Ramos ląstelės – B ląstelių limfomos tyrimai: Ramos ląstelių svarba

Ramos ląstelės yra B limfocitų ląstelių linija, plačiai naudojama biomedicininiuose tyrimuose. Visų pirma jos taikomos imunologijos ir vėžio tyrimuose. Mokslininkai naudoja šias ląsteles citotoksinių vaistų vertinimui bei B ląstelių paviršiaus antigenų, mutacijų ir apoptozės mechanizmų tyrimams.

Ramos ląstelių kilmė ir bendrosios savybės

Ląstelių linijos kilmės ir pagrindinių savybių supratimas atlieka lemiamą vaidmenį sprendžiant, ar ji tinka jūsų tyrimams. Todėl prieš pradedant bet kokį darbą su ja, patartina nuodugniai įvertinti šią informaciją. Šiame skyriuje aptariami šie dažnai užduodami klausimai: Kas yra „Ramos“ vėžio ląstelių linija? Kas yra Ramos ląstelių linija CD19? Kas yra Ramos ląstelių linija CD20? Kokia yra Ramos ląstelių kilmė? Kokie yra Ramos ląstelių linijos žymekliai? Koks yra Ramos ląstelių dydis? Kokia yra Ramos ląstelių linijos morfologija?

• „Ramos“ ląstelių linija buvo sukurta 1972 m. Šios ląstelės buvo išskirtos iš 3 metų amžiaus kaukazietiškos kilmės berniuko, sergančio amerikietiško tipo Burkitto limfoma, ascito skysčio [1].
• Jos išreiškia pagrindinius B ląstelių žymenis, įskaitant imunoglobuliną M (IgM), CD19, CD20 ir CD22.
• Ramos ląstelės yra Epstein-Barr viruso neigiamos ląstelės. Tačiau jos gali būti nuolat transformuotos į Epstein-Barr viruso teigiamas ląsteles.
• Šios B limfoblastų ląstelės pasižymi apvalios formos morfologija.

Ramos mėlynosios ląstelės ir Ramos B ląstelės

Ramos mėlynosios ląstelės ir Ramos B ląstelės yra žmogaus Burkitto limfomos ląstelės. Abi yra neigiamos Epstein-Barr viruso atžvilgiu. Šių ląstelių skirtumas yra tas, kad Ramos mėlynosios ląstelės ekspresuoja NF-κB/AP-1 indukuojamą reporterinį geną, vadinamą SEAP (sekretuojamas embrioninis šarminis fosfatazė), o baltosios Ramos ląstelės – ne.

Aukštos skiriamosios gebos 3D animacija, iliustruojanti B limfocito dinamiką.

Ramos ląstelių kultivavimas

Ši straipsnio dalis skirta padėti jums sužinoti būtiną informaciją apie Ramos ląstelių kultūravimą. Čia sužinosite: koks yra ląstelių linijos dvigubėjimo laikas? Kokia terpė rekomenduojama? Kaip kultivuoti Ramos ląsteles?

Svarbiausi Ramos ląstelių auginimo aspektai

Padvigubėjimo laikas:

Ramos ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 20,4 ± 1,5 valandos. Tačiau jis gali skirtis priklausomai nuo ląstelių kultivavimo sąlygų.

Adherentinės ar suspensijos:

Ramos ląstelės auga suspensijoje.

Ląstelių tankis:

Optimalus Ramos ląstelių linijos tankis yra 3 x 10⁵ ląstelių/ml. Subkultūrai paruošti suspensijoje esančios ląstelės surenkamos centrifugavimo būdu. Į ląsteles įpilama šviežios terpės ir jos atsargiai resuspenduojamos. Po to ląstelės supilamos į naują kolbą, užtikrinant tankį nuo 3 iki 9 × 10⁵ ląstelių/ml.

Auginimo terpė:

Ramos ląstelėms auginti naudojama RPMI 1640 terpė, papildyta 10 % veršelių serumu, 2,1 mM stabiliu glutaminu ir 2,0 g/l NaHCO3. Terpę reikia keisti 2 kartus per savaitę.

Auginimo sąlygos:

Žmogaus Burkitto limfomos ląstelių linija (Ramos) laikoma drėkinamame inkubatoriuje, kuriame yra 5 % CO₂ ir 37 °C temperatūra.

Laikymas:

Užšaldytos Ramos ląstelės laikomos žemesnėje nei -150 laipsnių Celsijaus temperatūroje arba skysto azoto garų fazėje, siekiant užtikrinti ląstelių gyvybingumą ilgesnį laiką.

