ramosa są komórkami ludzkiego chłoniaka Burkitta. Obie są ujemne pod względem wirusa Epsteina-Barra. Różnica między tymi komórkami polega na tym, że niebieskie komórki Ramosa wykazują ekspresję genu reporterowego indukowanego przez NF-κB/AP-1, zwanego SEAP (wydzielana embrionalna fosfataza alkaliczna), podczas gdy białe komórki Ramosa tego genu nie wykazują.

Animacja 3D w wysokiej rozdzielczości przedstawiająca dynamikę limfocytów typu B.

Hodowla komórek Ramos

Ta część artykułu ma na celu przekazanie niezbędnych informacji dotyczących hodowli komórek Ramos. Dowiesz się z niej: Jaki jest czas podwojenia liczby komórek w tej linii komórkowej? Jakie podłoże jest zalecane? Jak przeprowadza się hodowlę komórek Ramos?

Kluczowe informacje dotyczące hodowli komórek Ramos

Czas podwojenia:

Czas podwojenia komórek Ramos wynosi około 20,4 ± 1,5 godziny. Może się on jednak różnić w zależności od warunków hodowli komórek.

Hodowla przylegająca czy w zawiesinie:

Komórki Ramos rosną w zawiesinie.

Gęstość komórek:

Optymalna gęstość komórek dla linii komórkowej Ramos wynosi 3 x 10⁵ komórek/ml. W celu subkultury komórki w zawiesinie zbiera się poprzez wirowanie. Do komórek dodaje się świeżą pożywkę i ostrożnie ponownie zawiesza. Następnie komórki przelewa się do nowej kolby w gęstości od 3 do 9 × 10^⁵ komórek/ml.

Pożywka hodowlana:

Do hodowli komórek Ramos stosuje się pożywkę RPMI 1640 uzupełnioną 10% surowicą płodową bydlęcą, 2,1 mM stabilną glutaminą oraz 2,0 g/l NaHCO₃. Pożywkę należy wymieniać 2 razy w tygodniu.

Warunki hodowli:

Ludzką linię komórkową chłoniaka Burkitta (Ramos) hoduje się w nawilżanym inkubatorze przy stężeniu CO₂ wynoszącym 5% i temperaturze 37°C.

Przechowywanie:

Zamrożone komórki Ramos przechowuje się w temperaturze poniżej -150 stopni Celsjusza lub w fazie gazowej ciekłego azotu w celu zapewnienia długotrwałej żywotności komórek.

Proces zamrażania i pożywka:

W przypadku komórek Ramos zaleca się stosowanie pożywek do zamrażania CM-1 lub CM-ACF. Stosuje się proces powolnego zamrażania, który pozwala na stopniowy spadek temperatury o 1 stopień Celsjusza na minutę. Takie powolne zamrażanie chroni komórki przed szokiem termicznym i zwiększa ich żywotność.

Proces rozmrażania:

W celu rozmrożenia zamrożone komórki umieszcza się w podgrzanej wcześniej łaźni wodnej o temperaturze 37°C na 40 do 60 sekund, aż pozostanie niewielka grudka lodu. Następnie dodaje się świeżą pożywkę i komórki odwirowuje się w celu usunięcia składników pożywki zamrażającej. Osad ponownie zawiesza się, a komórki przenosi się do nowej kolby zawierającej pożywkę hodowlaną.

Poziom bezpieczeństwa biologicznego:

Laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1 jest niezbędne do utrzymania hodowli komórek Ramos wolnych od wirusa Epsteina-Barra. Jednak poziom bezpieczeństwa biologicznego zostaje podwyższony do 2, gdy komórki Ramos zostaną trwale zmodyfikowane tak, aby stały się zakażone wirusem Epsteina-Barra.

Linia komórkowa proliferujących limfocytów B Ramosa w zawiesinie, widok przy powiększeniu 10x i 20x.

Ramos: Zalety i ograniczenia

Podobnie jak inne linie komórkowe, komórki Ramos mają również wyraźne zalety i ograniczenia. W tej sekcji omówimy niektóre z nich, które mogą mieć znaczący wpływ na ich wykorzystanie w badaniach naukowych.

Zalety

• Model komórkowy chłoniaka Burkitta: Komórki Ramos zostały wyhodowane z tkanki pacjenta cierpiącego na chłoniaka Burkitta, co czyni je odpowiednim modelem komórkowym do badania nowotworów limfatycznych.
• Łatwa hodowla: Komórki Ramos są łatwe w hodowli i utrzymaniu w warunkach laboratoryjnych. Wymagania i warunki dotyczące ich hodowli są proste.

Ograniczenia

• Model in vitro: Komórki Ramos mogą nie odzwierciedlać w pełni złożoności genetycznej nowotworów pacjentów, co ogranicza ich zastosowanie. Ponadto wyniki eksperymentów z wykorzystaniem linii komórkowej Ramos mogą nie odzwierciedlać w pełni warunków panujących in vivo, co może prowadzić do trudności w przeniesieniu wyników badań do praktyki klinicznej.

