OK

A linhagem celular OK é uma cultura celular permanente de tipo epitelial derivada do tecido renal de uma fêmea adulta de gambá-americano (Didelphis virginiana). Estabelecida in vitro, essa linhagem celular se destaca por seu número modal cromossômico não diploide de 23 e por sua adaptabilidade às condições de cultura de tecidos. Inicialmente derivada de tipos celulares mistos, a cultura evoluiu para células predominantemente epiteliais após oito passagens. A linhagem celular OK foi amplamente caracterizada em termos de morfologia, constituição cromossômica e dinâmica de crescimento, tornando-se um modelo robusto para estudos citogenéticos e de isolamento de cromossomos.

Uma das principais características da linhagem celular OK é sua utilidade em estudos cromossômicos, especialmente para o isolamento do cromossomo X de mamíferos. O cromossomo X da sariguéia é significativamente menor (aproximadamente 30% menor que os autossomos menores) e não contém grandes blocos de heterocromatina constitutiva, facilitando a separação dos autossomos por meio de técnicas como microfluorometria de fluxo e centrifugação em gradiente. O cariótipo estável das células OK, com a presença de um cromossomo marcador metacêntrico característico, amplia sua aplicação em estudos genômicos e cromossômicos. A inativação preferencial do cromossomo X paterno nesse marsupial fornece um modelo comparativo para o estudo dos mecanismos subjacentes à inativação do cromossomo X em mamíferos.

As células OK também demonstraram resiliência e adaptabilidade em várias condições de cultura, incluindo variações de soro e diferentes agentes de parada mitótica, como o Velban (sulfato de vinblastina), que é particularmente eficaz para alcançar altos índices mitóticos para o isolamento cromossômico. A capacidade da linhagem celular de sincronizar e produzir altos rendimentos de células em metáfase ressalta ainda mais sua adequação para análises cromossômicas detalhadas, incluindo a quantificação do conteúdo de DNA e a obtenção de imagens de alta resolução de espalhamentos cromossômicos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.