Hep-70.4

Hep-70.4 hepatomcellelinjen er avledet fra en leversvulst fra mus, nærmere bestemt fra musestammen C57BL/6J. Denne cellelinjen er kjent for sine mutasjoner i p53-genet, som ble identifisert ved forskjellige passeringer under in vitro-oppformering. Ved passasje nummer 8 ble det oppdaget et svakt tilleggssignal i SSCP-analysen (single-strand conformation polymorphism), noe som indikerte tilstedeværelsen av en p53-mutasjon. Ved passasje nummer 38 ble det identifisert to forskjellige punktmutasjoner i p53: en G:C til C:G-transversjon ved kodon 135 og en C:G til G:C-transversjon ved kodon 138 i ekson 5. Disse mutasjonene førte til aminosyreendringer fra henholdsvis alanin til prolin og cystein til tryptofan.

Hep-70.4-cellelinjen viser en morfologisk fenotype som varierer betydelig i løpet av formeringen. Noen sublinjer har en epitelmorfologi, mens andre har et fibroblastlignende utseende. Denne heterogeniteten gjenspeiler cellelinjens komplekse natur og dens tilpasningsevne under ulike dyrkingsforhold. Tilstedeværelsen av både normale og muterte p53-alleler i de tidlige passasjene tyder på at mutasjonene gir en selektiv vekstfordel, noe som fører til en overvekt av muterte kloner over tid.

Analyse av intermediære filamentproteiner i Hep-70.4-cellelinjen avslørte uttrykk av de enkle keratinene K8 og K18, som er typiske for normale leverceller, samt vimentin og keratin K19 i varierende grad. Disse proteinmønstrene bekrefter cellelinjens hepatocytiske opprinnelse og klassifiseringen som en hepatomlinje. Den genomiske stabiliteten til Hep-70.4 ble videre vurdert ved hjelp av DNA-fingeravtrykksanalyse, som ikke avslørte noen større strukturelle abnormiteter, selv om det ble observert endringer i den relative intensiteten til enkelte bånd med økende passasjeantall.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring