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Lenti-X293T
Tecido
Rim embrionário
Doença
Linha celular transformada (células HEK transformadas com ADN de adenovírus tipo 5)
Sinónimos
Lenti-X 293T, 293T, HEK 293T

Documentos

Lenti-X293T

Cell line · Número do produto 305820

As células Lenti-X293T são um derivado da linhagem renal embrionária humana 293T, modificadas e otimizadas especificamente para vetores lentivirais de alta eficiência...

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01Informações gerais

Descrição

As células Lenti-X293T são um derivado da linhagem renal embrionária humana 293T, projetadas e otimizadas especificamente para a produção de vetores lentivirais de alta eficiência. Assim como as células 293T parentais, elas expressam de forma estável o antígeno T grande do SV40, o que permite a replicação episomal de plasmídeos contendo a origem de replicação do SV40 e aumenta significativamente a eficiência da transfecção transitória. As células Lenti-X293T exibem uma morfologia epitelial aderente e características de crescimento robustas em condições de cultura padrão suplementadas com soro, suportando culturas de alta densidade adequadas para fluxos de trabalho de produção viral em grande escala.

Esta linha celular foi selecionada pelo seu desempenho superior em transfecção utilizando reagentes à base de fosfato de cálcio, lípidos ou polímeros, resultando em títulos lentivirais consistentemente elevados em comparação com as populações HEK293T convencionais. A produção viral aprimorada é atribuída à fisiologia celular otimizada que suporta a absorção eficiente de plasmídeos, forte expressão de transgenes e montagem e liberação eficazes de partículas lentivirais incompetentes para replicação quando co-transfectadas com construções de empacotamento e envelope apropriadas. As células Lenti-X293T são, portanto, amplamente utilizadas para a geração de vetores lentivirais de terceira geração em aplicações de entrega de genes, edição de genes e engenharia de linhas celulares estáveis.

As células Lenti-X293T mantêm a utilidade geral dos sistemas derivados de HEK293 para expressão de proteínas recombinantes de alto nível e estudos de expressão gênica transitória. Suas características de crescimento estável e desempenho reproduzível as tornam adequadas tanto para aplicações de pesquisa em pequena escala quanto para configurações de produção escaláveis, desde que as diretrizes padrão de biossegurança e empacotamento de vetores sejam seguidas para sistemas lentivirais.

Tecido
Rim embrionário
Doença
Linha celular transformada (células HEK transformadas com ADN de adenovírus tipo 5)
Aplicações
Produção de vetores lentivirais; transfecção transitória; expressão de proteínas recombinantes de alto nível; empacotamento de vírus
Sinónimos
  • Lenti-X 293T
  • 293T
  • HEK 293T

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
OGM
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO Status Genetically modified (adenovirus type 5 DNA transformation; SV40 large T antigen expression)
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Células epiteliais renais embrionárias
Tumorigénico
tumorigénico em ratos imunocomprometidos (para 293T)
Estado de ploidia
Aneuploide, hipotriploide (relatado para 293T)
Cariótipo
Cariótipo humano aneuploide com múltiplas anomalias cromossómicas (típico para 293T)
Tempo de duplicação
20-24 horas

04Identificadores

Referência
Lenti-X293T (número de catálogo Cytion 305820)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
Antigénio T grande do SV40
Expressão do antígeno
Antigénio T grande do SV40
Oncogenes
Antigénio T grande do SV40
Perfil mutacional
Não totalmente caracterizado; contém ADN integrado do adenovírus 5 e construção do antígeno T grande do SV40.
Vírus
Contém ADN do adenovírus tipo 5; expressa o antígeno T grande do SV40.
Susceptibilidade ao vírus
Altamente permissivo para a produção de lentivírus

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Divida antes de atingir a confluência total; aguarde até 48 horas para a fixação total após o descongelamento.
Rácio de divisão
Recomenda-se uma proporção de 1:5 a 1:10.
Densidade de sementeira
2 a 4 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
A cada 2-3 dias
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Controlo de qualidade e criopreservação

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo + 10% de DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
Feto