HROC300 الفصل الثاني، الأسبوع الأول

HROC300 T2 M1 هو خط خلايا سرطانية بشرية في القولون والمستقيم مشتق من عينة ورم أولي تم استئصالها من مريض بالغ ضمن مجموعة نماذج HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer). يشير التسمية "T2" إلى أن الورم تم الحصول عليه في وقت جراحي ثانٍ، بينما يشير "M1" إلى النموذج المختبري المقابل الذي تم إنشاؤه من هذه العينة. تدمج منصة HROC بين البنوك الحيوية الشاملة والتوليد المعياري للزرع الغريب المشتق من المريض (PDX) وخطوط الخلايا الدائمة منخفضة التمرير، مما يتيح نماذج أورام مذيلة بتعليقات جزيئية من حالات سرطان القولون والمستقيم المتتالية.

تم إنشاء HROC300 T2 M1 وفقًا لبروتوكول موحد يتضمن تفكيك ميكانيكي لأنسجة الورم المقطوعة حديثًا، والترشيح للحصول على معلقات خلية واحدة، وزرعها على لوحات استزراع مغطاة بالكولاجين في وسط استزراع خلايا ورم محدد مضاف إليه الجلوتامين والمضادات الحيوية ومضادات الفطريات. عبر مجموعة HROC، تم إنشاء خطوط خلوية أولية دائمة من حوالي 13٪ من عينات سرطان القولون والمستقيم التي تمت محاولة استخراجها، مع نجاح الإنشاء المرتبط في التحليل أحادي المتغير بدرجة أعلى من الأورام وحالة عقيدية متقدمة. حدد التحليل متعدد المتغيرات تورط العقيدات كمتنبئ مستقل لنجاح إنشاء النموذج المختبري. تعكس هذه النتائج إثراء الأنماط الظاهرية العدوانية بيولوجيًا بين الثقافات التي تم تكييفها بنجاح.

ضمن مجموعة HROC الأوسع نطاقًا، تشمل النماذج جميع الأنواع الفرعية الجزيئية الرئيسية لسرطان القولون والمستقيم، بما في ذلك عدم الاستقرار الكروموسومي (CIN)، والنمط الظاهري لميثيل جزيرة CpG (CIMP)، والأورام المستقرة الميكروساتلية (MSS)، والأورام عالية عدم الاستقرار الميكروساتلية (MSI-H)، بالإضافة إلى خلفيات طفرات متنوعة تؤثر على جينات مثل KRAS و BRAF و TP53 و APC و PIK3CA. تم إنشاء HROC300 T2 M1 في هذا السياق المُعلق بدقة، مما يسمح بالتكامل مع البيانات السريرية المرضية المطابقة، وحيثما كان ذلك متاحًا، المواد PDX المقابلة. كنموذج سرطان القولون والمستقيم منخفض التمرير ومشتق من المرضى، فإن HROC300 T2 M1 مناسب لدراسات بيولوجيا الأورام، والارتباطات بين النمط الجيني والنمط الظاهري، والاختبارات العلاجية قبل السريرية ضمن إطار عمل علم الأورام الدقيق.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان