Hep-70.4

La lignée cellulaire d'hépatome Hep-70.4 est dérivée d'une tumeur hépatique de souris, plus précisément de la souche de souris C57BL/6J. Cette lignée cellulaire est remarquable pour ses mutations dans le gène p53, qui ont été identifiées à différents passages au cours de la propagation in vitro. Au numéro de passage 8, un faible signal supplémentaire a été détecté dans l'analyse du polymorphisme de conformation simple brin (SSCP), indiquant la présence d'une mutation du gène p53. Au numéro de passage 38, deux mutations ponctuelles distinctes de p53 ont été identifiées : une transversion G:C à C:G au codon 135 et une transversion C:G à G:C au codon 138 de l'exon 5. Ces mutations ont entraîné des changements d'acides aminés, de l'alanine à la proline et de la cystéine au tryptophane, respectivement.

La lignée cellulaire Hep-70.4 présente un phénotype morphologique qui varie considérablement au cours de sa propagation. Certaines sous-lignées présentent une morphologie épithéliale, tandis que d'autres ont un aspect fibroblastique. Cette hétérogénéité reflète la nature complexe de la lignée cellulaire et son adaptabilité dans différentes conditions de culture. La présence d'allèles p53 normaux et mutés dans les premiers passages suggère que les mutations confèrent un avantage sélectif à la croissance, conduisant à la prédominance des clones mutés au fil du temps.

L'analyse des protéines du filament intermédiaire de la lignée cellulaire Hep-70.4 a révélé l'expression des kératines simples K8 et K18, qui sont typiques des cellules hépatiques normales, ainsi que de la vimentine et de la kératine K19 à des degrés divers. Ces profils protéiques confirment l'origine hépatocytaire de la lignée cellulaire et sa classification en tant que lignée d'hépatome. La stabilité génomique de Hep-70.4 a été évaluée par une analyse de l'empreinte ADN, qui n'a révélé aucune anomalie structurelle majeure, bien que des changements dans l'intensité relative de certaines bandes aient été observés avec l'augmentation du nombre de passages.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie