Hep-70.4

Die Hep-70.4 Hepatom-Zelllinie stammt von einem Lebertumor der Maus, genauer gesagt vom Mausstamm C57BL/6J. Diese Zelllinie zeichnet sich durch Mutationen im p53-Gen aus, die bei verschiedenen Passagen während der In-vitro-Vermehrung festgestellt wurden. Bei Passage Nummer 8 wurde in der Einzelstrang-Konformations-Polymorphismus-Analyse (SSCP) ein schwaches zusätzliches Signal festgestellt, das auf das Vorhandensein einer p53-Mutation hinweist. Bei Passage Nummer 38 wurden zwei verschiedene p53-Punktmutationen identifiziert: eine G:C-zu-C:G-Transversion am Codon 135 und eine C:G-zu-G:C-Transversion am Codon 138 von Exon 5. Diese Mutationen führten zu einem Aminosäurewechsel von Alanin zu Prolin bzw. von Cystein zu Tryptophan.

Die Hep-70.4-Zelllinie weist einen morphologischen Phänotyp auf, der während ihrer Vermehrung stark variiert. Einige Sublinien weisen eine epitheliale Morphologie auf, während andere ein fibroblastenähnliches Erscheinungsbild zeigen. Diese Heterogenität spiegelt die komplexe Natur der Zelllinie und ihre Anpassungsfähigkeit unter verschiedenen Kulturbedingungen wider. Das Vorhandensein sowohl normaler als auch mutierter p53-Allele in den frühen Passagen deutet darauf hin, dass die Mutationen einen selektiven Wachstumsvorteil verschaffen, der im Laufe der Zeit zur Dominanz der mutierten Klone führt.

Die Analyse der Intermediärfilament-Proteine der Hep-70.4-Zelllinie ergab die Expression der einfachen Keratine K8 und K18, die für normale Leberzellen typisch sind, sowie von Vimentin und Keratin K19 in unterschiedlichem Ausmaß. Diese Proteinmuster bestätigen den hepatozytären Ursprung der Zelllinie und ihre Klassifizierung als Hepatom-Linie. Die genomische Stabilität von Hep-70.4 wurde außerdem durch eine DNA-Fingerprint-Analyse bewertet, die keine größeren strukturellen Anomalien ergab, obwohl mit zunehmender Passagezahl Veränderungen in der relativen Intensität bestimmter Banden beobachtet wurden.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung