Hep-70.4

La linea cellulare di epatoma Hep-70.4 deriva da un tumore epatico di topo, in particolare dal ceppo di topo C57BL/6J. Questa linea cellulare si distingue per le mutazioni nel gene p53, identificate a diversi passaggi durante la propagazione in vitro. Al passaggio numero 8, è stato rilevato un debole segnale aggiuntivo nell'analisi del polimorfismo di conformazione a singolo filamento (SSCP), che indica la presenza di una mutazione p53. Al passaggio numero 38, sono state identificate due distinte mutazioni puntiformi di p53: una trasversione da G:C a C:G al codone 135 e una trasversione da C:G a G:C al codone 138 dell'esone 5. Queste mutazioni hanno comportato la formazione di aminoacidi in una delle due parti. Queste mutazioni hanno portato a cambiamenti aminoacidici, rispettivamente da alanina a prolina e da cisteina a triptofano.

La linea cellulare Hep-70.4 mostra un fenotipo morfologico che varia significativamente durante la sua propagazione. Alcune sottolinee presentano una morfologia epiteliale, mentre altre mostrano un aspetto simile a quello dei fibroblasti. Questa eterogeneità riflette la natura complessa della linea cellulare e la sua adattabilità a diverse condizioni di coltura. La presenza di alleli p53 sia normali che mutati nei primi passaggi suggerisce che le mutazioni conferiscono un vantaggio selettivo alla crescita, portando alla predominanza di cloni mutati nel tempo.

L'analisi delle proteine dei filamenti intermedi della linea cellulare Hep-70.4 ha rivelato l'espressione delle cheratine semplici K8 e K18, tipiche delle cellule epatiche normali, nonché della vimentina e della cheratina K19 in misura variabile. Questi pattern proteici confermano l'origine epatocitaria della linea cellulare e la sua classificazione come linea di epatoma. La stabilità genomica di Hep-70.4 è stata ulteriormente valutata attraverso l'analisi del DNA fingerprint, che non ha rivelato alcuna anomalia strutturale di rilievo, sebbene siano state osservate variazioni nell'intensità relativa di alcune bande con l'aumento del numero di passaggi.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia