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SK-N-LO
Gewebe
Gehirn
Krankheit
Primitiver neuroektodermaler Tumor
Metastasenherd
Knochenmark
Synonyme
SK-N-L0, SKN-LO, SKNLO

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SK-N-LO

Cell line · Artikelnummer 300400

The SK-N-LO cell line is a human neuroblastoma cell line used in research to study neuroblastoma as well as mechanisms of apoptosis and cancer signaling p...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die SK-N-LO-Zelllinie ist eine menschliche Neuroblastom-Zelllinie, die in der Forschung zur Untersuchung von Neuroblastomen sowie von Apoptose-Mechanismen und Krebs-Signalwegen verwendet wird. Sie wird auch als primitiver neuroektodermaler Tumor (PNET) eingestuft und trägt das EWS-FLI1-Fusionsgen, das häufig bei Tumoren der Ewing-Sarkom-Familie (ESFT) vorkommt. Dieses Fusionsgen resultiert aus einer chromosomalen Translokation und spielt eine Schlüsselrolle im onkogenen Verhalten dieser Tumorzellen.

SK-N-LO-Zellen sind besonders empfindlich gegenüber bestimmten Hemmstoffen, die auf onkogene Signalwege abzielen. So hat sich beispielsweise gezeigt, dass der GLI-Inhibitor GANT61 in SK-N-LO-Zellen eine Kaspase-unabhängige Apoptose auslöst. GANT61 unterbricht die durch GLI1 und GLI2 vermittelte Transkription im Hedgehog (Hh)-Signalweg, der für das Überleben und die Vermehrung der Zellen in dieser Zelllinie entscheidend ist. Bei Behandlung mit GANT61 zeigen SK-N-LO-Zellen morphologische Veränderungen, die mit Apoptose einhergehen, wie Chromatinkondensation und Kernfragmentierung. Darüber hinaus reduziert GANT61 die Expression von Proteinen wie GLI2 und Survivin, die für die Zellzyklusprogression und das Überleben wichtig sind, und erhöht gleichzeitig die Expression von p21, einem Cyclin-abhängigen Kinaseinhibitor.

Darüber hinaus wurden SK-N-LO-Zellen zur Untersuchung der Opioidrezeptor-Signalübertragung verwendet. Diese Zellen wurden so manipuliert, dass sie den μ-Opioidrezeptor exprimieren, was sie zu einem wertvollen Modell für die Untersuchung der Interaktion zwischen opioidinduzierter Analgesie und intrazellulären Signalwegen macht. So haben Studien gezeigt, dass Morphin die Akt-Phosphorylierung in SK-N-LO-Zellen über den PI3Kγ-Signalweg stimuliert, ein Prozess, der durch die cAMP-Signalisierung moduliert werden kann. Dies unterstreicht die Vielseitigkeit von SK-N-LO-Zellen bei der Erforschung sowohl der Krebsbiologie als auch der Neuropharmakologie.

Gewebe
Gehirn
Krankheit
Primitiver neuroektodermaler Tumor
Metastasenherd
Knochenmark
Synonyme
  • SK-N-L0
  • SKN-LO
  • SKNLO

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Karyotyp
Phänotyp Häufigkeit Produkt: 0.00005

04Bezeichner

Quellenangabe
SK-N-LO (Cytion Katalognummer 300400)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_4569

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
3 bis 4 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir 50 % Basalmedium + 40 % FBS + 10 % DMSO oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektiva und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und den kryoinduzierten Stress zu verringern.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
10 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch