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Lenti-X293T
Tessuto
Rene embrionale
Malattia
Linea cellulare trasformata (cellule HEK trasformate con DNA di adenovirus di tipo 5)
Sinonimi
Lenti-X 293T, 293T, HEK 293T

Documenti

Lenti-X293T

Cell line · Codice prodotto 305820

Le cellule Lenti-X293T sono un derivato della linea cellulare renale embrionale umana 293T, ingegnerizzate e ottimizzate specificamente per vettori lentivirali ad alta efficienza...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule Lenti-X293T sono un derivato della linea cellulare embrionale renale umana 293T, ingegnerizzate e ottimizzate specificamente per la produzione di vettori lentivirali ad alta efficienza. Come le cellule 293T parentali, esprimono in modo stabile l'antigene T grande SV40, che consente la replicazione episomiale dei plasmidi contenenti l'origine di replicazione SV40 e migliora significativamente l'efficienza di trasfezione transitoria. Le cellule Lenti-X293T presentano una morfologia epiteliale aderente e caratteristiche di crescita robuste in condizioni di coltura standard integrate con siero, supportando colture ad alta densità adatte a flussi di lavoro di produzione virale su larga scala.

Questa linea cellulare è stata selezionata per le sue prestazioni di trasfezione superiori utilizzando reagenti a base di fosfato di calcio, lipidi o polimeri, con titoli lentivirali costantemente elevati rispetto alle popolazioni HEK293T convenzionali. La maggiore produzione virale è attribuita alla fisiologia cellulare ottimizzata che supporta un efficiente assorbimento del plasmide, una forte espressione del transgene e un efficace assemblaggio e rilascio di particelle lentivirali non replicanti quando co-trasfettate con appropriati costrutti di confezionamento e involucro. Le cellule Lenti-X293T sono quindi ampiamente utilizzate per la generazione di vettori lentivirali di terza generazione in applicazioni di consegna genica, editing genico e ingegneria di linee cellulari stabili.

Le cellule Lenti-X293T mantengono l'utilità generale dei sistemi derivati da HEK293 per l'espressione di proteine ricombinanti ad alto livello e gli studi di espressione genica transitoria. Le loro caratteristiche di crescita stabile e le prestazioni riproducibili le rendono adatte sia per applicazioni di ricerca su piccola scala che per ambienti di produzione scalabili, a condizione che vengano seguite le linee guida standard di biosicurezza e confezionamento dei vettori per i sistemi lentivirali.

Tessuto
Rene embrionale
Malattia
Linea cellulare trasformata (cellule HEK trasformate con DNA di adenovirus di tipo 5)
Applicazioni
Produzione di vettori lentivirali; trasfezione transitoria; espressione di proteine ricombinanti ad alto livello; confezionamento di virus
Sinonimi
  • Lenti-X 293T
  • 293T
  • HEK 293T

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
OGM
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO Status Genetically modified (adenovirus type 5 DNA transformation; SV40 large T antigen expression)
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellule epiteliali renali embrionali
Tumorigenico
tumorigenico nei topi immunocompromessi (per 293T)
Stato di ploidia
Aneuploide, ipotriploide (segnalato per 293T)
Cariotipo
Cariotipo umano aneuploide con anomalie cromosomiche multiple (tipico per 293T)
Tempo di raddoppio
20-24 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Lenti-X293T (numero di catalogo Cytion 305820)
Codice fiscale NCBI
9606

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Antigene T grande SV40
Espressione dell'antigene
Antigene T grande SV40
Oncogeni
Antigene T grande SV40
Profilo mutazionale
Non completamente caratterizzato; contiene DNA adenovirus 5 integrato e costrutto dell'antigene T grande SV40.
Virus
Contiene DNA dell'adenovirus di tipo 5; esprime l'antigene T grande dell'SV40.
Suscettibilità ai virus
Altamente permissivo per la produzione di lentivirus

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Dividere prima di raggiungere la completa confluenza; attendere fino a 48 ore per il completo attaccamento dopo lo scongelamento.
Rapporto di frazionamento
Si consiglia un rapporto compreso tra 1:5 e 1:10.
Densità di semina
Da 2 a 4 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 2-3 giorni
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo + 10% DMSO per ottenere un'adeguata vitalità post-scongelamento.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Feto