Užšaldymo procesas ir terpė:

Ramos ląstelėms rekomenduojama naudoti CM-1 arba CM-ACF užšaldymo terpę. Taikomas lėtas užšaldymo procesas, kurio metu temperatūra kas minutę palaipsniui mažėja 1 laipsniu Celsijaus. Šis lėtas užšaldymas apsaugo ląsteles nuo bet kokio šoko ir padidina jų gyvybingumą.

Atšildymo procesas:

Atšildant, užšaldytos ląstelės 40–60 sekundžių laikomos iš anksto įkaitintoje 37 °C vandens vonioje, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Po to įpilama šviežios terpės, o ląstelės centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės elementai. Nuosėdos vėl resuspenduojamos, o ląstelės perpilamos į naują kolbą su kultūrinės terpės.

Biologinio saugumo lygis:

1 lygio biologinio saugumo laboratorija yra būtina norint išlaikyti Epštejno-Barro viruso neigiamas Ramos ląstelių kultūras. Tačiau biologinio saugumo lygis pakeliamas iki 2, kai Ramos ląstelės tampa nuolat Epštejno-Barro viruso teigiamos.

Ramos besidauginančių B limfocitų ląstelių linija suspensijoje, vaizdas padidintas 10x ir 20x.

Ramos: privalumai ir trūkumai

Kaip ir kitos ląstelių linijos, Ramos ląstelės taip pat turi aiškių privalumų ir trūkumų. Šiame skyriuje bus aptarti kai kurie svarbiausi iš jų, kurie gali turėti didelės įtakos jų naudojimui moksliniuose tyrimuose.

Privalumai

• Burkitto limfomos ląstelių modelis: Ramos ląstelės buvo išskirtos iš Burkitto limfomos sergančio paciento, todėl jos yra tinkamas ląstelių modelis limfoidinių piktybinių navikų tyrimams.
• Lengvas auginimas: Ramos ląsteles lengva auginti ir prižiūrėti laboratorijoje. Jų auginimui keliami reikalavimai ir sąlygos yra nesudėtingi.

Trūkumai

• In vitro modelis: Ramos ląstelės gali nevisiškai atspindėti pacientų navikų genetinį sudėtingumą, todėl jų pritaikomumas yra ribotas. Be to, eksperimentų su Ramos ląstelių linija rezultatai gali nevisiškai atspindėti in vivo sąlygas, o tai gali sukelti sunkumų perkeliant rezultatus į klinikinę praktiką.

 Ramos ląstelių pritaikymas moksliniuose tyrimuose

„Ramos“ ląstelės siūlo perspektyvias taikymo galimybes biomedicinos srityje. Kai kurie iš svarbiausių „Ramos“ ląstelių naudojimo moksliniuose tyrimuose pavyzdžių:

• Limfomos biologija: Ramos ląstelės plačiai naudojamos limfomos biologijai tirti. Jos naudojamos limfoidinių piktybinių navikų genetiniams ir molekuliniams veiksniams tirti. Be to, mokslininkai, naudodami šias Burkitto limfomos ląsteles, gauna įžvalgų apie ligos atsiradimą, progresavimą ir heterogeniškumą. Taip pat tiriamos genetinės mutacijos ir signalizacijos keliai, o tai gali padėti sukurti tikslesnius diagnostikos ir gydymo metodus. 2019 m. atliktas tyrimas parodė, kad GCN5 (General control non-depressible 5) histono acetiltransferazės slopinimas sumažina žmogaus Burkitto limfomos ląstelių (Ramos) tumorigeniškumą, sutrikdydamas BCR signalizavimą. Todėl GCN5 siūloma kaip perspektyvus taikinys limfomos vaistų terapijai kurti [2].
• Vaistų atranka ir bandymai: „Ramos“ ląstelių linija plačiai naudojama vaistų atrankos ir bandymų tikslais. Mokslininkai vertina potencialių terapinių junginių veiksmingumą slopinant ląstelių proliferaciją ir augimą bei indukuojant ląstelių mirtį limfomos ląstelėse. Tai padeda identifikuoti perspektyvius vaistų kandidatus, taip palengvinant tikslinio gydymo limfomos pacientams kūrimą. Pavyzdžiui, tyrimai parodė, kad Annona vaisių žievelės, minkštimas ir sėklų metanolinis ekstraktas turėjo vidutinį poveikį, o chloroformo ekstraktas – stiprų poveikį Ramos ląstelių proliferacijai. Taigi, tyrime buvo pasiūlyta, kad Annona vaisiai galėtų pasirodyti veiksmingi limfomos prevencijoje ir gydyme [3].

