Hep-70.4

A linha celular de hepatoma Hep-70.4 é derivada de um tumor hepático de ratinho, especificamente da estirpe de ratinho C57BL/6J. Esta linha celular destaca-se pelas suas mutações no gene p53, que foram identificadas em diferentes passagens durante a propagação in vitro. Na passagem número 8, foi detectado um sinal adicional fraco na análise de polimorfismo de conformação de cadeia simples (SSCP), indicando a presença de uma mutação p53. Na passagem número 38, foram identificadas duas mutações pontuais distintas no p53: uma transversão G:C para C:G no códon 135 e uma transversão C:G para G:C no códon 138 do exon 5. Estas mutações levaram a alterações de aminoácidos de alanina para prolina e de cisteína para triptofano, respetivamente.

A linha celular Hep-70.4 apresenta um fenótipo morfológico que varia significativamente durante a sua propagação. Algumas sub-linhas exibem uma morfologia epitelial, enquanto outras apresentam um aspeto fibroblástico. Esta heterogeneidade reflecte a natureza complexa da linha celular e a sua adaptabilidade em diferentes condições de cultura. A presença de alelos p53 normais e mutados nas primeiras passagens sugere que as mutações conferem uma vantagem selectiva de crescimento, levando à predominância de clones mutados ao longo do tempo.

A análise das proteínas de filamentos intermédios da linha celular Hep-70.4 revelou a expressão das queratinas simples K8 e K18, que são típicas das células hepáticas normais, bem como da vimentina e da queratina K19 em graus variáveis. Estes padrões proteicos confirmam a origem hepatocítica da linha celular e a sua classificação como uma linha de hepatoma. A estabilidade genómica da Hep-70.4 foi ainda avaliada através da análise da impressão digital do ADN, que não revelou quaisquer anomalias estruturais importantes, embora tenham sido observadas alterações nas intensidades relativas de determinadas bandas com o aumento do número de passagens.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia