Siirry sisältöön
OK
Kudos
Munuainen, aivokuori, proksimaalinen tubulus
Synonyymit
Opossum Kidney, OK-WT

Asiakirjat

OK

Cell line · Tuotenumero 606465

The OK cell line is a permanent epithelial-like cell culture derived from kidney tissue of an adult female American opossum (Didelphis virginiana). Establ...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

OK-solulinja on pysyvä epiteelin kaltainen soluviljelmä, joka on peräisin aikuisen amerikkalaisen opossumnaaraan (Didelphis virginiana) munuaiskudoksesta. Tämä in vitro perustettu solulinja on tunnettu siitä, että sen ei-diploidinen kromosomien modaaliluku on 23 ja että se mukautuu kudosviljelyolosuhteisiin. Alun perin se oli peräisin sekasolutyypeistä, mutta kahdeksan läpikäynnin jälkeen se kehittyi pääasiassa epiteelisoluiksi. OK-solulinjaa on luonnehdittu laajasti morfologian, kromosomikoostumuksen ja kasvudynamiikan osalta, mikä tekee siitä vankan mallin sytogeneettisiin ja kromosomien eristämistutkimuksiin.

Yksi OK-solulinjan tärkeimmistä ominaisuuksista on sen hyödyllisyys kromosomitutkimuksissa, erityisesti nisäkkäiden X-kromosomin eristämisessä. Opossumin X-kromosomi on huomattavasti pienempi (noin 30 prosenttia pienempi kuin pienimmät autosomit) eikä sisällä suuria konstitutiivisen heterokromatiinin lohkoja, mikä helpottaa erottamista autosomeista virtauksen mikrofluorometrian ja gradienttisentrifugoinnin kaltaisilla tekniikoilla. OK-solujen vakaa karyotyyppi, jossa on erottuva metasentrinen merkkikromosomi, parantaa niiden käyttöä genomi- ja kromosomitutkimuksissa. Isän X-kromosomin ensisijainen inaktivoituminen tässä pussieläimessä tarjoaa vertailumallin nisäkkäiden X-kromosomin inaktivoitumisen taustalla olevien mekanismien tutkimiseen.

OK-solut ovat myös osoittaneet joustavuutta ja sopeutumiskykyä erilaisissa viljelyolosuhteissa, mukaan lukien seerumin vaihtelut ja erilaiset mitoosin pysäyttävät aineet, kuten Velban (vinblastiinisulfaatti), joka on erityisen tehokas, kun halutaan saavuttaa korkeat mitoosi-indeksit kromosomien eristämistä varten. Solulinjan kyky synkronoitua ja tuottaa suuria määriä metafaasisoluja korostaa entisestään sen soveltuvuutta yksityiskohtaisiin kromosomianalyyseihin, kuten DNA-pitoisuuden kvantifiointiin ja kromosomilevitysten korkean resoluution kuvantamiseen.

Kudos
Munuainen, aivokuori, proksimaalinen tubulus
Synonyymit
  • Opossum Kidney
  • OK-WT

02Luokittelu

Organismi
Opossumi
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen

04Tunnisteet

Lähdeviite
OK (Cytionin luettelonumero 606465)
NCBI-verotunnus
9267
Cellosaurus
CVCL_0472

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
Alfa2-adrenerginen, serotoniini, lisäkilpirauhashormoni, eteisnatriureettinen tekijä

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Aikuiset