Mine otse sisu juurde
HROC300 T2 M1
Kude
Kolorektaalne
Haigus
Adenokartsinoom, TNM staadium T4aN1bM1R2L0V1, liigitus G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
Metastaaside asukoht
Esineb kaugmetastaasid (TNM M1; staadium T4aN1bM1R2)

Dokumendid

HROC300 T2 M1

Cell line · Toote number 300866

HROC300 T2 M1 on inimese kolorektaalse kartsinoomi rakuliin, mis on saadud HROC (Hansestadt R...) raames täiskasvanud patsiendilt eemaldatud primaarse kasvaja proovist...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HROC300 T2 M1 on inimese kolorektaalse kartsinoomi rakuliin, mis on saadud HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) mudelikogust täiskasvanud patsiendilt eemaldatud primaarse kasvaja proovist. Tähis „T2” näitab, et kasvaja saadi teisel kirurgilisel hetkel, samas kui „M1” tähistab sellest proovist loodud vastavat in vitro mudelit. HROC platvorm integreerib tervikliku biopanga standardiseeritud patsiendilt saadud ksenotransplantaatide (PDX) ja püsivate madala passaažiga rakuliinide loomisega, võimaldades molekulaarselt märgistatud kasvajamudeleid järjestikustest kolorektaalse vähiga juhtudest.

HROC300 T2 M1 loomine toimus standardiseeritud protokolli järgi, mis hõlmas värskelt resekteeritud kasvajakoest mehaanilist dissotsiatsiooni, filtreerimist üherakuliste suspensioonide saamiseks ja külvamist kollageeniga kaetud kultuurplaatidele määratletud kasvajarakkude kultuurikeskkonnas, millele oli lisatud glutamiini, antibiootikume ja antimükotikaid. Kogu HROC-kohordis loodi püsivad primaarrakuliinid ligikaudu 13% kolorektaalse kartsinoomi proovide puhul, kusjuures edukas loomine korreleerus ühe muutuja analüüsis kõrgemate kasvajate astmete ja arenenud lümfisõlmede seisundiga. Mitme muutuja analüüs tuvastas lümfisõlmede kaasatuse kui sõltumatu ennustaja edukale in vitro mudeli loomisele. Need tulemused peegeldavad bioloogiliselt agressiivsete fenotüüpide rikastumist edukalt kohandatud kultuuride seas.

Laiemas HROC kogus hõlmavad mudelid kõiki kolorektaalse kartsinoomi peamisi molekulaarseid alatüüpe, sealhulgas kromosoomide ebastabiilsust (CIN), CpG-saarte metülaatorfenotüüpi (CIMP), mikrosatelliitide stabiilsust (MSS) ja mikrosatelliitide kõrget ebastabiilsust (MSI-H) ning mitmesuguseid mutatsioonilisi taustu, mis mõjutavad selliseid geene nagu KRAS, BRAF, TP53, APC ja PIK3CA. HROC300 T2 M1 loodi selles rangelt annotatsioonidega kontekstis, võimaldades integratsiooni sobivate kliinilis-patoloogiliste andmetega ja, kui need on kättesaadavad, vastava PDX-materjaliga. Madala passaažiga, patsientidelt saadud kolorektaalse kartsinoomi mudelina sobib HROC300 T2 M1 kasvajabioloogia, genotüübi-fenotüübi seoste ja prekliiniliste terapeutiliste testide uuringuteks täppisonkoloogia raamistikus.

Kude
Kolorektaalne
Haigus
Adenokartsinoom, TNM staadium T4aN1bM1R2L0V1, liigitus G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
Metastaaside asukoht
Esineb kaugmetastaasid (TNM M1; staadium T4aN1bM1R2)
Rakendused
kolorektaalvähi uuringud; MSS-kolorektaalne adenokartsinoom; HROC Linnebacher’i biopank; ravimite tundlikkus; kõrge staadiumiga kolorektaalvähi modelleerimine; kasvaja bioloogia

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-vaba
GMO-staatuse üksikasjad
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakud
MSI staatus
MSS

04Tunnused

Viide
HROC300 T2 M1 (Cytioni katalooginumber 300866)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_VQ94

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
Iga 3 kuni 5 päeva tagant
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
73 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia