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Cellule ACHN
Tessuto
Rene
Malattia
Adenocarcinoma

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Cellule ACHN

Cell line · Codice prodotto 300117

La linea cellulare ACHN deriva da un versamento pleurico maligno di un uomo caucasico di 22 anni affetto da adenocarcinoma renale con metastasi diffuse. La linea cellulare...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare ACHN deriva dal versamento pleurico maligno di un uomo caucasico di 22 anni affetto da adenocarcinoma renale ampiamente metastatico. La linea cellulare è stata creata nel novembre 1979, in seguito alla semina diretta delle cellule tumorali in fiasche di coltura contenenti Eagle's MEM con 10% FBS. Per un periodo di 150 giorni, le cellule sono state mantenute e passate in vitro. Successivamente, le cellule sono state inoculate per via sottocutanea in topi nudi, dove hanno formato tumori palpabili e localmente invasivi entro quattro settimane. Questa linea cellulare è tumorigenica, come dimostrato dalla sua capacità di indurre tumori nel 100% dei topi nudi (5/5) inoculati con 107 cellule, con tumori che si sviluppano entro 21 giorni.

Le cellule ACHN sono caratterizzate da un modello di crescita aderente ed esprimono isoenzimi specifici, tra cui G6PD (tipo B). Questa linea cellulare è nota anche per la sua risposta agli interferoni umani e agli induttori di interferoni, che la rendono particolarmente utile per gli studi antiproliferativi. Sia le cellule ACHN originali che quelle recuperate dai tumori nei topi nudi mostrano un'inibizione della crescita in presenza di interferoni umani, evidenziando la loro potenziale applicazione negli studi che esplorano l'efficacia delle terapie a base di interferoni per il cancro renale.

La linea cellulare ACHN è uno strumento prezioso per la ricerca sul cancro, in particolare nel contesto dell'adenocarcinoma renale. Serve come modello importante per lo studio della tumorigenicità, del comportamento metastatico e degli effetti degli interferoni sulla proliferazione delle cellule tumorali. La sua capacità di formare tumori in vivo e di rispondere al trattamento con interferoni fornisce una solida piattaforma per lo sviluppo e la sperimentazione di nuovi approcci terapeutici mirati al carcinoma a cellule renali.

Tessuto
Rene
Malattia
Adenocarcinoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi
Tempo di raddoppio
30 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
ACHN (numero di catalogo Cytion 300117)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1067

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
CAIx- (anidrasi carbonica Ix)
Espressione proteica
P53 positivo
Isoenzimi
CAIx-

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2 darà origine a un monostrato confluente entro 4 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
22 anni
Etnia
Caucasico