 Zastosowania komórek Ramos w badaniach

Komórki Ramos oferują obiecujące zastosowania w dziedzinie biomedycyny. Do najważniejszych zastosowań badawczych komórek Ramos należą:

• Biologia chłoniaków: Komórki Ramos są szeroko wykorzystywane do badania biologii chłoniaków. Służą one do badania czynników genetycznych i molekularnych leżących u podstaw nowotworów limfoidalnych. Ponadto naukowcy, korzystając z tych komórek chłoniaka Burkitta, uzyskują wgląd w początki choroby, jej postęp oraz heterogenność. Badane są również mutacje genetyczne i szlaki sygnałowe, co potencjalnie może prowadzić do opracowania bardziej precyzyjnych metod diagnostycznych i terapeutycznych. Badanie przeprowadzone w 2019 roku wykazało, że hamowanie acetylotransferazy histonowej GCN5 (General control non-depressible 5) zmniejsza nowotworowość ludzkich komórek chłoniaka Burkitta (Ramos) poprzez zakłócanie sygnalizacji BCR. W związku z tym sugeruje się, że GCN5 może stanowić realny cel w opracowywaniu terapii farmakologicznej chłoniaków [2].
• Przesiewanie i testowanie leków: Linia komórkowa Ramos jest szeroko wykorzystywana do przesiewania i testowania leków. Naukowcy oceniają skuteczność potencjalnych związków terapeutycznych w hamowaniu proliferacji i wzrostu komórek oraz w indukowaniu śmierci komórek chłoniaka. Pomaga to zidentyfikować obiecujące kandydatki na leki, ułatwiając w ten sposób opracowywanie terapii celowanych dla pacjentów z chłoniakiem. Na przykład badania wykazały, że ekstrakt metanolowy ze skórki, miąższu i nasion owoców Annona wywierał umiarkowany wpływ, podczas gdy ekstrakt chloroformowy wykazywał silne działanie na proliferację komórek Ramos. W związku z tym w badaniu zasugerowano, że owoce Annona mogą okazać się skuteczne w profilaktyce i leczeniu chłoniaków [3].

Komórki Ramosa do badań naukowych

Publikacje dotyczące linii komórkowej Ramos

W tej części artykułu wymieniono kilka interesujących publikacji naukowych dotyczących linii komórkowej Ramos:

Ciągła sygnalizacja CD79b i CD19 jest niezbędna dla sprawności komórek B chłoniaka Burkitta

Badanie to zostało opublikowane w czasopiśmie „The EMBO Journal” w 2018 roku. W ramach badania stwierdzono, że komórki B Ramos wymagają ekspresji markerów CD19 i CD79b (składnik sygnałowy BCR – Igβ) w celu zachowania sprawności i konkurencyjnego wzrostu.

Mimetyki Smac i TRAIL współdziałają w indukowaniu nekroptozy zależnej od MLKL w liniach komórkowych chłoniaka Burkitta

W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Neoplasia” (2021) wykorzystano komórki Ramos i wysunięto hipotezę, że domena kinazy mieszanej linii komórkowej (MLKL) podlega regulacji epigenetycznej w komórkach chłoniaka Burkitta (Ramos). Stanowi to zatem obiecujący marker prognostyczny skuteczności terapii opartych na nekroptozie.

Fosforylacja PBK/TOPK Tyr74 przez JAK2 sprzyja wzrostowi guza w chłoniaku Burkitta

W artykule naukowym opublikowanym w czasopiśmie „Cancer Letters” (2022) zasugerowano, że oś sygnałowa JAK2/TOPK/histon H3 odgrywa kluczową rolę w proliferacji linii komórkowych chłoniaka B in vitro.

Stres retikulum endoplazmatycznego wywołany werotoksyną-1 uruchamia szlaki apoptozy lub przeżycia w komórkach chłoniaka Burkitta

Artykuł ten został opublikowany w 2020 r. w czasopiśmie „Toxins”. W badaniu tym wysunięto hipotezę, że podanie werotoksyny-1 wywołuje stres retikulum endoplazmatycznego (ER) w komórkach B linii Ramos. Prowadzi to do uruchomienia szlaków sygnałowych prowadzących do apoptozy lub przeżycia w liniach komórkowych chłoniaka.

Sylimaryna hamuje ekspresję genu receptora Toll-podobnego 8 i apoptozę w linii komórkowej nowotworowej Ramos

W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Avicenna Journal of Phytomedicine” (2020) wykazano, że naturalny związek, sylimaryna, hamuje ekspresję TLR8 (receptora Toll-podobnego 8) oraz apoptozę w linii komórkowej Ramos.

Materiały dotyczące linii komórkowej Ramos: protokoły, filmy i inne zasoby

Poniżej przedstawiono kilka zasobów internetowych dotyczących komórek Ramos:

• Transfekcja komórek Ramos: Ten dokument pomoże Ci zapoznać się z protokołem transfekcji linii komórkowej Ramos.

Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek Ramos:

• Komórki Ramos: Ta strona internetowa zawiera podstawowe informacje na temat linii komórkowej Ramos. Znajduje się na niej również protokół dotyczący subkulturowania komórek Ramos oraz postępowania z hodowlami proliferującymi i kriokonserwowanymi. Ponadto dostępne są informacje dotyczące pożywek dla komórek Ramos, czasu podwojenia oraz gęstości komórek.

Kluczowe informacje na temat komórek Ramos: Często zadawane pytania

Bibliografia

1. Kerntke, C.G., Analiza organizacji i zdolności sygnalizacyjnej błonowego IgE podczas jego interakcji z CD19 i CD23 w limfocytach B. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T. i in., Hamowanie HAT przez GCN5 zmniejsza przeżywalność komórek ludzkiego chłoniaka Burkitta poprzez obniżenie ekspresji genów docelowych MYC i zakłócenie szlaków sygnałowych BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): s. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M. i in., Profil fitochemiczny i aktywność przeciwutleniająca owoców annony oraz ich wpływ na proliferację komórek chłoniaka. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): s. 58–68.