Preskoči na vsebino
OK
Tkivo
Ledvica, skorja, proksimalni kanalček
Sinonimi
Opossum Kidney, OK-WT

Dokumenti

OK

Cell line · Številka izdelka 606465

The OK cell line is a permanent epithelial-like cell culture derived from kidney tissue of an adult female American opossum (Didelphis virginiana). Establ...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija OK je stalna epitelijska celična kultura, pridobljena iz ledvičnega tkiva odrasle samice ameriškega oposuma (Didelphis virginiana). Ta celična linija, vzpostavljena in vitro, se odlikuje po nediploidnem kromosomskem modalnem številu 23 in prilagodljivosti pogojem tkivne kulture. Kultura, ki je sprva izvirala iz mešanih tipov celic, se je po osmih prehodih razvila v pretežno epitelijske celice. Celična linija OK je bila obsežno okarakterizirana z vidika morfologije, kromosomske sestave in dinamike rasti, zaradi česar je zanesljiv model za citogenetske študije in študije izolacije kromosomov.

Ena od ključnih značilnosti celične linije OK je njena uporabnost v študijah kromosomov, zlasti za izolacijo sesalskega kromosoma X. Kromosom X oposuma je bistveno manjši (približno 30 % manjši od najmanjših avtosomov) in ne vsebuje velikih blokov konstitutivnega heterokromatina, kar olajša ločevanje od avtosomov s tehnikami, kot sta pretočna mikrofluorometrija in gradientno centrifugiranje. Stabilen kariotip celic OK s prisotnostjo značilnega metacentričnega označevalnega kromosoma omogoča njihovo uporabo v genomskih in kromosomskih študijah. Prednostna inaktivacija očetovega kromosoma X pri tem močeradu je primerjalni model za preučevanje mehanizmov, na katerih temelji inaktivacija kromosoma X pri sesalcih.

Celice OK so pokazale tudi odpornost in prilagodljivost v različnih pogojih gojenja, vključno s spremembami seruma in različnimi sredstvi za zadrževanje mitotike, kot je Velban (vinblastin sulfat), ki je posebej učinkovit za doseganje visokih mitotskih indeksov za izolacijo kromosomov. Sposobnost celične linije, da se sinhronizira in proizvaja velike količine metafaznih celic, še dodatno poudarja njeno primernost za podrobne kromosomske analize, vključno s kvantifikacijo vsebnosti DNK in slikanjem kromosomskih razpršitev z visoko ločljivostjo.

Tkivo
Ledvica, skorja, proksimalni kanalček
Sinonimi
  • Opossum Kidney
  • OK-WT

02Razvrstitev

Organizem
Oposum
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijam podobni

04Identifikatorji

Navajanje vira
OK (kataloška številka Cytion 606465)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9267
Cellosaurus
CVCL_0472

05Izražanje in dovzetnost

Izraženi receptorji
Alfa2-adrenergični, serotonin, parathormon, atrijski natriuretični faktor

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (številka izdelka Cytion 820100a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS in 1 % NEAA
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
Odrasli