Hep-70.4

Хепатомната клетъчна линия Hep-70.4 е получена от тумор на черния дроб на мишка, по-специално от щама C57BL/6J. Тази клетъчна линия се отличава с мутации в гена p53, които са идентифицирани на различни етапи по време на in vitro размножаването. При пасаж номер 8 е открит слаб допълнителен сигнал при анализа на полиморфизма с едноверижна конформация (SSCP), което показва наличието на мутация на p53. При пасаж номер 38 бяха идентифицирани две различни точкови мутации на p53: G:C към C:G трансверсия в кодон 135 и C:G към G:C трансверсия в кодон 138 на екзон 5. Тези мутации водят до промени в аминокиселините съответно от аланин към пролин и от цистеин към триптофан.

Клетъчната линия Hep-70.4 показва морфологичен фенотип, който се променя значително по време на размножаването ѝ. Някои подлинии проявяват епителна морфология, докато други показват фибробластен вид. Тази хетерогенност отразява сложния характер на клетъчната линия и нейната адаптивност при различни условия на култивиране. Наличието както на нормални, така и на мутирали алели на p53 в ранните пасажи предполага, че мутациите дават селективно предимство при растежа, което с течение на времето води до преобладаване на мутиралите клонове.

Анализът на протеините на междинните нишки на клетъчната линия Hep-70.4 разкрива експресия на прости кератини К8 и К18, които са типични за нормалните чернодробни клетки, както и на виментин и кератин К19 в различна степен. Тези протеинови модели потвърждават хепатоцитния произход на клетъчната линия и класифицирането ѝ като хепатомна линия. Геномната стабилност на Hep-70.4 е оценена допълнително чрез анализ на ДНК отпечатъци, който не разкрива никакви големи структурни аномалии, въпреки че се наблюдават промени в относителната интензивност на някои ленти с увеличаване на броя на пасажите.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация