Skip to content
OK
Tissue
ไต, คอร์เท็กซ์, ท่อไตส่วนต้น
Synonyms
Opossum Kidney, OK-WT

Documents

OK

Cell line · Product number 606465

The OK cell line is a permanent epithelial-like cell culture derived from kidney tissue of an adult female American opossum (Didelphis virginiana). Establ...

€430.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

เซลล์ไลน์ OK เป็นเซลล์เพาะเลี้ยงชนิดถาวรที่มีลักษณะคล้ายเซลล์เยื่อบุผิว ซึ่งได้มาจากเนื้อเยื่อไตของโอพอสซัมเพศเมียอเมริกันโตเต็มวัย (Didelphis virginiana) โดยถูกสร้างขึ้นในหลอดทดลอง เซลล์ไลน์นี้มีจุดเด่นคือมีจำนวนโครโมโซมแบบโมดอลที่ไม่เป็นสองเท่า คือ 23 โครโมโซม และสามารถปรับตัวได้ดีต่อสภาวะการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ในระยะแรกที่ได้มา เซลล์ในวัฒนธรรมเป็นเซลล์ผสมหลายชนิด แต่หลังจากผ่านการคัดเลือกและเพาะเลี้ยงต่อเนื่องแปดครั้ง พบว่าเซลล์ส่วนใหญ่กลายเป็นเซลล์เยื่อบุผิวเซลล์ไลน์ OK ได้รับการศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยา องค์ประกอบของโครโมโซม และพลวัตการเจริญเติบโตอย่างละเอียดถี่ถ้วน ทำให้เป็นแบบจำลองที่แข็งแกร่งสำหรับการศึกษาทางไซโตจีเนติกและการแยกโครโมโซม

หนึ่งในคุณสมบัติหลักของเซลล์ไลน์ OK คือประโยชน์ในการศึกษาโครโมโซม โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการแยกโครโมโซม X ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม โครโมโซม X ของโอพอสซัมมีขนาดเล็กกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (ประมาณ 30% ของออโตโซมที่เล็กที่สุด) และไม่มีบล็อกใหญ่ของเฮเทอโรโครมาตินแบบคงที่ ทำให้ง่ายต่อการแยกออกจากออโตโซมผ่านเทคนิคเช่นโฟลว์ไมโครฟลูออโรเมตรีและการหมุนเหวี่ยงแบบความชันลักษณะของโครโมโซมที่คงที่ของเซลล์ OK ซึ่งมีการปรากฏของโครโมโซมเครื่องหมายเมตาเซนทริกที่โดดเด่น ช่วยเพิ่มการประยุกต์ใช้ในงานวิจัยทางจีโนมและโครโมโซมได้มากขึ้น การที่โครโมโซม X ของบิดามีการปิดการทำงานอย่างมีความเป็นไปได้สูงในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมชนิดนี้ ให้แบบจำลองเชิงเปรียบเทียบสำหรับการศึกษาเกี่ยวกับกลไกที่อยู่เบื้องหลังการปิดการทำงานของโครโมโซม X ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม

เซลล์ OK ยังแสดงให้เห็นถึงความทนทานและความสามารถในการปรับตัวในสภาวะการเพาะเลี้ยงที่หลากหลาย รวมถึงการเปลี่ยนแปลงของซีรัมและสารยับยั้งไมโทซิสต่าง ๆ เช่น Velban (วินบลัสทีน ซัลเฟต) ซึ่งมีประสิทธิภาพเป็นพิเศษในการเพิ่มดัชนีไมโทซิสสูงสำหรับการแยกโครโมโซม ความสามารถของสายเซลล์ในการซิงโครไนซ์และผลิตเซลล์ในระยะเมตาเฟสในปริมาณสูงยังเน้นย้ำถึงความเหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์โครโมโซมอย่างละเอียด รวมถึงการวัดปริมาณดีเอ็นเอและการถ่ายภาพความละเอียดสูงของการกระจายโครโมโซม

Tissue
ไต, คอร์เท็กซ์, ท่อไตส่วนต้น
Synonyms
  • Opossum Kidney
  • OK-WT

02Classification

Organism
Opossum
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว

04Identifiers

Citation
OK (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 606465)
NCBI TaxID
9267
Cellosaurus
CVCL_0472

05Expression and susceptibility

Receptors expressed
อัลฟา2-อะดรีเนอร์จิก, เซโรโทนิน, ฮอร์โมนพาราไทรอยด์, ปัจจัยขับโซเดียมจากหัวใจห้องบน

06Handling and culture

Culture medium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2.2 g/L NaHCO3, w: EBSS (หมายเลขบทความ Cytion 820100a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10% และ NEAA 1%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Donor age
ผู้ใหญ่