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Hep-70.4
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간
질병
간세포암종
동의어
HEP-70.4, 70.4

Hep-70.4

Cell line · 제품 번호 400207

The Hep-70.4 hepatoma cell line is derived from a mouse liver tumor, specifically from the C57BL/6J mouse strain. This cell line is notable for its mutati...

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01일반 정보

설명

Hep-70.4 간종양 세포주는 마우스 간 종양, 특히 C57BL/6J 마우스 균주에서 유래합니다. 이 세포주는 체외 증식 중 여러 경로에서 확인된 p53 유전자의 돌연변이로 인해 주목할 만합니다. 8번 통로에서 단일 가닥 형태 다형성(SSCP) 분석에서 약한 추가 신호가 검출되어 p53 돌연변이의 존재를 나타냅니다. 38번 통로에서는 코돈 135의 G:C에서 C:G로의 전환과 엑손 5의 코돈 138에서 C:G에서 G:C로의 전환이라는 두 가지 뚜렷한 p53 점 돌연변이가 확인되었습니다. 이러한 돌연변이는 각각 알라닌에서 프롤린으로, 시스테인에서 트립토판으로 아미노산 변화를 가져왔습니다.

Hep-70.4 세포주는 증식하는 동안 크게 변화하는 형태학적 표현형을 나타냅니다. 일부 서브라인은 상피 형태를 보이는 반면, 다른 서브라인은 섬유아세포와 유사한 모습을 보입니다. 이러한 이질성은 세포주의 복잡한 특성과 다양한 배양 조건에서의 적응성을 반영합니다. 초기 통로에 정상 및 돌연변이 p53 대립유전자가 모두 존재한다는 것은 돌연변이가 선택적 성장 이점을 부여하여 시간이 지남에 따라 돌연변이 클론이 우세하다는 것을 시사합니다.

Hep-70.4 세포주의 중간 필라멘트 단백질 분석 결과, 정상 간세포의 전형적인 단순 케라틴 K8과 K18, 그리고 비멘틴과 케라틴 K19가 다양한 정도로 발현되는 것으로 나타났습니다. 이러한 단백질 패턴은 세포주의 간세포 기원 및 간암 세포주로서의 분류를 확인시켜 줍니다. Hep-70.4의 게놈 안정성은 DNA 지문 분석을 통해 추가로 평가되었는데, 통과 횟수가 증가함에 따라 특정 밴드의 상대적 강도의 변화가 관찰되었지만 주요 구조적 이상은 발견되지 않았습니다.

티슈
간
질병
간세포암종
동의어
  • HEP-70.4
  • 70.4

02분류

생물체
마우스
성
여성
성장 특성
준수자
생물안전 등급
1

03특징

형태학
상피 유사
종양 유발성
예, C3H/He 마우스에서

04식별자

인용
Hep-70.4(사이티온 카탈로그 번호 400207)
NCBI 세금 식별번호
10090
셀로사우루스
CVCL_5772

05발현 및 감수성

돌연변이 프로파일
P53

06취급 및 배양

배지
DMEM, w: 4.5g/L 포도당, w: 4mM L-글루타민, w: 3.7g/L NaHCO3, w: 1.0mM 피루브산 나트륨(사이티온 제품 번호 820300a)
배양 조건

37°C, 5%CO2, 습한 대기.

건강보조식품
10% FBS로 배지를 보충합니다
분리 시약
아큐타제
재배양
부착된 세포에서 오래된 배지를 제거하고 칼슘과 마그네슘이 없는 PBS로 세척합니다. T25 플라스크의 경우 3~5ml, T75 플라스크의 경우 5~10ml의 PBS를 사용합니다. 그런 다음 T25 플라스크의 경우 1~2㎖, T75 플라스크의 경우 2.5㎖를 사용하여 세포를 Accutase로 완전히 덮습니다. 세포를 분리하기 위해 실온에서 8~10분간 배양합니다. 배양 후 세포를 배지 10ml와 부드럽게 혼합하여 재부유시킨 다음 300xg에서 3분간 원심분리합니다. 상층액을 버리고 세포를 신선한 배지에 다시 부유시킨 후 이미 신선한 배지가 들어 있는 새 플라스크에 옮깁니다.
파종 밀도
1 x 10⁴ 세포/cm²
유체 교체
3~5일마다
해동 후 회복
세포가 최소 24시간에서 48시간 동안 회복될 때까지 기다리세요.
해동 및 배양
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07품질 관리 및 냉동 보존

불임

마이코플라스마 오염은 PCR 기반 분석법과 발광 기반 마이코플라스마 검출법을 모두 사용하여 배제합니다.

박테리아, 곰팡이 또는 효모 오염이 없는지 확인하기 위해 세포 배양은 매일 육안 검사를 거칩니다.

배양액 동결
냉동 보존 배지로는 해동 후 충분한 생존력을 위해 완전 성장 배지(FBS 포함) + 10% DMSO를 사용하거나, 최적화된 삼투 보호제 및 대사 안정제가 포함된 CM-1(Cytion 카탈로그 번호 800100)을 사용하여 회복력을 높이고 냉동으로 인한 스트레스를 줄입니다.
보관 조건

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

배송 조건

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

08기부자

품종 / 아종
C57BL/6J
기증자 연령
성인