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Células ACHN
Tecido
Rim
Doença
Adenocarcinoma

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Células ACHN

Cell line · Número do produto 300117

A linha celular ACHN foi obtida a partir do derrame pleural maligno de um homem caucasiano de 22 anos com adenocarcinoma renal com metástases generalizadas. A linha celular...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular ACHN é derivada do derrame pleural maligno de um homem caucasiano de 22 anos com adenocarcinoma renal amplamente metastático. A linha celular foi estabelecida em novembro de 1979, após a semeadura direta das células cancerosas em frascos de cultura contendo Eagle's MEM com 10% de FBS. Durante um período de 150 dias, as células foram mantidas e passadas in vitro. Posteriormente, as células foram inoculadas por via subcutânea em ratos nude, onde formaram tumores palpáveis e localmente invasivos em quatro semanas. Esta linha celular é tumorigénica, como evidenciado pela sua capacidade de induzir tumores em 100% dos ratos nude (5/5) inoculados com 107 células, com tumores a desenvolverem-se em 21 dias.

As células ACHN são caracterizadas por um padrão de crescimento aderente e expressam isoenzimas específicas, incluindo G6PD (tipo B). Esta linha celular também é conhecida pela sua resposta a interferões humanos e indutores de interferão, tornando-a particularmente útil para estudos antiproliferativos. Tanto as células ACHN originais como as recuperadas de tumores em ratos nude demonstram inibição do crescimento na presença de interferões humanos, destacando a sua potencial aplicação em estudos que exploram a eficácia de terapias à base de interferão para o cancro renal.

A linha celular ACHN é uma ferramenta valiosa para a investigação do cancro, especialmente no contexto do adenocarcinoma renal. Ela serve como um modelo importante para o estudo da tumorigenicidade, do comportamento metastático e dos efeitos dos interferões na proliferação de células cancerígenas. A sua capacidade de formar tumores in vivo e responder ao tratamento com interferão fornece uma plataforma robusta para o desenvolvimento e teste de novas abordagens terapêuticas direcionadas ao carcinoma de células renais.

Tecido
Rim
Doença
Adenocarcinoma

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sim, em ratinhos nus
Tempo de duplicação
30 horas

04Identificadores

Referência
ACHN (número de catálogo Cytion 300117)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1067

05Expressão e suscetibilidade

Receptores expressos
CAIx- (anidrase carbónica Ix)
Expressão proteica
P53 positivo
Isoenzimas
CAIx-

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
EMEM (MEM Eagle), com: 2 mM L-Glutamina, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS (número de artigo Cytion 820100a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS e 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm² resultará numa monocamada confluente em 4 dias.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
22 anos
Etnia
Caucasiano