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Lenti-X293T
Gewebe
Embryonale Niere
Krankheit
Transformierte Zelllinie (Adenovirus Typ 5 DNA-transformierte HEK-Zellen)
Synonyme
Lenti-X 293T, 293T, HEK 293T

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Lenti-X293T

Cell line · Artikelnummer 305820

Lenti-X293T-Zellen sind ein Derivat der menschlichen embryonalen Nierenzelllinie 293T, das speziell für hocheffiziente lentivirale Vektoren entwickelt und optimiert wurde...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Lenti-X293T-Zellen sind ein Derivat der menschlichen embryonalen Nierenzelllinie 293T, die speziell für die hocheffiziente Produktion von lentiviralen Vektoren entwickelt und optimiert wurde. Wie die ursprünglichen 293T-Zellen exprimieren sie stabil das SV40-Large-T-Antigen, das die episomale Replikation von Plasmiden mit dem SV40-Replikationsursprung ermöglicht und die Effizienz der transienten Transfektion deutlich verbessert. Lenti-X293T-Zellen weisen eine adhärente Epithelmorphologie und robuste Wachstumseigenschaften unter standardmäßigen serumsupplementierten Kulturbedingungen auf und unterstützen so hochdichte Kulturen, die für groß angelegte virale Produktionsabläufe geeignet sind.

Diese Zelllinie wurde aufgrund ihrer überlegenen Transfektionsleistung unter Verwendung von Calciumphosphat-, Lipid- oder Polymer-basierten Reagenzien ausgewählt, was zu konsistent erhöhten Lentivirus-Titern im Vergleich zu herkömmlichen HEK293T-Populationen führt. Die verbesserte Virusproduktion ist auf eine optimierte Zellphysiologie zurückzuführen, die eine effiziente Plasmidaufnahme, eine starke Transgenexpression und eine effektive Assemblierung und Freisetzung von replikationsinkompetenten lentiviralen Partikeln unterstützt, wenn diese mit geeigneten Verpackungs- und Hüllkonstrukten co-transfiziert werden. Lenti-X293T-Zellen werden daher häufig für die Erzeugung von lentiviralen Vektoren der dritten Generation in Anwendungen zur Genübertragung, Genbearbeitung und zur Entwicklung stabiler Zelllinien verwendet.

Lenti-X293T-Zellen behalten die allgemeine Verwendbarkeit von HEK293-abgeleiteten Systemen für die hochgradige Expression rekombinanter Proteine und für Studien zur transienten Genexpression bei. Aufgrund ihrer stabilen Wachstumseigenschaften und ihrer reproduzierbaren Leistung eignen sie sich sowohl für kleine Forschungsanwendungen als auch für skalierbare Produktionsumgebungen, vorausgesetzt, dass die Standardrichtlinien für Biosicherheit und Vektorverpackung für lentivirale Systeme befolgt werden.

Gewebe
Embryonale Niere
Krankheit
Transformierte Zelllinie (Adenovirus Typ 5 DNA-transformierte HEK-Zellen)
Anwendungen
Herstellung lentiviraler Vektoren; transiente Transfektion; hochgradige Expression rekombinanter Proteine; Virusverpackung
Synonyme
  • Lenti-X 293T
  • 293T
  • HEK 293T

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GVO
Angaben zum GVO-Status
GMO Status Genetically modified (adenovirus type 5 DNA transformation; SV40 large T antigen expression)
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Embryonale Nierenepithelzellen
Tumorauslösend
tumorigen in immungeschwächten Mäusen (für 293T)
Ploidie-Status
Aneuploid, hypotriploid (für 293T berichtet)
Karyotyp
Aneuploider menschlicher Karyotyp mit multiplen Chromosomenanomalien (typisch für 293T)
Verdopplungszeit
20–24 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
Lenti-X293T (Cytion-Katalognummer 305820)
NCBI-Steuer-ID
9606

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
SV40-Groß-T-Antigen
Antigenexpression
SV40-Groß-T-Antigen
Onkogene
SV40-Groß-T-Antigen
Mutationsprofil
Nicht vollständig charakterisiert; enthält integrierte Adenovirus-5-DNA und SV40-Large-T-Antigen-Konstrukt
Viren
Enthält Adenovirus Typ 5-DNA; exprimiert SV40-Groß-T-Antigen
Anfälligkeit für Viren
Sehr tolerant für die lentivirale Produktion

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Vor Erreichen der vollständigen Konfluenz aufteilen; nach dem Auftauen bis zu 48 Stunden für die vollständige Anlagerung einplanen.
Split-Verhältnis
Ein Verhältnis von 1:5 bis 1:10 wird empfohlen.
Aussaatdichte
2 bis 4 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
Alle 2–3 Tage
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir vollständiges Wachstumsmedium + 10 % DMSO, um eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus