Hep-70.4

De hepatoomcellijn Hep-70.4 is afgeleid van een levertumor bij muizen, specifiek van de C57BL/6J muizenstam. Deze cellijn is opmerkelijk vanwege de mutaties in het p53-gen, die werden geïdentificeerd bij verschillende passages tijdens in vitro vermeerdering. Bij passage nummer 8 werd een zwak extra signaal gedetecteerd in de SSCP-analyse (single-strand conformation polymorphism), wat duidt op de aanwezigheid van een p53-mutatie. Bij passage nummer 38 werden twee verschillende p53 puntmutaties geïdentificeerd: een G:C naar C:G transversie bij codon 135 en een C:G naar G:C transversie bij codon 138 van exon 5. Deze mutaties leidden tot aminozuurveranderingen in het aminozuur van het exon. Deze mutaties leidden tot aminozuurveranderingen van respectievelijk alanine naar proline en cysteïne naar tryptofaan.

De Hep-70.4 cellijn vertoont een morfologisch fenotype dat aanzienlijk varieert tijdens de vermeerdering. Sommige sublijnen vertonen een epitheliale morfologie, terwijl andere een fibroblastachtig uiterlijk hebben. Deze heterogeniteit weerspiegelt de complexe aard van de cellijn en zijn aanpassingsvermogen onder verschillende kweekomstandigheden. De aanwezigheid van zowel normale als gemuteerde p53-allelen in de eerste passages suggereert dat de mutaties een selectief groeivoordeel geven, waardoor gemuteerde klonen na verloop van tijd overheersen.

Intermediate filament protein analysis of the Hep-70.4 cell line revealed the expression of simple keratins K8 and K18, which are typical of normal liver cells, as well as vimentin and keratin K19 to varying degrees. Deze eiwitpatronen bevestigen de hepatocytische oorsprong van de cellijn en de classificatie als hepatoomlijn. De genomische stabiliteit van Hep-70.4 werd verder beoordeeld door middel van DNA fingerprint analyse, die geen belangrijke structurele afwijkingen liet zien, hoewel veranderingen in de relatieve intensiteit van bepaalde banden werden waargenomen met toenemende passage aantallen.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring