Pāriet uz saturu
OK
Audums
Nieres, garoza, proksimālais kanāliņš
Sinonīmi
Opossum Kidney, OK-WT

Dokumenti

OK

Cell line · Preces numurs 606465

The OK cell line is a permanent epithelial-like cell culture derived from kidney tissue of an adult female American opossum (Didelphis virginiana). Establ...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

OK šūnu līnija ir pastāvīga epitēlijveida šūnu kultūra, kas iegūta no pieaugušas Amerikas oposuma (Didelphis virginiana) mātītes nieru audiem. Šī šūnu līnija, kas izveidota in vitro, izceļas ar nediploīdu hromosomu modālo skaitu - 23 - un pielāgojamību audu kultūras apstākļiem. Sākotnēji iegūta no jaukta tipa šūnām, pēc astoņām pasāžām kultūra attīstījās par pārsvarā epitēlija šūnām. OK šūnu līnija ir plaši raksturota attiecībā uz morfoloģiju, hromosomu sastāvu un augšanas dinamiku, padarot to par stabilu modeli citogenētiskiem un hromosomu izolācijas pētījumiem.

Viena no galvenajām OK šūnu līnijas īpašībām ir tās lietderība hromosomu pētījumos, jo īpaši zīdītāju X hromosomas izolēšanā. Oposuma X hromosoma ir ievērojami mazāka (aptuveni par 30 % mazāka nekā vismazākās autosomas) un nesatur lielus konstitutīvā heterohromatīna blokus, kas atvieglo atdalīšanu no autosomām, izmantojot tādas metodes kā plūsmas mikrofluorometrija un gradientu centrifugācija. OK šūnu stabilais kariotips ar atšķirīgu metacentrisko marķieru hromosomu klātbūtni uzlabo to izmantošanu genomu un hromosomu pētījumos. Paternālās X hromosomas preferenciālā inaktivācija šajā purva zīdītājdzīvniekā ir salīdzinošs modelis, lai pētītu mehānismus, kas ir pamatā X hromosomas inaktivācijai zīdītāju organismā.

OK šūnas ir arī pierādījušas elastību un spēju pielāgoties dažādiem kultūras apstākļiem, tostarp seruma variācijām un dažādiem mitozes aizturētājiem, piemēram, Velban (vinblastīna sulfāts), kas ir īpaši efektīvs, lai sasniegtu augstus mitozes rādītājus hromosomu izolācijai. Šūnu līnijas spēja sinhronizēties un ražot lielu metafāzes šūnu daudzumu vēl vairāk uzsver tās piemērotību detalizētām hromosomu analīzēm, tostarp DNS satura kvantitatīvai noteikšanai un hromosomu izkliedes augstas izšķirtspējas attēliem.

Audums
Nieres, garoza, proksimālais kanāliņš
Sinonīmi
  • Opossum Kidney
  • OK-WT

02Klasifikācija

Organisms
Oposums
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs

04Identifikatori

Atsauce
OK (Cytion kataloga numurs 606465)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9267
Cellosaurus
CVCL_0472

05Pazīmes un uzņēmība

Ekspresētie receptori
Alfa2-adrenerģiskais, serotonīns, parathormons, priekškambaru natriuretiskais faktors

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
Pieaugušo