Hep-70.4

Hep-70.4肝細胞株はマウスの肝腫瘍、特にC57BL/6Jマウス系統に由来する。この細胞株はp53遺伝子に変異があることで注目されており、in vitro増殖中の異なる継代で同定された。継代番号8で、一本鎖コンフォメーション多型（SSCP）分析で弱い追加シグナルが検出され、p53突然変異の存在を示した。継代番号38までに、2つの異なるp53点突然変異が同定された：コドン135におけるG:CからC:Gへの転換と、エクソン5のコドン138におけるC:GからG:Cへの転換である。これらの変異は、それぞれアラニンからプロリン、システインからトリプトファンへのアミノ酸変化をもたらした。

Hep-70.4細胞株は、増殖中に大きく変化する形態学的表現型を示す。上皮形態を示す亜株もあれば、線維芽細胞様の外観を示す亜株もある。この不均一性は、この細胞株の複雑な性質と異なる培養条件下での適応性を反映している。初期の継代では正常なp53対立遺伝子と変異したp53対立遺伝子の両方が存在することから、変異が選択的な増殖の利点をもたらし、時間の経過とともに変異したクローンが優勢になることが示唆される。

Hep-70.4細胞株の中間フィラメントタンパク質解析から、正常肝細胞に典型的な単純ケラチンK8とK18、そして程度の差はあるがビメンチンとケラチンK19の発現が明らかになった。これらのタンパク質パターンは、この細胞株が肝細胞由来であり、肝腫瘍株として分類されることを裏付けている。Hep-70.4のゲノムの安定性は、DNAフィンガープリント解析によってさらに評価され、継代数の増加に伴って特定のバンドの相対強度の変化が観察されたものの、大きな構造異常は認められなかった。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。