„Ramos“ ląstelės jūsų tyrimams

Publikacijos, kuriose aptariamos Ramos ląstelės

Šiame straipsnio skyriuje pateikiama keletas įdomių mokslinių publikacijų, kuriose aptariama Ramos ląstelių linija:

Nuolatinis CD 79b ir CD 19 signalizavimas yra būtinas Burkitto limfomos B ląstelių gyvybingumui

Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „The EMBO Journal“ 2018 m. Tyrimo metu nustatyta, kad Ramos B ląstelėms, siekiant išlikti gyvybingoms ir konkurencingai augti, būtina, kad jos ekspresuotų CD19 ir CD79b (BCR signalizacijos komponentas Igβ) žymenis.

Smac mimetikai ir TRAIL bendradarbiauja, siekdami sukelti MLKL priklausomą nekroptozę Burkitto limfomos ląstelių linijose

Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Neoplasia“ (2021 m.), buvo naudojamos Ramos ląstelės ir iškelta hipotezė, kad mišrios kilmės kinazės domenas (MLKL) Burkitto limfomos ląstelėse (Ramos) yra reguliuojamas epigenetiškai. Taigi, tai yra perspektyvus prognostinis žymeklis, leidžiantis įvertinti su nekroptoze susijusių terapijų sėkmę.

JAK2 sukeliamas PBK/TOPK Tyr74 fosforilinimas skatina Burkitto limfomos naviko augimą

Šiame „Cancer Letters“ (2022 m.) žurnale paskelbtame moksliniame straipsnyje teigiama, kad JAK2/TOPK/histono H3 signalizacijos ašis atlieka lemiamą vaidmenį B limfomos ląstelių linijų proliferacijoje in vitro.

Verotoksino-1 sukeltas ER stresas sukelia apoptozės arba išgyvenimo signalinius kelius Burkitto limfomos ląstelėse

Šis straipsnis buvo paskelbtas 2020 m. žurnale „Toxins“. Tyrime teigiama, kad verotoksino-1 poveikis sukelia endoplazminio tinklo (ER) stresą Ramos B ląstelėse. Tai lemia apoptozės arba išgyvenimo signalizacijos procesų inicijavimą limfomos ląstelių linijose.

Silimarinas slopina Toll-panašaus receptoriaus 8 genų ekspresiją ir apoptozę Ramos vėžio ląstelių linijoje

Šiame „Avicenna Journal of Phytomedicine“ (2020 m.) paskelbtame tyrime pranešama, kad natūralus junginys silimarinas slopina TLR8 (Toll-panašaus receptoriaus 8) ekspresiją ir apoptozę Ramos ląstelių linijoje.

Ištekliai apie Ramos ląstelių liniją: protokolai, vaizdo įrašai ir kita

Toliau pateikiami keli internetiniai ištekliai apie „Ramos“ ląsteles:

• „Ramos“ ląstelių transfekcija: Šis dokumentas padės susipažinti su „Ramos“ ląstelių linijos transfekcijos protokolu.

Šioje nuorodoje pateikiamas Ramos ląstelių kultivavimo protokolas:

• „Ramos“ ląstelės: šioje svetainėje pateikiama pagrindinė informacija apie „Ramos“ ląstelių liniją. Joje taip pat pateikiamas „Ramos“ ląstelių subkultivavimo protokolas bei informacija apie besidauginančių ir kriokonservuotų kultūrų tvarkymą. Be to, čia galima rasti informaciją apie „Ramos“ ląstelių auginimo terpę, ląstelių skaičiaus padvigubėjimo laiką ir ląstelių tankį.

Pagrindinės įžvalgos apie Ramoso ląsteles: Dažniausiai užduodami klausimai

Literatūra

1. Kerntke, C.G., Membraninio IgE organizavimo ir signalizavimo gebėjimų analizė jo sąveikos su CD19 ir CD23 B limfocituose metu. 2021 m., Georg-August-Universität Göttingen.
2. Farria, A.T. ir kt., GCN5 HAT slopinimas sumažina žmogaus Burkitto limfomos ląstelių išgyvenimą, mažindamas MYC tikslinio geno ekspresiją ir trukdydamas BCR signalizacijos keliams. „Oncotarget“, 2019. 10(56): p. 5847.
3. Al‐Shaya, H.M., ir kt., Annona vaisių fitocheminis profilis ir antioksidacinis aktyvumas bei jų poveikis limfomos ląstelių proliferacijai. „Food Science & Nutrition“, 2020. 8(1): p. 58–68.