Hep-70.4

Linia komórek wątrobiaka Hep-70.4 pochodzi z guza wątroby myszy, w szczególności ze szczepu myszy C57BL/6J. Ta linia komórkowa wyróżnia się mutacjami w genie p53, które zostały zidentyfikowane w różnych pasażach podczas rozmnażania in vitro. Przy przejściu numer 8 wykryto słaby dodatkowy sygnał w analizie polimorfizmu konformacji pojedynczej nici (SSCP), wskazujący na obecność mutacji p53. Do pasażowania numer 38 zidentyfikowano dwie różne mutacje punktowe p53: konwersję G:C do C:G w kodonie 135 i konwersję C:G do G:C w kodonie 138 eksonu 5. Mutacje te doprowadziły do zmiany aminokwasów odpowiednio z alaniny na prolinę i cysteiny na tryptofan.

Linia komórkowa Hep-70.4 wykazuje fenotyp morfologiczny, który zmienia się znacząco podczas jej namnażania. Niektóre podlinie wykazują morfologię nabłonkową, podczas gdy inne wykazują wygląd podobny do fibroblastów. Ta heterogeniczność odzwierciedla złożoną naturę linii komórkowej i jej zdolność adaptacji w różnych warunkach hodowli. Obecność zarówno normalnych, jak i zmutowanych alleli p53 we wczesnych pasażach sugeruje, że mutacje zapewniają selektywną przewagę wzrostu, prowadząc z czasem do przewagi zmutowanych klonów.

Analiza białek włókien pośrednich linii komórkowej Hep-70.4 ujawniła ekspresję prostych keratyn K8 i K18, które są typowe dla prawidłowych komórek wątroby, a także wimentyny i keratyny K19 w różnym stopniu. Te wzorce białkowe potwierdzają hepatocytarne pochodzenie linii komórkowej i jej klasyfikację jako linii hepatoma. Stabilność genomowa Hep-70.4 była dalej oceniana poprzez analizę odcisków palców DNA, która nie ujawniła żadnych poważnych nieprawidłowości strukturalnych, chociaż zaobserwowano zmiany we względnej intensywności niektórych pasm wraz ze wzrostem liczby pasaży.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym