Ga naar de inhoud
HROC300 T2 M1
Weefsel
Colorectaal
Ziekte
Adenocarcinoom, TNM-stadium T4aN1bM1R2L0V1, gradering G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
Plaats van uitzaaiingen
Er is sprake van metastasen op afstand (TNM M1; stadium T4aN1bM1R2)

Documenten

HROC300 T2 M1

Cell line · Productnummer 300866

HROC300 T2 M1 is een menselijke colorectale carcinoomcellijn die is afgeleid van een primair tumormonster dat is verwijderd bij een volwassen patiënt binnen het HROC (Hansestadt R...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

HROC300 T2 M1 is een menselijke colorectale carcinoomcellijn afkomstig van een primair tumormonster dat is verwijderd bij een volwassen patiënt binnen de HROC-modelcollectie (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer). De aanduiding "T2" geeft aan dat de tumor tijdens een tweede chirurgische ingreep is verkregen, terwijl "M1" verwijst naar het overeenkomstige in-vitromodel dat op basis van dit monster is ontwikkeld. Het HROC-platform integreert uitgebreide biobanking met gestandaardiseerde generatie van patiënt-afgeleide xenotransplantaten (PDX) en permanente cellijnen met een laag aantal passages, waardoor moleculair geannoteerde tumormodellen van opeenvolgende gevallen van colorectale kanker mogelijk worden.

De oprichting van HROC300 T2 M1 volgde een gestandaardiseerd protocol met mechanische dissociatie van vers verwijderd tumorweefsel, filtratie om suspensies van afzonderlijke cellen te verkrijgen en zaaien op met collageen gecoate kweekplaten in een gedefinieerd tumorcelkweekmedium aangevuld met glutamine, antibiotica en antimycotica. In het HROC-cohort werden permanente primaire cellijnen gegenereerd uit ongeveer 13% van de geprobeerde colorectale carcinoommonsters, waarbij de succesvolle oprichting in univariate analyse correleerde met een hogere tumorgradatie en een gevorderde lymfeklierstatus. Multivariate analyse identificeerde lymfeklierbetrokkenheid als een onafhankelijke voorspeller van succesvolle in vitro modeloprichting. Deze bevindingen weerspiegelen de verrijking van biologisch agressieve fenotypes onder succesvol aangepaste culturen.

Binnen de bredere HROC-collectie omvatten de modellen alle belangrijke moleculaire subtypes van colorectaal carcinoom, waaronder chromosomale instabiliteit (CIN), CpG-eilandmethylatiefenotype (CIMP), microsatellietstabiele (MSS) en microsatellietinstabiliteit-hoge (MSI-H) tumoren, evenals diverse mutatieachtergronden die genen zoals KRAS, BRAF, TP53, APC en PIK3CA. HROC300 T2 M1 is gegenereerd in deze rigoureus geannoteerde context, waardoor integratie met bijpassende klinisch-pathologische gegevens en, indien beschikbaar, overeenkomstig PDX-materiaal mogelijk is. Als een laag-passage, van patiënten afkomstig colorectaal carcinoommodel is HROC300 T2 M1 geschikt voor studies naar tumorbiologie, genotype-fenotype associaties en preklinische therapeutische tests binnen een precisie-oncologisch kader.

Weefsel
Colorectaal
Ziekte
Adenocarcinoom, TNM-stadium T4aN1bM1R2L0V1, gradering G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
Plaats van uitzaaiingen
Er is sprake van metastasen op afstand (TNM M1; stadium T4aN1bM1R2)
Toepassingen
Onderzoek naar colorectaal carcinoom; MSS-colorectaal adenocarcinoom; HROC Linnebacher-biobank; gevoeligheid voor geneesmiddelen; modellering van colorectaal carcinoom in een vergevorderd stadium; tumorbiologie

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Man
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
Zonder genetisch gemodificeerde organismen
Details over de GGO-status
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Celtype
Epitheelcellen
MSI-status
MSS

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HROC300 T2 M1 (Cytion catalogusnummer 300866)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_VQ94

05Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Vloeistofverversing
Om de 3 tot 5 dagen
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

07Donateur

Leeftijd van de donor
73 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch